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转录因子T-bet在单纯疱疹病毒感染小鼠外周血中的表达 被引量：2
1
作者 夏丽坤 才娜 +2 位作者 朱英明 周晶 贾晓君 《眼科新进展》 CAS 2006年第11期818-822,共5页
目的 研究单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus type 1，HSV-1）感染小鼠眼球以后转录因子T—bet在小鼠外周血中的表达，探讨T—bet的表达与单纯疱疹性角膜基质炎之间的关系。方法　将10^6空斑单位（plague forming unit，PFU）... 目的 研究单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus type 1，HSV-1）感染小鼠眼球以后转录因子T—bet在小鼠外周血中的表达，探讨T—bet的表达与单纯疱疹性角膜基质炎之间的关系。方法　将10^6空斑单位（plague forming unit，PFU）·L^-1的HSV-1 Mckrae毒株接种于BAIB／c鼠的角膜上建立单纯疱疹性角膜基质炎（herpetic stromal keratitis,HSK）动物模型，分别于角膜接种病毒后的第1d、3d、7d、10d、14d、21d及28d，用毛细管取小鼠的左眼眼眶静脉窦血1mL，提取淋巴细胞，用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测T-bet mRNA的表达水平；在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜的临床变化，组织学检查角膜的病理改变；用ELISA法检测T-bet蛋白在角膜组织中的表达水平。结果 BALB／c鼠的角膜接种HSV-1后的1～5d，角膜擦拭液中均检测出HSV-1复制，表明小鼠感染了单纯疱疹病毒；裂隙灯显微镜观察：HSV-1感染鼠的角膜后，小鼠均患了急性角膜上皮炎，并于感染后1周内痊愈。其中81．7％（49／60）的小鼠自感染病毒后10d起开始出现角膜基质炎改变，表现为灶状角膜基质混浊，局部角膜新生血管化，角膜基质内大量的炎性细胞浸润。角膜基质混浊逐渐进展，在病毒感染后的第14～21d达到高峰。RT-PCR检测的数据显示：未感染HSV-1的对照组小鼠的外周血中不表达T-bet mRNA；HSV-1感染小鼠的早期即可诱导T—bet mRNA在小鼠外周血中的表达，并且表达持续存在；T—bet mRNA表达的高峰时间（10～28d），位于角膜基质炎发生和发展的过程中。ELISA法检测角膜提取物中的T-bet蛋白显示了相似的结果。结论 HSV-1上调T-bet mRNA在小鼠外周血中的表达；T-bet的表达与角膜基质炎的发生和发展密切相关。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 T-BET 外周血 角膜基质炎 角膜
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一次PCR扩增单纯疱疹和巨细胞病毒基因的检测方法 被引量：1
2
作者 刘明军 黄俊成 +3 位作者 武坚 李文蓉 孙荷 郭志勤 《生物技术》 CAS CSCD 1999年第3期45-47,共3页
宫内感染是影响优生优育质量的一个重要因素，由病毒引起的宫内感染主要有以下四类病原：ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＴＯＸＯ和风疹病毒（ＲＶ），其中ＨＳＶ和ＣＭＶ的感染率较高。孕期这两种病原的感染会影响胎儿的正常发育，严重的可导致流产... 宫内感染是影响优生优育质量的一个重要因素，由病毒引起的宫内感染主要有以下四类病原：ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＴＯＸＯ和风疹病毒（ＲＶ），其中ＨＳＶ和ＣＭＶ的感染率较高。孕期这两种病原的感染会影响胎儿的正常发育，严重的可导致流产甚至胎儿畸形。目前已有针对这两种病... 展开更多
关键词 宫内感染 单纯疱疹 PCR扩增 巨细胞病毒 检测
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携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定
3
作者 朱冰 杨建茹 +5 位作者 江跃全 陈诗奉 付新平 张力平 汪天虎 程波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1471-1474,共4页
目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusⅠ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV... 目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusⅠ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因质粒(HSV-UL38P-GALV.fus),无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus质粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治疗对照质粒(HSV-CMVP-EGFP),分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1。方法:扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒。重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法。Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达。结果:成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml1,×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml。受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。结论:成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。 展开更多
关键词 I型单纯疱疹病毒 长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白 基因重组
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