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乌头碱对人诱导多能干细胞衍生心肌细胞中钙信号的影响 被引量：1
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作者 阎美卉 于婷婷 李森 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第1期8-14,共7页
该文旨在探究乌头碱对人诱导多能干细胞衍生心肌细胞(human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSCs-CMs)中钙信号的影响。用CCK-8法测定乌头碱对hiPSCsCMs细胞存活率的影响;通过共聚焦显微镜的明场模式记录不... 该文旨在探究乌头碱对人诱导多能干细胞衍生心肌细胞(human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSCs-CMs)中钙信号的影响。用CCK-8法测定乌头碱对hiPSCsCMs细胞存活率的影响;通过共聚焦显微镜的明场模式记录不同加药时间和浓度条件下乌头碱对心肌细胞的搏动频率的影响;通过共聚焦显微镜荧光系统记录乌头碱对细胞自发及1、2、3 Hz电刺激条件下钙信号的影响;使用咖啡因诱导心肌细胞肌质网中的钙离子,令其全部被释放出来,以探究乌头碱对钙库的影响。乌头碱在加药浓度为9μmol/L、加药时间为6 h时将产生毒性作用,可对hiPSCs-CMs细胞存活率造成显著影响;乌头碱能够明显加快hiPSCs-CMs搏动频率,最大搏动频率与加药时间和浓度相关;乌头碱能够明显降低hiPSCs-CMs自发及1、2、3 Hz电刺激条件下钙瞬变的振幅;经0.3μmol/L乌头碱作用3 h的hiPSCs-CMs的钙库总钙量下降;且乌头碱对hiPSCs-CMs搏动频率及钙信号的影响具有洗脱作用。乌头碱能够加快hiPSCs-CMs搏动频率,降低钙瞬变振幅与钙库总钙量,并由此影响心肌功能。 展开更多
关键词 钙信号 乌头碱 hipscs-cms 中药注射剂 心脏毒性
原文传递
氯化钴诱导hiPSC-CMs体外缺氧模型的建立 被引量：3
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作者 朱梦怡 柯敏霞 +2 位作者 王皓 齐念民 吴月红 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2021年第1期84-93,共10页
为进一步了解缺氧性心血管疾病的发病机制,通过使用CHIR99021和IWP2抑制剂的组合诱导和单层诱导分化方法获得人诱导性多能干细胞来源心肌细胞(Human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs),并在hiPSC-CMs... 为进一步了解缺氧性心血管疾病的发病机制,通过使用CHIR99021和IWP2抑制剂的组合诱导和单层诱导分化方法获得人诱导性多能干细胞来源心肌细胞(Human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs),并在hiPSC-CMs的培养系统中加入氯化钴进行处理,通过CCK-8检测、Hoechst荧光染色分析、台盼蓝染色分析、qRT-PCR检测和Western blot检测确定最佳处理浓度和时间。CCK-8检测结果显示,低浓度CoCl2(100、300μmol/L)处理显著提高hiPSC-CMs细胞活力(p<0.01),高浓度CoCl2(900、1200μmol/L)处理显著抑制hiPSC-CMs细胞活力(p<0.001),并且作用趋势呈剂量和时间依赖性,600μmol/L CoCl2处理对于hiPSC-CMs的细胞活力影响不明显(p<0.05);Hoechst荧光染色结果显示,CoCl2处理24 h和48 h后,低浓度CoCl2处理对细胞无影响,Hoechst染色阳性细胞数量少(p>0.05),高浓度CoCl2处理剂量依赖性增加阳性细胞数量(p<0.0001),且48 h处理组的结果与24 h处理组无显著差异;台盼蓝染色结果表明,CoCl2处理可剂量依赖性促进细胞凋亡;CoCl2处理后,促凋亡相关基因Bax和蛋白Bax表达呈剂量依赖性上调(p<0.001),抗凋亡相关基因Bcl-2和蛋白Bcl-2表达呈剂量依赖性下调(p<0.001);CoCl2处理可剂量依赖性促进hiPSC-CMs细胞的凋亡。通过qRT-PCR检测和Western blot检测确定600μmol/L为最佳处理浓度,24 h为最佳处理时间,证明了该处理条件既不影响hiPSC-CMs细胞活力又可致其缺氧凋亡,建立了氯化钴诱导的hiPSC-CMs体外缺氧模型。论文结果为体外探索缺氧引起的心血管疾病的发病机理和寻找新的治疗靶点与药物提供了可靠的工具。 展开更多
关键词 缺氧性心血管疾病 人诱导性多能干细胞来源心肌细胞(hipsc-cms) 氯化钴(CoCl2) 心肌缺氧损伤模型
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