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HSV-tk基因治疗靶向载体的构建及特异性表达分析 被引量：11
1
作者 刘晓平 李宝金 张超 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期179-184,共6页
背景与目的:阻断肿瘤组织内血管生成和血管化是一个很有发展前景的灭瘤途径之一。胸苷激酶自杀基因系统(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-tk/GCV)能有效杀伤血管内皮细胞,目前多采用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)作为启动子... 背景与目的:阻断肿瘤组织内血管生成和血管化是一个很有发展前景的灭瘤途径之一。胸苷激酶自杀基因系统(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-tk/GCV)能有效杀伤血管内皮细胞,目前多采用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)作为启动子,但其杀伤缺乏特异性。KDR(kinasedomaininsertcontainingreceptor)是血管内皮生长因子的两种受体之一,它在肿瘤血管内皮细胞中高表达,而在正常组织中呈低表达。本研究是构建KDR启动子介导的HSV-tk重组腺病毒、并对其内皮细胞特异性表达作用进行分析。方法:采用pAdeasy系统,按定向克隆方法将KDR-tk片段正向插入表达载体的多克隆位点间,构建受KDR启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外感染人脐静脉血管内皮细胞系(humanumbilicalvenousendothelialcells,HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2。用更昔洛韦(ganciclovir,GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况。结果:经限制性酶切分析,RT-PCR及PCR方法鉴定,插入基因大小、位置、方向正确。病毒滴度为1×1010pfu/ml。在感染复数(multiplicityofinfection,MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50μg/ml时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P<0.01)。结论:构建的含KDR-tk重组腺病毒可在血管内皮细胞中特异性地表达HSV-tk。 展开更多
关键词 KDR启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 靶向基因治疗 腺病毒 血管内皮细胞 HEPG2细胞
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胰腺癌的基因治疗 被引量：10
2
作者 冷建军 陈玉强 冷希圣 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第8期916-918,共3页
胰腺癌仅占恶性肿瘤的2%,却占癌症死亡的第4位.迄今为止,胰腺癌的切除率从未超过20%,五年生存率低于5%.对胰腺癌采取多模式综合治疗,虽有一定的疗效,也远不令人满意.随着分子生物学研究的深入,对胰腺癌采用基因治疗给我们展示了新的前景... 胰腺癌仅占恶性肿瘤的2%,却占癌症死亡的第4位.迄今为止,胰腺癌的切除率从未超过20%,五年生存率低于5%.对胰腺癌采取多模式综合治疗,虽有一定的疗效,也远不令人满意.随着分子生物学研究的深入,对胰腺癌采用基因治疗给我们展示了新的前景,是胰腺癌当代治疗的一个重要方面.广大学者也一直在不断的探索有效的治疗途径,本文试从以下几个方面综述胰腺癌基因治疗近年研究进展.1 WTp53基因替代疗法p53基因是目前明确的最容易产生突变的抑癌基因,突变的p53不仅失去正常野生型 p53(WTp53)的生长抑制作用, 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 治疗 基因序法 基因 P53
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B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用 被引量：6
3
作者 王烈 卫立辛 +5 位作者 王飞 曹贵松 钱其军 杨广顺 郭亚军 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期229-232,共4页
目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88... 目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88细胞株建立乳腺癌动物模型 ,随机分为对照组、TK组、B7组及 TK/B7组 ,每组 2 0只。 2周后于瘤体内分别注射转染有空载体及不同的重组载体的乳腺癌细胞 ,3d后于腹腔内连续注射无环鸟苷 (GCV) 15 d(5 0 mg· kg- 1· d- 1 ) ,观察肿瘤体积、荷瘤生存时间的变化和组织病理改变。结果 :B7组、TK/B7组肿瘤内淋巴细胞浸润明显增多。与对照组相比 ,TK组、B7组肿瘤生长减缓 ,体积减小 ,荷瘤生存期延长 ,两组间均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,而 TK /B7组尤为显著 (P<0 .0 1) ;TK组与 B7组相比则无显著差异。 结论 :HSV- TK,B7基因联合治疗乳腺癌动物模型 ,能直接杀伤肿瘤 ,抑制肿瘤生长 ,延长荷瘤动物的生存期。 展开更多
关键词 基因治疗 乳腺癌 B7基因 HSV-TK基因
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腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶表达系统对肝癌细胞的选择性杀伤作用 被引量：4
4
作者 王孟龙 殷正丰 +2 位作者 吴宗娣 王率 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期12-14,共3页
目的 :构建携带受血管内皮生长因子 (VEGF)启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- tk)的重组腺病毒载体 ,并探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞的特异性杀伤活性。方法 :采用 Ad Easy System构建携带受 VEGF启动子或巨细胞病毒... 目的 :构建携带受血管内皮生长因子 (VEGF)启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- tk)的重组腺病毒载体 ,并探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞的特异性杀伤活性。方法 :采用 Ad Easy System构建携带受 VEGF启动子或巨细胞病毒 (CMV)启动子调控 tk基因表达的 Ad VEGF- tk和 Ad CMV- tk,这两种重组腺病毒载体在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染正常肝细胞系 L 0 2和肝癌细胞系 Hep G2 ,并用不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理后以 MTT法检测受染细胞的增殖情况。 结果 :Ad VEGF- tk的病毒滴度为 1× 10 1 0 pfu/ ml,Ad CMV- tk为 5× 10 1 0 pfu/ ml。 L 0 2细胞感染 Ad VEGF- tk后对GCV的敏感性无明显改变 ,而 Hep G2细胞感染 Ad VEGF- tk后对 GCV的敏感性明显增加 ,在感染复数 (MOI)为 10 0并用 5 0μg/ m l GCV处理时 ,则有 90 %以上 Hep G2细胞被杀死 ;而 Ad CMV- tk可杀死 95 %Hep G2细胞和 80 %以上 L 0 2细胞。 结论 :VEGF启动子调控的 HSV- tk基因表达可特异性地杀死肝癌细胞 ,同时对正常肝细胞几无影响。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 腺病毒 肝癌 细胞 VEGF 启动子
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聚焦超声介导阳离子脂质体携带HSV-TK增强基因转染及联合更昔洛韦对大鼠胶质瘤C6细胞的影响 被引量：4
5
作者 张怡 潘敏 +4 位作者 邓志婷 李文娟 方义杰 严飞 洪国斌 《中华实用诊断与治疗杂志》 2018年第5期417-421,共5页
目的探讨聚焦超声对载单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因阳离子脂质体体外基因转染的影响,及其联合更昔洛韦(ganciclovir,GCV)对大鼠脑胶质瘤C6细胞的影响。方法制备含HSV-TK基因质粒,利用阳离... 目的探讨聚焦超声对载单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因阳离子脂质体体外基因转染的影响,及其联合更昔洛韦(ganciclovir,GCV)对大鼠脑胶质瘤C6细胞的影响。方法制备含HSV-TK基因质粒,利用阳离子脂质体转染至对数期大鼠胶质瘤C6细胞,并随机分为脂质体组和超声1、2、3、4min组,脂质体组加入含9μg阳离子脂质体-HSV-TK基因质粒的100μL培养液;超声1、2、3、4min组在脂质体组基础上分别给予体外超声(1 MHz,功率3W/cm2,电压150mvPP)辐照1、2、3、4min。5组C6细胞均于37℃、体积分数5%CO2培养箱,含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养液,继续培养48h。转染48h后,荧光显微镜下观察载HSV-TK基因阳离子脂质体转染效率。将对数生长期C6细胞接种于96孔板,依据转染效率实验结果分为GCV组、超声3min+GCV组,超声3 min+GCV组加入9μg阳离子脂质体-HSV-TK基因质粒的100μL培养液,并超声辐照3min,GCV组转染空白阳离子脂质体;转染24h后,2组均分别加入0.1、1、10、50、100、1 000mg/L GCV作用48h,采用分光光度法检测C6细胞存活率。结果转染48h后,超声1、2、3、4min组C6细胞HSV-TK基因转染效率[(0.14±0.07)%、(1.39±0.11)%、(19.61±4.80)%、(18.81±7.92)%]均高于脂质体组[(0.05±0.01)%](P<0.05),且超声3、4min组转染效率高于超声1、2min组,超声2 min组转染效率高于超声1 min组(P<0.05),超声3 min组与超声4min组转染效率比较差异无统计学意义(P>0.05);随GCV浓度增加,GCV组和超声3min+GCV组C6细胞存活率均逐渐降低;GCV为50、100、1 000mg/L时,超声3min+GCV组C6细胞存活率[(85.88±1.80)%、(75.51±1.43)%、(68.17±5.26)%]均低于GCV组[(95.40±0.85)%、(92.62±4.50)%、(83.66±0.98)%](P<0.05);GCV为0.1、1、10mg/L时,超声3min+GCV组C6细胞存活率[(99.32±3.01)%、(97.01±1.53)%、(94.50±1.15)%]与GCV组[(99.56±5.14)%、(98.60±5.18)%、(97.39±8.06)%]比较差异均无统计学意义(P 展开更多
关键词 脑胶质瘤 C6细胞 单纯疱疹病毒胸苷激酶 阳离子脂质体 基因转染 聚焦超声 更昔洛韦 大鼠
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人Midkine启动子驱动的HSV-TK自杀基因体外抗肝癌作用 被引量：3
6
作者 陆春明 薛彦俊 +1 位作者 封书德 姜宁 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第20期29-32,共4页
目的观察以人Midkine(MK)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统在体外对人肝癌细胞的杀伤效应。方法以含有人MK启动子调控的HSV-TK基因的重组腺病毒分别感染体外培养的甲胎蛋白(AFP)阳性人肝癌细胞BEL... 目的观察以人Midkine(MK)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统在体外对人肝癌细胞的杀伤效应。方法以含有人MK启动子调控的HSV-TK基因的重组腺病毒分别感染体外培养的甲胎蛋白(AFP)阳性人肝癌细胞BEL-7402和AFP阴性人肝癌细胞SMMC-7721,RT-PCR法检测HSV-TK基因在上述两种细胞中的转录表达,观察GCV对人肝癌细胞的杀伤作用。结果GCV在体外对重组腺病毒感染的BEL-7402及SMMC-7721均有明显的杀伤作用,又以前者为著。相同的病毒滴度,其杀伤作用随着GCV浓度的增高而增强。均具有旁观者效应。结论在体外表现HSV-TK基因的AFP阳性及阴性人肝癌细胞均可被人MK启动子调控的自杀基因HSV-TK杀伤。 展开更多
关键词 MIDKINE 启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 丙氧鸟苷 肝肿瘤
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pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合γ射线放疗鼻咽癌的体内实验 被引量：3
7
作者 邱前辉 孙伟 +1 位作者 陈少华 黄晓明 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期414-416,共3页
目的:探讨pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合γ射线放疗人鼻咽癌的杀伤效应。方法:分别以pAdKDR-tk/GCV、60Coγ射线放疗及两者联合治疗裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型,比较疗效;利用肿瘤生长曲线及肿瘤抑瘤率评价该自杀基因系统联合放疗的疗效。... 目的:探讨pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合γ射线放疗人鼻咽癌的杀伤效应。方法:分别以pAdKDR-tk/GCV、60Coγ射线放疗及两者联合治疗裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型,比较疗效;利用肿瘤生长曲线及肿瘤抑瘤率评价该自杀基因系统联合放疗的疗效。结果:单纯基因治疗与放疗对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为58.43%和70.88%,而基因治疗与放疗联合应用的抑瘤率达到84.39%,与前两者比较,差异有统计学意义(P<0.01);第21天基因治疗与放疗联合治疗组肿瘤平均体积仅为对照组的13.5%,明显低于单纯基因治疗与放疗。结论:pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合放疗的疗效较单一治疗方案有显著的提高,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮自杀基因联合放疗研究奠定了良好的理论和临床基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 鼻咽肿瘤 自杀基因治疗 放射治疗
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转染HSV-TK的内皮祖细胞的靶向血管新生治疗胶质瘤体内外实验 被引量：3
8
作者 张军霞 赵鹏 +4 位作者 李瑞 石磊 程子昊 尤永平 傅震 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期170-174,共5页
目的 探讨转染单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase，HSV—TK）的内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）靶向血管新生及对胶质瘤的治疗作用。方法 将转染HSV-TK的EPCs和脐静脉内皮细胞、U87与U25... 目的 探讨转染单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase，HSV—TK）的内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）靶向血管新生及对胶质瘤的治疗作用。方法 将转染HSV-TK的EPCs和脐静脉内皮细胞、U87与U251胶质瘤细胞，以不同比例混合，经更昔洛韦（ganciclovir，GCV）作用，观察其旁观者效应。将转染HSV—TK的EPCs经尾静脉注入裸鼠皮下胶质瘤模型，观察各组肿瘤体积的变化，免疫组化检测各组中血管情况。结果 转染HSV—TK的EPCs对内皮细胞与胶质瘤细胞的旁观者效应，呈现时间依赖性与细胞比例依赖性。静脉注射转染后的EPCs，对裸鼠皮下胶质瘤生长具有明显抑制作用，并抑制血管生成。结论 转染HSV-TK的EPCs可能通过靶向血管新生来抑制胶质瘤生长。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 内皮祖细胞 胶质瘤 旁观者效应 血管新生
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全反式维甲酸提高HSV-TK/GCV系统旁观者效应治疗髓母细胞瘤的研究 被引量：2
9
作者 李少一 王志超 +3 位作者 高芸 王国栋 郭文昌 刘云会 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2013年第18期2986-2988,共3页
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因疗法在治疗髓母细胞瘤时的协同效应。方法:采用MTT法观察不同浓度ARTA对细胞增殖的抑制作用,划痕标记染料示踪技术检测细胞间缝隙连接通讯情况,Westernblot检测通过诱导... 目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因疗法在治疗髓母细胞瘤时的协同效应。方法:采用MTT法观察不同浓度ARTA对细胞增殖的抑制作用,划痕标记染料示踪技术检测细胞间缝隙连接通讯情况,Westernblot检测通过诱导接合蛋白43(Connexin43,Cx43)的表达。结果:3μmol/L的ATRA可以诱导Daoy细胞的Cx43的表达上调,同时使细胞间隙连接通讯(GJIC)增强约3倍。以不同比例(1∶1～1∶16)体外共培养C17.2tk细胞和Daoy细胞,ATRA能显著增强抗肿瘤效应。结论:HSV-tk/GCV自杀基因疗法治疗Daoy髓母细胞瘤中,ATRA可以通过增强旁观者效应来加强该系统的肿瘤杀伤效应。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观者效应 髓母细胞瘤
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8-Br-cAMP提高HSV-TK/GCV自杀基因系统旁观者效应的研究 被引量：1
10
作者 黄洪章 王安训 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2002年第1期5-8,共4页
目的 探讨8-Br-cAMP对单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）/丙氧鸟苷（GCV）系统旁观者效应的增强作用及机理。方法 应用FCM、透射电镜检测8-Br-cAMP对口腔鳞癌细胞（Tca8113）、间隙连接蛋白43（Cx43）及间隙连接的诱导分化作用;采用析因... 目的 探讨8-Br-cAMP对单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）/丙氧鸟苷（GCV）系统旁观者效应的增强作用及机理。方法 应用FCM、透射电镜检测8-Br-cAMP对口腔鳞癌细胞（Tca8113）、间隙连接蛋白43（Cx43）及间隙连接的诱导分化作用;采用析因分析法分析8-Br-cAMP对HSV-TK/GCV系统旁观者效应的影响。结果 口腔鳞癌细胞经 10-4mol/L 8-Br-CAMP处理后:FCM检测显示 Cx43表达阳性的细胞由治疗前的（4.8 ± 0.26）％上升到（21.3±0.65）％,两组比较P<0.001;透射电镜显示细胞超微结构出现分化,细胞间出现间隙连接;MTT检测显示增强了HSV-TK/GCV系统治疗时的旁观者效应,两者间存在协同关系。结论8-Br-cAMP可诱导分化口腔鳞癌细胞并显著提高HSV-TK/GCV系统治疗时的旁观者效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 8-BR-CAMP 旁观者效应 间隙连接蛋白 肿瘤
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基因修饰乳酸乳球菌作为药物发送载体系统治疗黑色素瘤初探 被引量：2
11
作者 李轶杰 刘欢欢 张富春 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期176-179,190,共5页
[目的]探讨携带自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的重组乳球菌静脉注射后靶向实体肿瘤组织定殖及联合更昔洛韦(GCV)治疗小鼠黑色素瘤的可能性。[方法]荷瘤小鼠静脉注射乳球菌3d或7d后,将小鼠脾肺肝肾器官和肿瘤组织细胞匀浆后涂布... [目的]探讨携带自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的重组乳球菌静脉注射后靶向实体肿瘤组织定殖及联合更昔洛韦(GCV)治疗小鼠黑色素瘤的可能性。[方法]荷瘤小鼠静脉注射乳球菌3d或7d后,将小鼠脾肺肝肾器官和肿瘤组织细胞匀浆后涂布于筛选培养基上,以乳酸菌数量的评价静脉发送乳球菌靶向定殖肿瘤细胞的可能性。以携带HSVtk的重组乳酸乳球菌经静脉途径处理荷瘤小鼠后,通过观测小鼠肿瘤体积变化及小鼠存活率评价相关抗肿瘤效果。[结果]静脉注射乳酸乳球菌3d后在小鼠脾肺肝肾和肿瘤组织内均有乳球菌检出,而7d后仅在肿瘤组织中发现有乳酸乳球菌的分布。与对照相比,静脉注射LL-HSV-tk联合GCV处理能显著抑制小鼠体内肿瘤的生长。[结论]静脉发送携带治疗性分子的乳酸乳球菌能靶向实体肿瘤组织定殖并抑制肿瘤的生长。 展开更多
关键词 肿瘤靶向 乳酸乳球菌 单纯疱疹病毒胸苷激酶 药物发送系统
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腺相关病毒介导HSV-tk/GCV系统对晶状体上皮细胞的旁观者效应及机制 被引量：1
12
作者 丁芝祥 彭燕一 +2 位作者 邱梅园 张玉明 曾新生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第8期708-711,共4页
目的研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)系统对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的旁观者效应,并初步探讨其机制。方法 rAAV2载体介导增强... 目的研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)系统对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的旁观者效应,并初步探讨其机制。方法 rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent,EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率。重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞(N/N1003A-tk),以不同比例与没有转染的细胞混合,MTT法观察旁观者效应;MTT法检测N/N1003A-tk/GCV处理的条件培养液(CM)对N/N1003A细胞的作用。应用相差显微镜、透射电镜观察条件培养液对N/N1003A细胞形态学和超微结构的影响。结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定转染N/N1003A细胞,转染效率最高达81.12%。当N/N1003A-tk细胞以不同比例(10%、20%、40%、80%、100%)与N/N1003A混合时,细胞抑制率分别为49.00%±0.49%、54.71%±1.41%、59.26%±1.13%、68.20%±0.76%、73.44%±1.26%,与对照组(1.68%±0.45%)比较,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。N/N1003A-tk/GCV处理的条件培养液可明显杀伤N/N1003A细胞,但将其用0.22μm滤膜过滤后,对细胞的杀伤作用消失。条件培养液处理的N/N1003A细胞出现凋亡征象。结论 rAAV2介导的HSV-tk/GCV系统对兔晶状体上皮细胞有较强的旁观者效应,通过非细胞接触方式诱导旁观者细胞凋亡可能是其机制之一。 展开更多
关键词 旁观者效应 单纯疱疹病毒胸苷激酶 晶状体上皮细胞 腺相关病毒
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自杀基因TK腺相关病毒载体的构建及其抑制肿瘤细胞的功能研究 被引量：1
13
作者 于磊 孙岩 +2 位作者 雷铭德 李娜 韩瑞发 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期3240-3244,共5页
目的探讨腺相关病毒（rAAV）-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（herpes simplex virus thymidinekinase,HSV-TK）（简称rAAV-TK）载体的构建及其生物学效应的初步鉴定。方法用PCR扩增TK序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-TK;采用AAV-Helper Free Sy... 目的探讨腺相关病毒（rAAV）-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（herpes simplex virus thymidinekinase,HSV-TK）（简称rAAV-TK）载体的构建及其生物学效应的初步鉴定。方法用PCR扩增TK序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-TK;采用AAV-Helper Free System包装系统、＂氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提＂及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩,对病毒颗粒进行鉴定;用MB49-PSA细胞对rAAV-TK生物学效应进行初步鉴定。结果成功构建pAAV-TK载体,并经酶切、PCR及测序验证其准确性;rAAV病毒颗粒滴度达2×1010 v.p/mL,浓缩后可达到2×1011~2×1012 v.p/mL;rAAV-TK可以分泌TK基因,加入药物更昔洛韦（Ganciclovir,GCV）和吉地他滨（Gemcitabine,GVC）,该基因能有效诱导膀胱肿瘤细胞MB49-PSA凋亡。结论成功构建rAAV-TK腺相关病毒,体外实验表明rAAV-TK/GVC/GCV系统能高效诱导膀胱肿瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 腺相关病毒 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 膀胱肿瘤 更昔洛韦 吉地他滨
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低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用 被引量：1
14
作者 王小忠 彭启全 +1 位作者 彭云恒 廖文鹏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1513-1516,共4页
目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体... 目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体外感染肝癌细胞系HepG2后分别在正常和低氧条件下培养。分别采用反转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting)技术检5测TKmRNA及蛋白表达情况,并用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理后以MTT法检测细胞的增殖情况。结果:RT-PCR及Western blotting结果显示,仅转染重组腺病毒Ad-HRE-TK并在低氧条件下培养的HepG2细胞特异性表达TK基因及蛋白。HepG2细胞感染Ad-HRE-TK后,在低氧培养条件下对GCV的敏感性明显增加,在感染复数(MOI)为100并用50mg/LGCV处理时,则有95%以上HepG2细胞被杀死。而正常氧浓度下培养组,未能观察到GCV的杀伤作用。结论:低氧条件下,HRE可特异性地促进HSV-TK基因的表达,从而诱导GCV的毒性作用。 展开更多
关键词 低氧反应元件 单纯疱疹病毒胸苷激酶 腺病毒载体 肝肿瘤
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人类端粒酶反转录酶-肿瘤抑素联合人类端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷系统对肝癌HepG2细胞的作用 被引量：1
15
作者 王静 邓志华 《肿瘤研究与临床》 CAS 2014年第10期658-662,共5页
目的 观察人类端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷（phTERT-TK/GCV）联合人类端粒酶反转录酶-肿瘤抑素（phTERT-tumstatin）对肝癌细胞HepG2凋亡以及肝癌相关基因甲胎蛋白（AFP）、RhoC的mRNA及蛋白表达情况的影响.方法 细胞分为未转染... 目的 观察人类端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷（phTERT-TK/GCV）联合人类端粒酶反转录酶-肿瘤抑素（phTERT-tumstatin）对肝癌细胞HepG2凋亡以及肝癌相关基因甲胎蛋白（AFP）、RhoC的mRNA及蛋白表达情况的影响.方法 细胞分为未转染组、转染空质粒hTERT-EGFP组（空质粒组）、转染phTERT-tumstatin组（TM组）、转染phTERT-TK后加50 μg/ml GCV组（TK/GCV组）、共转染phTERT-tumstatin和phTERT-TK后加50μg/ml GCV组（MK组）.荧光显微镜观察转染肝癌细胞HepG2和肝细胞L-02中EGFP与MCHERRY的表达;采用实时荧光定量PCR与Western blot检测各组AFP与RhoC在mRNA及蛋白水平表达的变化,流式细胞术检测各组转染后HepG2凋亡状况.结果 phTERT-tumstatin、phTERT-TK/GCV转染后两基因在肝癌细胞HepG2特异性表达;TK/GCV组、TM组及MK组AFPmRNA相对表达量分别为0.76±0.09、0.62±0.09、0.49±0.07,RhoC mRNA相对表达量分别为0.80±0.04、0.40±0.02、0.54±0.03,与空质粒组（0.94±0.04、0.94±0.02）比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,且MK组较TK/GCV组、TM组AFP、RhoC mRNA相对表达差别显著.TK/GCV组、TM组、MK组、空质粒组和未转染组的AFP蛋白相对表达水平分别为0.97±0.02、0.83±0.02、0.69±0.01、1.19±0.03、1.15±0.05,RhoC蛋白相对表达水平分别为1.17±0.01、0.99±0.02、0.77±0.02、1.32±0.05、1.29±0.30（均P＜ 0.01）.phTERT-tumstatin、phTERT-TK/GCV共同转染HepG2细胞的凋亡率较二者单独转染组显著升高,二者单独及共转染组凋亡率较转染空质粒组及未转染组差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 phTERT-TK/GCV及phTERT-tumstatin对肝癌细胞HepG2有显著促凋亡的作用,二者联合作用更强. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 肿瘤抑素 肝肿瘤 HTERT启动子
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HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗小鼠乳腺癌的研究 被引量：1
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作者 陈道桢 张丽珊 +9 位作者 唐秋莎 鲁晓萱 赵琪 薛文群 樊启英 黄学文 苏宁 刘璐 黄鹰 童冠圣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期267-270,274,F003,共6页
目的:探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782/5S-8102形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法:体内实验分动物致瘤组、抑瘤实验组和治疗实验组。分别按实验组别要求接种5.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋... 目的:探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782/5S-8102形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法:体内实验分动物致瘤组、抑瘤实验组和治疗实验组。分别按实验组别要求接种5.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋窝皮下,观察各组肿瘤形成及肿瘤治疗情况并统计各组生存期。治疗结束后将标本制成石蜡切片进行病理学分析,RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中的表达情况。统计学处理采用SPSS软件进行完全随机的方差分析(ANOVA)。结果:实验结果显示小鼠成瘤率为100％。丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)可明显抑制MA782/5S-8102/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成。经GCV治疗后,MA782/5S-8102/TK组和混合细胞组的肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小约36.7％和28.6％(均P<0.001);生存期也明显延长(P<0.001);RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达。实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变。结论:逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782/5S-8102并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内对乳腺癌细胞有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 丙氧鸟苷 旁观者效应 逆转录病毒载体 小鼠乳腺癌
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腺病毒介导HSV—TK/GCV系统联合放射治疗口腔鳞癌的研究 被引量：1
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作者 王安训 黄洪章 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期28-30,共3页
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统对放射治疗的增敏作用。方法口腔鳞癌细胞(Tca8113细胞系)经HSV—TK/GCV系统治疗后给予放射治疗,采用LQ和单击多靶(SHMT)模型分析细胞存活曲线参数。结果细胞存活... 目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统对放射治疗的增敏作用。方法口腔鳞癌细胞(Tca8113细胞系)经HSV—TK/GCV系统治疗后给予放射治疗,采用LQ和单击多靶(SHMT)模型分析细胞存活曲线参数。结果细胞存活曲线分析显示:单纯放射治疗组其α为0.1074,β为0.0158,D0为2.2576,Dq为3.5413;与单纯放射治疗组比较,HSV—TK/GCV治疗组α(0.2127)和α:β(9.496)值大,D0(1.4526)和Dq(2.2257)值小,其放射增敏率(SER)为1.55。结论HSV—TK/GCV系统具有放射增敏作用,可提高放射治疗对口腔鳞癌的治疗疗效。 展开更多
关键词 HSV-TK/GCV系统 单纯疱疹病毒胸苷激酶 自杀基因 基因治疗 口腔肿瘤 放射治疗 口腔鳞癌 增敏
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HER2靶向载HSV-TK基因并具有核定位效应的纳米超声造影剂制备 被引量：1
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作者 张月 周厚妊 +3 位作者 罗语岑 辛莹 刘小奇 刘治军 《山东医药》 CAS 2021年第16期20-23,共4页
目的制备一种以人上皮生长因子受体2(HER2)为靶点同时载有单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因且具有核定位效应的纳米超声造影剂,并探讨其理化特性和体外超声显影效果。方法采用前期课题组构建的胍基化SS-PAAs类阳离子聚合物AGM-CBA,制备... 目的制备一种以人上皮生长因子受体2(HER2)为靶点同时载有单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因且具有核定位效应的纳米超声造影剂,并探讨其理化特性和体外超声显影效果。方法采用前期课题组构建的胍基化SS-PAAs类阳离子聚合物AGM-CBA,制备AGM-CBA/HSV-TK载体基因复合物并测定其粒径,采用薄膜水化—机械振荡法制备生物素化脂质体,以桥联亲和素—生物素法制备以HER2为靶点的靶向纳米级脂质微泡超声造影剂。对超声造影剂的外观形态、粒径、电位等进行表征;使用流式细胞仪定量检测HER2抗体与造影剂连接情况;使用多普勒彩色超声仪观察靶向纳米造影剂的超声显影效果。结果AGM-CBA/HSV-TK载体基因复合物粒径为(96.73±1.27)nm,所制备的纳米微泡超声造影剂呈相对规则圆整的球形,粒径为(550.93±10.19)nm,Zeta电位为(-9.75±0.74)mV。HER2抗体与造影剂成功连接。体外超声成像显示,纳米超声造影剂呈细腻均匀的点状密集高回声。结论成功制备出HER2靶向载HSV-TK基因并具核定位效应的纳米超声造影剂,且体外超声显影效果理想。 展开更多
关键词 纳米超声造影剂 靶向 人上皮生长因子受体2 单纯疱疹病毒胸苷激酶
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胸苷激酶系统血管靶向抗肝癌效应的机制 被引量：1
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作者 李宝金 张超 +3 位作者 周玉梅 郝颖 刘晓平 区庆嘉 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第19期1795-1798,共4页
目的探讨KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒对肿瘤血管内皮细胞的特异性杀伤效能及机制.方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的重组腺病毒,体外分别感染人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和肝... 目的探讨KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒对肿瘤血管内皮细胞的特异性杀伤效能及机制.方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的重组腺病毒,体外分别感染人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和肝癌细胞系HepG2,并以MTT法检测其细胞增殖情况.人肝癌皮下移植瘤裸鼠随机分成更昔洛韦组(I),空载体病毒组(II),重组腺病毒CMV-tk组(III)及重组腺病毒AdKDR-tk组(IV).各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液.重组腺病毒治疗组在病毒给予24h后分别ipGCV,连续10d.对照组,ipGCV.观察瘤体大小及免疫组化法定量测定肿瘤微血管密度.结果病毒滴度均为1×1013pfu/L.感染复数(MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50mg/L时感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由(90.7±4.5)%和(91.8±4.3)%分别下降至(28.9±5.7)%和(75.4±2.9)%(P<0.01),而感染含AdCMV-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率分别下降至(17.6±2.5)%和(23.2±5.7)%(P>0.05).体内试验中,与对照组比较,Ⅲ,IV组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制,其抑瘤率分别为(14.7±3.2)%和(23.6±5.6)%(P<0.05).组织内的平均血管密度(MVD),Ⅰ组为37.4±8.6,Ⅱ组为30.6±7.8,Ⅲ组为27.6±7.1,IV组为10.7±4.1.其中,Ⅲ组与Ⅱ组(P<0.05),IV组与Ⅱ组(P<0.01),IV组与Ⅲ组(P<0.01)之间比较均有统计学差异.结论KDR启动子介导的HSV-tk具有特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞的作用. 展开更多
关键词 肝肿瘤 KDR启动子 基因冶疗 重组腺病毒 胸苷激酶系统 HEPG2细胞 裸鼠 BALB/C
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单纯疱疹病毒腺苷激酶基因对髓母细胞瘤杀伤作用的研究
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作者 蒲珂 马丽 +2 位作者 高芸 刘云会 李少一 《解剖科学进展》 CAS 2010年第5期428-430,433,共4页
目的评估单纯疱疹病毒腺苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用。方法 HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Daoy细胞按不同比例混合,给予... 目的评估单纯疱疹病毒腺苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用。方法 HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Daoy细胞按不同比例混合,给予不同浓度的更昔洛韦(ganciclovir,GCV),7天后应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生存率。结果 Daoy-tk在GCV浓度为3μg/ml时,即可对Daoy细胞产生最大杀伤作用;Daoy-tk与Daoy细胞比例达到1:4时Daoy-tk仍有明显的抗肿瘤作用。结论 HSV-tk/GCV系统对人的髓母细胞有明显的杀伤作用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒腺苷激酶 更昔洛韦 髓母细胞瘤
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