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SPECT imaging of cardiac reporter gene expression in living rabbits
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作者 LIU Ying LAN Xiaoli +3 位作者 ZHANG Liang WU Yao JIANG Rifeng ZHANG Yongxue 《Nuclear Science and Techniques》 SCIE CAS CSCD 2009年第3期170-176,共7页
This work is to demonstrate feasibility of imaging the expression of herpes simplex virus 1-thymidine kinase (HSV1-tk) reporter gene in rabbits myocardium by using the reporter probe 131I-2'-fluoro-2'-deoxy-1-... This work is to demonstrate feasibility of imaging the expression of herpes simplex virus 1-thymidine kinase (HSV1-tk) reporter gene in rabbits myocardium by using the reporter probe 131I-2'-fluoro-2'-deoxy-1-β-D- arabinofuranosyl-5-iodouracil (131I-FIAU) and SPECT. Rabbits of the study group received intramyocardial injection of Ad5-tk and control group received aseptic saline injection. Two sets of experiments were performed on the study group. Rabbits of the 1st set were injected with 131I-FIAU 600 μCi at Day 2 after intramyocardial transfection of Ad5-tk in 1×109, 5×108, 1×108, 5×107 and 1×107 pfu, and heart SPECT imaging was done at different hours. Rabbits of the 2nd were transferred various titers of Ad5-tk (1×109, 5×108, 1×108, 5×107, 1×107 pfu) to determine the threshold and optimal viral titer needed for detection of gene expression. Two days later, 131I-FIAU was injected and heart SPECT imaging was performed at 6, 24 and 48 h, before killing them for gamma counting of the hearts. Reverse tran- scription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to verify the transferred HSV1-tk gene expression. Semi-quantitative analysis derived of region of interest (ROI) of SPECT images and RT-PCR images was performed and the relationship of SPECT images with ex vivo gamma counting and mRNA level were evaluated. SPECT images conformed 131I-FIAU accumulation in rabbits injected with Ad5-tk in the anterolateral wall. The optimal images qual- ity was obtained at 24~48 h for different viral titers. The highest radioactivity in the focal myocardium was seen at 6 h, and then declined with time. The threshold was 5×107 pfu of virus titer. The result could be set better in 1~5×108 pfu by SPECT analysis and gamma counting. ROI-derived semi-quantitative study on SPECT images correlated well with ex vivo gamma counting and mRNA levels from RT-PCR analysis. The HSV1-tk/131I-FIAU reporter gene/reporter probe system is feasible for cardiac SPECT reporter gene imaging. The optimal Ad5-tk titer is 1~5×108 pfu and op 展开更多
关键词 SPECT CMV 成像技术 核技术
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HSV1-TK报告基因显像
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作者 王辉 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第12期1292-1295,共4页
基因治疗中转泵的治疗基因在体内的定位、分布、持续时间和体内的表达缺乏有效的检测手段,是困扰基因治疗的一个难题。近年来,HSV1-TK报告基因显像已进行了广泛而又深入的研究,结果显示它可解决目前存在的这些问题。当前,报告基因显像... 基因治疗中转泵的治疗基因在体内的定位、分布、持续时间和体内的表达缺乏有效的检测手段,是困扰基因治疗的一个难题。近年来,HSV1-TK报告基因显像已进行了广泛而又深入的研究,结果显示它可解决目前存在的这些问题。当前,报告基因显像的焦点是选择何种报告基因探针进行基因显像。 展开更多
关键词 HSV1-TK 报告基因显像 肿瘤 基因探针
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动脉灌注GE7系统介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/羟甲基无环鸟苷对大鼠诱发性卵巢恶性肿瘤的作用 被引量:2
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作者 姜伟 刘晓霞 +4 位作者 康玉 邵志敏 周文江 顾健人 徐丛剑 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期245-248,共4页
目的观察非病毒载体介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSVl-tk)/羟甲基无环鸟苷(GCV)基因治疗系统,经肿瘤供血动脉灌注,对大鼠诱发性卵巢癌的作用,并初步探讨其作用机制。方法构建GE7-polylysine/pCMV-HSVl-tk/polylysine... 目的观察非病毒载体介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSVl-tk)/羟甲基无环鸟苷(GCV)基因治疗系统,经肿瘤供血动脉灌注,对大鼠诱发性卵巢癌的作用,并初步探讨其作用机制。方法构建GE7-polylysine/pCMV-HSVl-tk/polylysine-HA20四元复合物,取二甲基苯蒽(DMBA)诱发的大鼠卵巢肿瘤模型18只,随机分为3组,每组6只。分别经卵巢供血动脉注入四元复合物8“g/只(Atk组)、同体积的生理盐水(ANS组),经尾静脉注入四元复合物8μg/只(Vtk组)。72h后,3组大鼠均腹腔注射GCV,50mg·kg-1.d-1,连用10d。停药后3d处死大鼠,瘤体称重,计算抑瘤率。采用流式细胞仪检测各组大鼠卵巢肿瘤细胞的细胞周期变化和细胞凋亡情况。结果Atk组大鼠肿瘤瘤重为(4.774-2.31)g,明显低于ANS组[(14.66±6.26)g,P〈0.01]和Vtk组[(17.53±7.19)g,P〈0.01]。Atk组抑瘤率为67.5%Vtk组的抑瘤率为-19.6%。流式细胞检测结果显示,Atk组S期细胞占(54.32±9.65)%,高于ANS组[(27.434-9.22)%,P〈0.01]和Vtk组[(30.16±11.57)%,P〈0.01]。Ark组肿瘤细胞凋亡率为(39.15±12.16)%,高于ANS组[(11.864-5.28)%,P〈0.01]和Vtk组[(14.32±6.43)%,P〈0.01]。结论HSVl-tk在GE7导人系统介导下,经卵巢供血动脉导人大鼠卵巢肿瘤组织,给予GCV后,可使肿瘤细胞阻滞于S期,促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥良好的抑瘤作用。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 羟甲基无环鸟苷 动脉灌注 大鼠
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HSV-TK/GCV自杀基因系统联合γ射线放射治疗宫颈癌的实验研究 被引量:12
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作者 陈道桢 刘璐 +4 位作者 唐秋莎 薛文群 詹惠英 朱云霞 杨幼易 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期39-42,共4页
目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统协同60Coγ射线放射治疗对人宫颈癌细胞系的体内外联合杀伤作用,以及HSV-TK/GCV对放射治疗的增敏作用。方法分别以HSV-TK/GCV6、0Coγ射线放射治疗及两者联合治疗人宫颈癌HeLa细胞系和裸鼠宫颈癌移植瘤模... 目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统协同60Coγ射线放射治疗对人宫颈癌细胞系的体内外联合杀伤作用,以及HSV-TK/GCV对放射治疗的增敏作用。方法分别以HSV-TK/GCV6、0Coγ射线放射治疗及两者联合治疗人宫颈癌HeLa细胞系和裸鼠宫颈癌移植瘤模型,比较治疗效果;利用增敏效应比值(E/O)、克隆形成实验评价体内外HSV-TK/GCV对放射敏感性的影响。结果在体外实验中,自杀基因对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为45.8%,单纯放疗的抑制率为42.4%,而基因治疗与放疗联用的抑制率为87.5%,与前两者比较,差异有统计学意义(P<0.01);且联合治疗组对射线敏感性较单独治疗组明显增加,克隆形成率明显下降(P<0.05);在体内实验中,单纯基因治疗与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为39.5%和35.8%,而基因治疗放疗联用的抑瘤率达到87.9%,与前两者比较,差异均有统计学意义(P<0.01);增敏效应比值(E/O)为3.2(>1.4),提示HSV-TK/GCV对放疗具有增敏作用。结论HSV-TK/GCV自杀基因系统具有放射增敏作用,二者联合治疗可作为宫颈癌综合治疗的有效补充方法。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 人宫颈癌 自杀基因治疗 放射治疗 HSV-TK/GCV自杀基因系统 γ射线放射治疗
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含HSV-TK基因的真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达(英文) 被引量:7
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作者 张阳德 孙颖 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第22期6-11,21,共7页
目的 构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法 采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LU... 目的 构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法 采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LUC。HSV -TKcDNA全长序列替换pAFP -LUC质粒中EcoRI位点的LuciferasecDNA全序列构建重组表达质粒 pAFP -TK。质粒 pAFP -LUC采用脂质体法转染AFP阳性的肝癌细胞系HepG2及AFP阴性的非肝癌细胞系HeLa ,用Luciferase分析试剂盒分析Luciferase的表达情况。结果 PCR扩增所得AFP增强子片段的长度和序列通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序得到证实。采用限制性内切酶酶切及PCR方法证实质粒pAFP -LUC中插入的AFP增强子大小、位置及方向均正确。酶切后凝胶电泳分析证实HSV -TK已成功地定向克隆入真核表达载体中。Luciferase报道基因的表达受AFP增强子的调控 ,在AFP阳性肝癌细胞HepG2中高效表达 ,而在AFP阴性的HeLa细胞中表达很低 ,这种差异具有显著性 ,P <0 .0 5。结论 AFP增强子CMV启动子调控的HSV -TK真核表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的特异性表达为肝细胞癌的靶向基因治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 肝细胞癌 HCC 单纯疱疹病毒胸苷激酶 HSV-TK 基因治疗 丙氧鸟苷 GCV
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Altered Expression of Connexin-43 and Impaired Capacity of Gap Junctional Intercellular Communication in Prostate Cancer Cells 被引量:6
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作者 邢毅飞 肖亚军 +4 位作者 曾甫清 赵军 肖传国 熊平 冯玮 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2007年第3期291-294,共4页
Connexin-43 (Cx43) expression in prostate cancer (PCa) cells and the potency of gap junctional intercellular communication (GJIC) in the cells were investigated, with an attempt to elu- cidate the reason why the so-ca... Connexin-43 (Cx43) expression in prostate cancer (PCa) cells and the potency of gap junctional intercellular communication (GJIC) in the cells were investigated, with an attempt to elu- cidate the reason why the so-called 'bystander effect' mediated by thymidine kinase (TK) suicide gene therapy on PCa cells is not of significance and to explore the role of GJIC in PCa carcinogenesis. mRNA and protein expression of Cx43 in a PCa cell line PC-3m was detected by re- verse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and strapt-avidin-biotin-enzyme complex (SABC) immunohistochemical staining, and inherent GJIC of PC-3m cells was assayed by scrape-loading and dye transfer (SLDT) assay. The expression of Cx43 in human normal and malig- nant prostate tissues was determined by SABC immunohistochemistry as well. It was found that Cx43 mRNA and protein expression in PC-3m cells was slightly reduced as compared with positive controls and the location of Cx43 protein was aberrant in cytoplasm rather than on membrane. As- sessment of paraffin sections demonstrated that the expression of Cx43 protein in PCa cells was ab- normally located and markedly diminished as compared with normal prostatic epithelial ones, dis- playing a negative correlation to the pathological grade (χ2=4.025, P<0.05). Additionally, capacity of inherent GJIC in PC-3m cells was disrupted, which was semi-quantified as (+) or (-). It was indi- cated that both down-regulated expression of Cx43 mRNA and aberrant location of Cx43 protein par- ticipated in the mechanisms leading to deficient GJIC in PC-3m cells. Lack of efficient GJIC is a molecular event, which may contribute not only to limited extent of 'bystander effect', but also to initiation and progression of prostatic neoplasm. 展开更多
关键词 prostate neoplasms gap junctional intercellular communication herpes simplex virus thymidine kinase gene/ganciclovir CONNEXIN bystander effect
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胸苷激酶基因对乳腺癌细胞的杀伤性研究 被引量:5
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作者 陈道桢 张丽珊 +6 位作者 鲁晓萱 王静 李淑锋 苏宁 刘璐 黄鹰 童冠圣 《实用癌症杂志》 2003年第2期122-125,共4页
目的 探讨逆转录病毒 (RV )载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV -TK )基因转染小鼠乳腺癌细胞 ,联合抗病毒药物丙氧鸟苷 (GCV )对小鼠乳腺癌细胞系MA 782 /5S -810 2体外杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法 采用脂质体转染法将GIN... 目的 探讨逆转录病毒 (RV )载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV -TK )基因转染小鼠乳腺癌细胞 ,联合抗病毒药物丙氧鸟苷 (GCV )对小鼠乳腺癌细胞系MA 782 /5S -810 2体外杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法 采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA3 17、G 418筛选抗性克隆 ,采用PCR方法检测HSV -TK基因整合情况。取滴度最高的病毒上清液感染小鼠乳腺癌细胞MA 782 /5S -810 2 ,经G 418筛选后 ,得到带有HSV -TK基因的MA 782 /5S -810 2 /TK细胞 ;将MA 782 /5S -810 2和MA 782 /5S -810 2 /TK细胞按不同比例混合培养后 ,给予 10 μg/mlGCV ,4天后采用MTT法计算细胞成活率 (SR ) ,观察旁观者效应。结果 GINaTK载体成功转入包装细胞PA 3 17,病毒滴度为 4.0× 10 4cfu/ml。用病毒上清液感染MA 782 /5S -810 2 ,成功得到了表达HSV -TK基因的MA 782 /5S -810 2 /TK细胞。混合培养结果显示 ,当MA782 /5S -810 2 /TK细胞数占混合细胞数 10 %时 ,低浓度 (10 μg/ml)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。 结论 逆转录病毒可介导HSV -TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782 /5S -810 2并获稳定表达 ,RV -HSV -TK /GCV系统杀伤癌细胞存在旁观者效应。 展开更多
关键词 乳腺癌 自杀基因疗法 胸苷激酶基因 逆转录病毒载体 体外杀伤性 旁观者效应 动物实验
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间隙连接细胞间通讯与胸苷激酶系统“旁观者效应”的关系及其调控 被引量:5
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作者 邢毅飞 鲁功成 +4 位作者 肖亚军 赵军 曾甫清 熊平 冯玮 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期162-166,共5页
增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、... 增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、HeLa、NIH-3T3、Cos-7及L-02等五种不同细胞系GJIC功能状况,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测HSV-TK/GCV对其杀伤效应和“旁观者效应”,并比较GJIC上调剂apigenin和抑制剂18-α-glycyrrhetinic acid(AGA)对GJIC和“旁观者效应”的影响。结果表明,GJIC功能强大的NIH-3T3、Cos-7及L-02细胞对HSV-TK/GCV敏感性及“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞高(P<0.001)。Apigenin可显著提高ACHN细胞GJIC功能,对HeLa细胞则无影响;相反,AGA可显著抑制NIH-3T3、Cos-7和L-02等三种靶细胞的GJIC功能。相应地,apigenin可明显提高ACHN细胞的“旁观者效应”而对HeLa细胞的“旁观者效应”则无影响,AGA则可明显降低上述三种细胞的“旁观者效应”。因此认为,细胞内在的GJIC功能与靶细胞对HSV-TK/GCV的敏感性和“旁观者效应”程度有正向关系,人为调控细胞GJIC后,“旁观者效应”程度亦发生相应改变。 展开更多
关键词 间隙连接细胞间通讯 胸苷激酶系统 “旁观者效应” 单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦
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HSV-tk与p53基因对涎腺多形性腺瘤细胞的杀伤作用 被引量:3
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作者 王旭 王洁 +2 位作者 董福生 董玉英 侯亚丽 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-68,共4页
目的 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV_tk)基因、野生型p53基因(wt_p53)联合杀伤人涎腺 多形性腺瘤细胞的效果。方法 采用腺病毒介导的HSV_tk基因、wt_p53基因联合转染人涎腺多形性腺瘤细胞,逆 转录聚合酶链式反应(RT... 目的 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV_tk)基因、野生型p53基因(wt_p53)联合杀伤人涎腺 多形性腺瘤细胞的效果。方法 采用腺病毒介导的HSV_tk基因、wt_p53基因联合转染人涎腺多形性腺瘤细胞,逆 转录聚合酶链式反应(RT_PCR)检测转染后的基因表达;四唑盐比色(MTT)法测定tk与p53基因治疗后对肿瘤细 胞的杀伤作用及旁观者效应,并采用相差显微镜观察基因治疗后肿瘤细胞的形态学变化。结果 单独转染wt_p53 及HSV_tk GCV基因5d后,涎腺多形性腺瘤细胞的存活率分别为54%和38%;两者联合转染5d后,细胞的存活率 降至20%,两者差异有显著性(P<0.05)。结论 HSV_tk、wt_p53基因联合应用对涎腺多形性腺瘤的杀伤作用强于 此两基因单独应用的杀伤作用。 展开更多
关键词 腺瘤 涎腺 基因治疗 野生型P53 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因
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8-Br-cAMP联合HSV-TK/GCV治疗舌鳞癌移植瘤的研究 被引量:4
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作者 王安训 温映萍 +1 位作者 李苏 黄洪章 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第1期89-91,I006,共4页
[目的]探讨8-Br-cAMP联合单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)对舌鳞癌移植瘤的治疗作用。[方法]舌鳞癌Tca8113细胞接种于28只裸鼠右侧腋下,随机分成4组进行治疗:对照组,8-Br-cAMP组,HSV-TK/GCV组,8-Br-cAMP联合 HSV-TK/GCV... [目的]探讨8-Br-cAMP联合单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)对舌鳞癌移植瘤的治疗作用。[方法]舌鳞癌Tca8113细胞接种于28只裸鼠右侧腋下,随机分成4组进行治疗:对照组,8-Br-cAMP组,HSV-TK/GCV组,8-Br-cAMP联合 HSV-TK/GCV组;观察肿瘤的生长状态、计算抑瘤率和群体倍增时间;观察肿瘤的组织病理学及超微结构改变。[结果]与对照组比较,8-Br-cAMP和HSV-TK/GCV单独应用时肿瘤的生长明显受到抑制(P<0.01),肿瘤的群体倍增时间延长;析出分析显示两者间存在协同的抑瘤作用(P<0.01)。光镜下对照组和8-Br-cAMP组无明显差别,HSV-TK/GCV组和8-Br-cAMP联合HSV-TK/GCV组肿瘤组织中可见囊性变和大片的灶性坏死;透射电镜显示8-Br-cAMP对舌癌细胞具有诱导分化作用。[结论]8-Br-cAMP与HSV-TK/GCV系统具有协同的抑制舌鳞癌移植瘤生长作用。 展开更多
关键词 8-BR-CAMP 自杀基因 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 基因疗法 舌肿瘤
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HSVTK/GCV自杀基因系统治疗乳腺癌的研究 被引量:2
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作者 陈道桢 詹惠英 +10 位作者 薛文群 张丽珊 鲁晓萱 樊启英 黄学文 王静 李淑锋 苏宁 刘璐 黄鹰 童冠圣 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2004年第12期725-729,共5页
目的 探讨HSV TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782 / 5S 810 2体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法 采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染小鼠乳腺癌细胞MA782 / 5S 810 2 ,得到带有HS... 目的 探讨HSV TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782 / 5S 810 2体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法 采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染小鼠乳腺癌细胞MA782 / 5S 810 2 ,得到带有HSV TK基因的MA782 / 5S 810 2 /TK细胞 ,并将其分别用于体外和体内实验。结果 载体HSV TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示 ,当MA782 / 5S 810 2 /TK细胞数占混合细胞 10 %时 ,低浓度 (10 μg/ml)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。体内实验结果显示GCV可明显抑制MA782 / 5S 810 2 /TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成。实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变。结论 逆转录病毒可介导HSV TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782 / 5S 810 2并获稳定表达 ,HSV TK/GCV自杀基因系统在体内外对乳腺癌细胞均有杀伤作用 ,且存在明显的旁观者效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观者效应 逆转录病毒载体 小鼠乳腺癌
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人Midkine启动子驱动的HSV-TK自杀基因体外抗肝癌作用 被引量:3
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作者 陆春明 薛彦俊 +1 位作者 封书德 姜宁 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第20期29-32,共4页
目的观察以人Midkine(MK)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统在体外对人肝癌细胞的杀伤效应。方法以含有人MK启动子调控的HSV-TK基因的重组腺病毒分别感染体外培养的甲胎蛋白(AFP)阳性人肝癌细胞BEL... 目的观察以人Midkine(MK)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统在体外对人肝癌细胞的杀伤效应。方法以含有人MK启动子调控的HSV-TK基因的重组腺病毒分别感染体外培养的甲胎蛋白(AFP)阳性人肝癌细胞BEL-7402和AFP阴性人肝癌细胞SMMC-7721,RT-PCR法检测HSV-TK基因在上述两种细胞中的转录表达,观察GCV对人肝癌细胞的杀伤作用。结果GCV在体外对重组腺病毒感染的BEL-7402及SMMC-7721均有明显的杀伤作用,又以前者为著。相同的病毒滴度,其杀伤作用随着GCV浓度的增高而增强。均具有旁观者效应。结论在体外表现HSV-TK基因的AFP阳性及阴性人肝癌细胞均可被人MK启动子调控的自杀基因HSV-TK杀伤。 展开更多
关键词 MIDKINE 启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 丙氧鸟苷 肝肿瘤
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转染HSV-TK的内皮祖细胞的靶向血管新生治疗胶质瘤体内外实验 被引量:3
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作者 张军霞 赵鹏 +4 位作者 李瑞 石磊 程子昊 尤永平 傅震 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期170-174,共5页
目的 探讨转染单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV—TK)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)靶向血管新生及对胶质瘤的治疗作用。方法 将转染HSV-TK的EPCs和脐静脉内皮细胞、U87与U25... 目的 探讨转染单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV—TK)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)靶向血管新生及对胶质瘤的治疗作用。方法 将转染HSV-TK的EPCs和脐静脉内皮细胞、U87与U251胶质瘤细胞,以不同比例混合,经更昔洛韦(ganciclovir,GCV)作用,观察其旁观者效应。将转染HSV—TK的EPCs经尾静脉注入裸鼠皮下胶质瘤模型,观察各组肿瘤体积的变化,免疫组化检测各组中血管情况。结果 转染HSV—TK的EPCs对内皮细胞与胶质瘤细胞的旁观者效应,呈现时间依赖性与细胞比例依赖性。静脉注射转染后的EPCs,对裸鼠皮下胶质瘤生长具有明显抑制作用,并抑制血管生成。结论 转染HSV-TK的EPCs可能通过靶向血管新生来抑制胶质瘤生长。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 内皮祖细胞 胶质瘤 旁观者效应 血管新生
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融合自杀基因抑骨肉瘤生长的实验研究 被引量:3
14
作者 李伟 沙丹 马春燕 《华中医学杂志》 2009年第1期1-5,23,共6页
目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因(HSV-TK/CD)对骨肉瘤细胞增殖的影响和对裸鼠骨肉瘤生长的影响。方法将含TK/CD的重组腺病毒载体感染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,测定感染效率后分别给予不同浓度的前体药物和不同... 目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因(HSV-TK/CD)对骨肉瘤细胞增殖的影响和对裸鼠骨肉瘤生长的影响。方法将含TK/CD的重组腺病毒载体感染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,测定感染效率后分别给予不同浓度的前体药物和不同感染复数的自杀基因重组腺病毒作用于瘤细胞,测定细胞A值计算瘤细胞增殖抑制率,MTT法测定细胞存活率,并用流式细胞术和Hochest33342染色法分析其杀伤机制;人骨肉瘤细胞系MG-63细胞于裸鼠成瘤后将其分为6组(每组8只):PBS对照组(A组);重组腺病毒(Ad)-Lac-Z/GCV+5-FC组(B组);Ad-TK/GCV组(C组);Ad-CD/5-FC组(D组);Ad-TK/GCV+Ad-CD/5-FC组(E组);Ad-TK-CD/GCV+5-FC组(F组)。各组经治疗后观察肿瘤的生长状况及组织病理学改变。结果含自杀基因的重组腺病毒成功感染MG-63细胞;不同感染复数和不同前体药物浓度下,融合自杀基因系统对瘤细胞的杀伤作用明显强于单基因作用和双基因相加的作用,且有显著性差异(P<0.05);杀伤机制为致细胞坏死和细胞凋亡。裸鼠实验中,B组与A组比较,肿瘤体积与肿瘤坏死程度无明显差异(P>0.05);与A、B组相比较,C~F组肿瘤的生长均受到明显抑制(P<0.05),且E、F组与C、D比较有显著性差异(P<0.05)。结论融合自杀基因HSV-TK/CD对骨肉瘤细胞系MG-63细胞和裸鼠骨肉瘤的生长均有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 骨肉瘤 单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因 胞嘧啶脱氨酶基因 MG-63细胞 裸鼠
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HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究 被引量:3
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作者 陈小祥 孙志华 +1 位作者 吴强 汪振诚 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2006年第7期497-501,i0001,共6页
目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植... 目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化。治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导。结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P<0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P>0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导。结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒腺苷激酶 丙氧鸟苷 难治性卵巢癌 肿瘤移植
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HSV-TK自杀基因联合热疗杀伤肝癌细胞系的实验研究 被引量:3
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作者 刘刚 欧阳德群 +3 位作者 赵劲风 潘一峰 彭健 张阳德 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期713-716,共4页
目的观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合热疗(hyperthermia)对人肝癌细胞系HepG2体外的杀伤作用。方法采用脂质体转染法将HSV-TK基因转染HepG2细胞,观察GCV联合热疗对HepG2/tk的体外杀伤作用。结果热疗与GC... 目的观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合热疗(hyperthermia)对人肝癌细胞系HepG2体外的杀伤作用。方法采用脂质体转染法将HSV-TK基因转染HepG2细胞,观察GCV联合热疗对HepG2/tk的体外杀伤作用。结果热疗与GCV联用组各温度作用下细胞凋亡率均较对照组和单用GCV组明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。随着温度的升高,热疗联合GCV组诱导细胞凋亡的效果也增强,44℃时细胞增殖抑制率为(78.8±7.5)%,细胞凋亡率达(42.8±3.6)%。结论脂质体可介导HSV-TK基因转染入HepG2细胞并获得稳定表达,热疗可显著提高GCV对HepG2/tk细胞的杀伤效果。 展开更多
关键词 肝肿瘤/治疗 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 自杀基因治疗 热疗
原文传递
单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用的研究 被引量:2
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作者 薛文群 詹惠英 +5 位作者 陈道桢 赵琪 朱云霞 杨幼易 鲁晓萱 樊启英 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期4-7,共4页
目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。 方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela... 目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。 方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela/TK细胞 ,并将其用于体外实验。 结果 :载体HSV TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示 ,当Hela/TK细胞数占混合细胞 10 %时 ,低浓度 (10mg/L)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。GCV作用后的实验组Hela /TK细胞基因组经琼脂糖凝胶电泳后可观察到典型的DNA梯状条带。 结论 :逆转录病毒可介导HSV TK基因转入人宫颈癌Hela细胞并获稳定表达 ,HSV TK/GCV自杀基因系统在体外对宫颈癌细胞有杀伤作用 ,且存在明显的旁观效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观效应 逆转录病毒载体 人宫颈癌 自杀基因治疗
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基因修饰乳酸乳球菌作为药物发送载体系统治疗黑色素瘤初探 被引量:2
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作者 李轶杰 刘欢欢 张富春 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期176-179,190,共5页
[目的]探讨携带自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的重组乳球菌静脉注射后靶向实体肿瘤组织定殖及联合更昔洛韦(GCV)治疗小鼠黑色素瘤的可能性。[方法]荷瘤小鼠静脉注射乳球菌3d或7d后,将小鼠脾肺肝肾器官和肿瘤组织细胞匀浆后涂布... [目的]探讨携带自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的重组乳球菌静脉注射后靶向实体肿瘤组织定殖及联合更昔洛韦(GCV)治疗小鼠黑色素瘤的可能性。[方法]荷瘤小鼠静脉注射乳球菌3d或7d后,将小鼠脾肺肝肾器官和肿瘤组织细胞匀浆后涂布于筛选培养基上,以乳酸菌数量的评价静脉发送乳球菌靶向定殖肿瘤细胞的可能性。以携带HSVtk的重组乳酸乳球菌经静脉途径处理荷瘤小鼠后,通过观测小鼠肿瘤体积变化及小鼠存活率评价相关抗肿瘤效果。[结果]静脉注射乳酸乳球菌3d后在小鼠脾肺肝肾和肿瘤组织内均有乳球菌检出,而7d后仅在肿瘤组织中发现有乳酸乳球菌的分布。与对照相比,静脉注射LL-HSV-tk联合GCV处理能显著抑制小鼠体内肿瘤的生长。[结论]静脉发送携带治疗性分子的乳酸乳球菌能靶向实体肿瘤组织定殖并抑制肿瘤的生长。 展开更多
关键词 肿瘤靶向 乳酸乳球菌 单纯疱疹病毒胸苷激酶 药物发送系统
原文传递
8-Br-cAMP提高HSV-TK/GCV自杀基因系统旁观者效应的研究 被引量:1
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作者 黄洪章 王安训 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2002年第1期5-8,共4页
目的 探讨8-Br-cAMP对单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)系统旁观者效应的增强作用及机理。方法 应用FCM、透射电镜检测8-Br-cAMP对口腔鳞癌细胞(Tca8113)、间隙连接蛋白43(Cx43)及间隙连接的诱导分化作用;采用析因... 目的 探讨8-Br-cAMP对单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)系统旁观者效应的增强作用及机理。方法 应用FCM、透射电镜检测8-Br-cAMP对口腔鳞癌细胞(Tca8113)、间隙连接蛋白43(Cx43)及间隙连接的诱导分化作用;采用析因分析法分析8-Br-cAMP对HSV-TK/GCV系统旁观者效应的影响。结果 口腔鳞癌细胞经 10-4mol/L 8-Br-CAMP处理后:FCM检测显示 Cx43表达阳性的细胞由治疗前的(4.8 ± 0.26)%上升到(21.3±0.65)%,两组比较P<0.001;透射电镜显示细胞超微结构出现分化,细胞间出现间隙连接;MTT检测显示增强了HSV-TK/GCV系统治疗时的旁观者效应,两者间存在协同关系。结论8-Br-cAMP可诱导分化口腔鳞癌细胞并显著提高HSV-TK/GCV系统治疗时的旁观者效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 8-BR-CAMP 旁观者效应 间隙连接蛋白 肿瘤
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因联合更昔洛韦治疗肿瘤的机制 被引量:2
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作者 李辉 吴新荣 《食品与药品》 CAS 2007年第02A期52-55,共4页
单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)与抗病毒药物更昔洛韦(GCV)组成的药物敏感基因疗法在肿瘤基因治疗领域中引人注目,它产生的旁观者效应在一定程度上弥补了基因载体转染率不高的问题,在肿瘤自杀基因疗法中发挥着重要的作用,现对HSV-TK/... 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)与抗病毒药物更昔洛韦(GCV)组成的药物敏感基因疗法在肿瘤基因治疗领域中引人注目,它产生的旁观者效应在一定程度上弥补了基因载体转染率不高的问题,在肿瘤自杀基因疗法中发挥着重要的作用,现对HSV-TK/GCV治疗肿瘤机制及其应用趋势作一综述。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸昔激酶基因 更昔洛韦 旁观者效应
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