慢性乙肝病毒感染是亚洲国家肝癌的常见病因,乙肝病毒所表达的乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)是肝癌发生发展的重要推动因子。核因子-κB(Nuclear factorκB,NF-κB)是模式识别受体下游重要的转录因子,肝细胞生长因子(...慢性乙肝病毒感染是亚洲国家肝癌的常见病因,乙肝病毒所表达的乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)是肝癌发生发展的重要推动因子。核因子-κB(Nuclear factorκB,NF-κB)是模式识别受体下游重要的转录因子,肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)/c-Met途径能够促进NF-κB活化,并通过活化的NF-κB来调节肝癌细胞的迁移、侵袭等生物学环节。但HBx是否直接通过NF-κB通路来调节肝癌细胞的迁移、侵袭尚未明确。为探究HBx通过NF-κB通路调节肝癌细胞迁移、侵袭的作用,本研究采用培养肝癌HepG2细胞并分组,空白对照组用不含药物及质粒的DMEM处理,空白质粒组转染1.2μg的pcDNA3.1空白质粒,HBx质粒组转染不同浓度的HBx表达质粒pcDNA3.1-HBx,HBx+PDTC组转染1.2μg的HBx表达质粒pcDNA3.1-HBx并用含有50μmol/L PDTC的DMEM进行处理;皮下注射HepG2细胞建立移植瘤小鼠模型,称量移植瘤的质量。检测细胞迁移及侵袭活力、细胞及移植瘤中NF-κB通路分子、迁移基因、侵袭基因的表达。结果显示,与空白对照组、空白质粒组比较,HBx质粒组细胞中NF-κB、HGF、c-Met、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达水平及相对愈合面积、侵袭数目均明显增多(P<0.05);与HBx质粒组比较,HBx+PDTC组细胞中NF-κB、HGF、c-Met、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达水平及相对愈合面积、侵袭数目均明显减少(P<0.05);与空白对照组、空白质粒组比较,HBx质粒组移植瘤的质量及移植瘤中NF-κB、HGF、c-Met的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。本研究得出结论,HBx能够促进肝癌细胞的迁移、侵袭,且该作用与激活NF-κB通路有关。展开更多
乙肝病毒X蛋白(Hepatitis X protein,HBx)是造成乙肝相关肝癌的重要促癌物质,但HBx促进肝癌细胞生长的分子机制尚不明确。人血管生成素样蛋白4(Human angiopoietin like protein 4,ANGPTL4)在乙肝相关肝癌中表达上调且与HBx呈正相关,提...乙肝病毒X蛋白(Hepatitis X protein,HBx)是造成乙肝相关肝癌的重要促癌物质,但HBx促进肝癌细胞生长的分子机制尚不明确。人血管生成素样蛋白4(Human angiopoietin like protein 4,ANGPTL4)在乙肝相关肝癌中表达上调且与HBx呈正相关,提示HBx可能通过调控ANGPTL4的表达促进肝癌细胞的生长。为观察ANGPTL4在HBx蛋白促进肝癌细胞生长中的作用,本研究培养肝癌HepG2、Huh7、Bel7402细胞株及正常肝细胞株L-02,检测HBx、ANGPTL4的表达;将HepG2细胞分为转染阴性对照(Negative control,NC)siRNA的si-NC组、转染HBx siRNA的si-HBx、转染pcDNA3.1质粒及NC siRNA的pcDNA3.1+si-NC组、转染pcDNA3.1质粒及HBx siRNA的pcDNA3.1+si-HBx组、转染过表达ANGPLT4的pcDNA3.1质粒及HBx siRNA的pcDNA3.1-ANGPLT4+si-HBx组、转染ANGPLT4 siRNA的si-ANGPLT4组,检测细胞增殖活力A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达。结果显示,HepG2、Huh7、Bel7402细胞中HBx、ANGPTL4的表达水平明显高于L-02细胞,且HepG2中HBx、ANGPTL4的表达水平最高;si-HBx组A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、Bcl-2的表达水平均低于si-NC组;pcDNA3.1-ANGPLT4+si-HBx组HepG2细胞的A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、Bcl-2的表达水平均明显高于pcDNA3.1+si-HBx组;si-ANGPLT4组A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、Bcl-2的表达水平均低于si-NC组,HBx表达水平与si-NC组比较无差异。以上结果表明,敲低HBx通过下调ANGPTL4的表达抑制肝癌细胞增殖,ANGPTL4参与HBx促进肝癌细胞的生长。本研究首次阐明了HBx通过ANGPTL4调控肝癌细胞的增殖,敲低HBx能够下调ANGPTL4及下游Notch1、bcl-2的表达,并抑制肝癌细胞增殖。展开更多
乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.HBx具有促进肝癌迁移的作用,但其作用的分子机制不清.本研究对HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了探讨.伤口愈合和Boyden’s chamber结果表明...乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.HBx具有促进肝癌迁移的作用,但其作用的分子机制不清.本研究对HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了探讨.伤口愈合和Boyden’s chamber结果表明,HBx可明显促进肝癌Hep G2细胞迁移.在稳定转染HBx的Hep G2(Hep G2-X)细胞中转染HBx结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)的RNA干扰片段,可明显抑制HBx的促迁移作用.免疫组化和实时定量PCR结果表明,HBXIP在肝癌组织中显著高表达,并且与HBx表达成正相关.荧光素酶报告基因和免疫印迹结果表明,HBx显著增强HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平.应用HBx的RNA干扰处理Hep G2-X细胞,HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平明显下降.将HBXIP启动子区的c AMP效应元件结合因子(CREB)结合位点突变后,HBx上调HBXIP的作用消失.应用CREB的RNA干扰处理肝癌细胞,在启动子水平和蛋白质水平上,HBx对HBXIP的上调作用被显著抑制.染色质免疫共沉淀结果表明,HBx能够通过CREB结合到HBXIP的启动子上,进而发挥激活HBXIP的功能.本研究结果表明,HBx促进肝癌细胞迁移的作用是通过CREB上调HBXIP实现的.这一发现对进一步揭示HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制具有重要意义.展开更多
乙型肝炎病毒中的功能蛋白乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在促进肝细胞恶性改变中起到重要作用,但目前HBx调控肝癌细胞生长的具体机制仍未完全阐明。miR-122是具有抑癌特性的一类miR,在乙肝相关肝癌中表达减少。为了研...乙型肝炎病毒中的功能蛋白乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在促进肝细胞恶性改变中起到重要作用,但目前HBx调控肝癌细胞生长的具体机制仍未完全阐明。miR-122是具有抑癌特性的一类miR,在乙肝相关肝癌中表达减少。为了研究HBx通过微小RNA(microRNA,miR)-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的作用,本研究培养肝癌HepG2细胞株并进行分组,NC组转染NC慢病毒载体、HBx组转染HBx慢病毒载体、HBx+NC模拟物组转染HBx慢病毒载体及NC模拟物、HBx+miR-122模拟物组转染HBx慢病毒载体及miR-122模拟物、NC模拟物组转染NC模拟物、miR-122模拟物组:转染miR-122模拟物。通过MTS法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,PCR检测miR-122表达量,western blot检测细胞周期蛋白G1(CyclinG1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达量。结果显示HBx组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显高于NC组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显低于NC组(P<0.05);HBx+miR-122模拟物组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显低于HBx+NC模拟物组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显高于HBx+NC模拟物组(P<0.05);miR-122模拟物组CyclinG1、XIAP、β-catenin荧光素酶报告基因的荧光活性明显低于NC模拟物组(P<0.05)。本研究结果充分说明HBx能够增强肝癌细胞的增殖活力及明显加速细胞周期,且该作用部分由miR-122的下调所介导。本研究首次阐明了HBx调节肝癌细胞生长的分子机制,也初步探明了具有抑癌活性的miR-122在肝癌细胞中可能靶向CyclinG1、XIAP、β-catenin等基因。展开更多
以PubMed和Web of Science数据库作为检索工具,采用文献计量学方法对乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)研究文献从时间分布、期刊分布、国家分布等方面进行分析,通过可视化软件HistCite和CiteSpace对HBx相关文献生成可视化引文编...以PubMed和Web of Science数据库作为检索工具,采用文献计量学方法对乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)研究文献从时间分布、期刊分布、国家分布等方面进行分析,通过可视化软件HistCite和CiteSpace对HBx相关文献生成可视化引文编年图及热点知识图谱,探讨HBx研究热点和前沿,揭示其发展历程。展开更多
目的构建靶向作用于小鼠肝前体细胞的动物模型,研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝前体细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法每周2次给予昆明小鼠2 m L/L四氯化碳灌胃,4周后行经门静脉注射稳定表达HBx的肝前体细胞和稳定表达空载体的肝前体...目的构建靶向作用于小鼠肝前体细胞的动物模型,研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝前体细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法每周2次给予昆明小鼠2 m L/L四氯化碳灌胃,4周后行经门静脉注射稳定表达HBx的肝前体细胞和稳定表达空载体的肝前体细胞同时切除部分肝脏。术后继续每周2次进行灌胃,并分别于术后3、5、7、14、21、28 d,处死小鼠取肝脏标本;实时定量PCR检测小鼠肝组织HBx的mRNA水平、免疫组织化学染色检测肝组织中外源性细胞的存活。实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和细胞角蛋白18(CK18)mRNA水平,Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、CK18蛋白水平。结果免疫组织化学染色结果显示,术后肝脏组织明显有外源性细胞存活.随注射时间延长,肝组织HBx的含量增加,表达区域增大;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示过表达HBx能够使小鼠肝组织中E-cadherin、CK18水平降低,而N-cadherin、vimentin的水平增加。结论动物模型证实HBx在肝前体细胞EMT过程中起着重要的调控作用。展开更多
目的观察ASPP2对HBx引起的细胞自噬的改变。方法运用Hbx转染Hep G 2细胞,ASPP2过表达与对照情况下,采用免疫印迹技术检测内源性自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62的表达,采用免疫荧光方法检测LC3荧光颗粒表达水平,采用RT-PCR技术检测自噬相...目的观察ASPP2对HBx引起的细胞自噬的改变。方法运用Hbx转染Hep G 2细胞,ASPP2过表达与对照情况下,采用免疫印迹技术检测内源性自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62的表达,采用免疫荧光方法检测LC3荧光颗粒表达水平,采用RT-PCR技术检测自噬相关基因Beclin-1的m RNA转录水平。结果免疫印迹技术显示转染HBx质粒比转染空载组的LC3Ⅱ量增多,但是在加入ASPP2腺病毒组比空载组的LC3Ⅱ表达量减少。免疫荧光显示转染HBx质粒比转染空载组的LC3荧光颗粒多,但是在共转染ASPP2质粒组比空载组的LC3荧光颗粒减少。RT-PCR方法显示转染HBX质粒比转染空载组的表达增多,但是在加入ASPP2腺病毒组比空载组表达量减少。结论ASPP2可以抑制HBx引起的细胞自噬。展开更多
上调基因4(up-regulated gene-4,URG4)是受乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)激活的下游基因之一,最初在转染HBx的HepG2细胞中被克隆,因其上调细胞增殖效应而得名。研究发现,URG4在HBx转染后的HepG2细胞中表达明显增加,...上调基因4(up-regulated gene-4,URG4)是受乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)激活的下游基因之一,最初在转染HBx的HepG2细胞中被克隆,因其上调细胞增殖效应而得名。研究发现,URG4在HBx转染后的HepG2细胞中表达明显增加,同时细胞生长加速,存活率提高,表明URG4与乙肝病毒相关的肝细胞癌发生可能相关。近年来,人们发现URG4不仅在肝癌细胞中高表达,还与胃癌、骨肉瘤、非小细胞肺癌、神经母细胞瘤等多种癌症相关。本文结合近年来对URG4的研究成果,包括URG4基因及其蛋白质的结构与功能,URG4在癌症发生发展中的作用,以及在癌症早期诊断和预后中的意义进行综述,可望为后续深入地开展URG4与癌症的研究提供参考。展开更多
着色性干皮病D组蛋白(Xeroderma pigmentosum group D,XPD)是基础转录因子ⅡH(Transcript factorⅡH,TFⅡH)复合体的第二大亚基,它在转录和核苷酸剪切修复过程中都发挥着重要作用。我们利用人宫颈鳞癌上皮细胞(HeLa细胞)中提取的总RNA...着色性干皮病D组蛋白(Xeroderma pigmentosum group D,XPD)是基础转录因子ⅡH(Transcript factorⅡH,TFⅡH)复合体的第二大亚基,它在转录和核苷酸剪切修复过程中都发挥着重要作用。我们利用人宫颈鳞癌上皮细胞(HeLa细胞)中提取的总RNA进行逆转录酶-聚合酶链反应(Reverse transcriptase-polymerase chain reac-tion,RT-PCR),克隆出人全长XPD cDNA,把此基因按野生型插入表达绿色荧光蛋白的pEGFP-N2质粒,构建了pEGFP-N2/XPD重组体质粒,并将其转染入整合有乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)的人肝癌细胞Hep3B,分析重组细胞的XPD表达水平、HBx表达水平和细胞增殖力,为进一步研究XPD的各种生物学活性及作用机制奠定了基础。展开更多
The chronic infection of hepatitis B virus(HBV) is closely related to the occurrence and development of hepatocellular carcinoma(HCC). Accumulated evidence has shown that HBV X protein(HBx protein) is a multifunctiona...The chronic infection of hepatitis B virus(HBV) is closely related to the occurrence and development of hepatocellular carcinoma(HCC). Accumulated evidence has shown that HBV X protein(HBx protein) is a multifunctional regulator with a crucial role in hepatocarcinogenesis. However, information on the mechanism by which HBV induces HCC is lacking. This review focuses on the pathological functions of HBx in HBV-induced hepatocarcinogenesis. As a transactivator, HBx can modulate nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells(NF-κB) and transcription factor AP-2. Moreover, HBx can affect regulatory non-coding RNAs(ncRNAs) including microRNAs and long ncRNAs(lncRNAs), such as miRNA-205 and highly upregulated in liver cancer(HULC), respectively. HBx is also involved in epigenetic modification, including methylation and acetylation. HBx interacts with various signal-transduction pathways, such as protein kinase B/Akt, Wnt/β-catenin, signal transducer and activator of transcription, and NF-κB pathways. Moreover, HBx affects cellular fate by shifting the balance toward cell survival. HBx may lead to the loss of apoptotic functions or directly contributes to oncogenesis by achieving transforming functions, which induce hepatocarcinogenesis. Additionally, HBx can modulate apoptosis and immune response by direct or indirect interaction with host factors. We conclude that HBx hastens the development of hepatoma.展开更多
Hepatitis B virus(HBV)is regarded as a stealth virus,invading and replicating efficiently in human liver undetected by host innate antiviral immunity.Here,we show that type I interferon(IFN)induction but not its downs...Hepatitis B virus(HBV)is regarded as a stealth virus,invading and replicating efficiently in human liver undetected by host innate antiviral immunity.Here,we show that type I interferon(IFN)induction but not its downstream signaling is blocked by HBV replication in HepG2.2.15 cells.This effect may be partially due to HBV X protein(HBx),which impairs IFNβpromoter activation by both Sendai virus(SeV)and components implicated in signaling by viral sensors.As a deubiquitinating enzyme(DUB),HBx cleaves Lys63-linked polyubiquitin chains from many proteins except TANK-binding kinase 1(TBK1).It binds and deconjugates retinoic acid-inducible gene I(RIG I)and TNF receptor-associated factor 3(TRAF3),causing their dissociation from the downstream adaptor CARDIF or TBK1 kinase.In addition to RIG I and TRAF3,HBx also interacts with CARDIF,TRIF,NEMO,TBK1,inhibitor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells,kinase epsilon(IKKi)and interferon regulatory factor 3(IRF3).Our data indicate that multiple points of signaling pathways can be targeted by HBx to negatively regulate production of type I IFN.展开更多
文摘慢性乙肝病毒感染是亚洲国家肝癌的常见病因,乙肝病毒所表达的乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)是肝癌发生发展的重要推动因子。核因子-κB(Nuclear factorκB,NF-κB)是模式识别受体下游重要的转录因子,肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)/c-Met途径能够促进NF-κB活化,并通过活化的NF-κB来调节肝癌细胞的迁移、侵袭等生物学环节。但HBx是否直接通过NF-κB通路来调节肝癌细胞的迁移、侵袭尚未明确。为探究HBx通过NF-κB通路调节肝癌细胞迁移、侵袭的作用,本研究采用培养肝癌HepG2细胞并分组,空白对照组用不含药物及质粒的DMEM处理,空白质粒组转染1.2μg的pcDNA3.1空白质粒,HBx质粒组转染不同浓度的HBx表达质粒pcDNA3.1-HBx,HBx+PDTC组转染1.2μg的HBx表达质粒pcDNA3.1-HBx并用含有50μmol/L PDTC的DMEM进行处理;皮下注射HepG2细胞建立移植瘤小鼠模型,称量移植瘤的质量。检测细胞迁移及侵袭活力、细胞及移植瘤中NF-κB通路分子、迁移基因、侵袭基因的表达。结果显示,与空白对照组、空白质粒组比较,HBx质粒组细胞中NF-κB、HGF、c-Met、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达水平及相对愈合面积、侵袭数目均明显增多(P<0.05);与HBx质粒组比较,HBx+PDTC组细胞中NF-κB、HGF、c-Met、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达水平及相对愈合面积、侵袭数目均明显减少(P<0.05);与空白对照组、空白质粒组比较,HBx质粒组移植瘤的质量及移植瘤中NF-κB、HGF、c-Met的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。本研究得出结论,HBx能够促进肝癌细胞的迁移、侵袭,且该作用与激活NF-κB通路有关。
文摘乙肝病毒X蛋白(Hepatitis X protein,HBx)是造成乙肝相关肝癌的重要促癌物质,但HBx促进肝癌细胞生长的分子机制尚不明确。人血管生成素样蛋白4(Human angiopoietin like protein 4,ANGPTL4)在乙肝相关肝癌中表达上调且与HBx呈正相关,提示HBx可能通过调控ANGPTL4的表达促进肝癌细胞的生长。为观察ANGPTL4在HBx蛋白促进肝癌细胞生长中的作用,本研究培养肝癌HepG2、Huh7、Bel7402细胞株及正常肝细胞株L-02,检测HBx、ANGPTL4的表达;将HepG2细胞分为转染阴性对照(Negative control,NC)siRNA的si-NC组、转染HBx siRNA的si-HBx、转染pcDNA3.1质粒及NC siRNA的pcDNA3.1+si-NC组、转染pcDNA3.1质粒及HBx siRNA的pcDNA3.1+si-HBx组、转染过表达ANGPLT4的pcDNA3.1质粒及HBx siRNA的pcDNA3.1-ANGPLT4+si-HBx组、转染ANGPLT4 siRNA的si-ANGPLT4组,检测细胞增殖活力A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达。结果显示,HepG2、Huh7、Bel7402细胞中HBx、ANGPTL4的表达水平明显高于L-02细胞,且HepG2中HBx、ANGPTL4的表达水平最高;si-HBx组A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、Bcl-2的表达水平均低于si-NC组;pcDNA3.1-ANGPLT4+si-HBx组HepG2细胞的A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、Bcl-2的表达水平均明显高于pcDNA3.1+si-HBx组;si-ANGPLT4组A490、A430水平及ANGPLT4、Notch1、Bcl-2的表达水平均低于si-NC组,HBx表达水平与si-NC组比较无差异。以上结果表明,敲低HBx通过下调ANGPTL4的表达抑制肝癌细胞增殖,ANGPTL4参与HBx促进肝癌细胞的生长。本研究首次阐明了HBx通过ANGPTL4调控肝癌细胞的增殖,敲低HBx能够下调ANGPTL4及下游Notch1、bcl-2的表达,并抑制肝癌细胞增殖。
文摘乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.HBx具有促进肝癌迁移的作用,但其作用的分子机制不清.本研究对HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了探讨.伤口愈合和Boyden’s chamber结果表明,HBx可明显促进肝癌Hep G2细胞迁移.在稳定转染HBx的Hep G2(Hep G2-X)细胞中转染HBx结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)的RNA干扰片段,可明显抑制HBx的促迁移作用.免疫组化和实时定量PCR结果表明,HBXIP在肝癌组织中显著高表达,并且与HBx表达成正相关.荧光素酶报告基因和免疫印迹结果表明,HBx显著增强HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平.应用HBx的RNA干扰处理Hep G2-X细胞,HBXIP的启动子活性和蛋白质表达水平明显下降.将HBXIP启动子区的c AMP效应元件结合因子(CREB)结合位点突变后,HBx上调HBXIP的作用消失.应用CREB的RNA干扰处理肝癌细胞,在启动子水平和蛋白质水平上,HBx对HBXIP的上调作用被显著抑制.染色质免疫共沉淀结果表明,HBx能够通过CREB结合到HBXIP的启动子上,进而发挥激活HBXIP的功能.本研究结果表明,HBx促进肝癌细胞迁移的作用是通过CREB上调HBXIP实现的.这一发现对进一步揭示HBx促进肝癌细胞迁移的分子机制具有重要意义.
文摘乙型肝炎病毒中的功能蛋白乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在促进肝细胞恶性改变中起到重要作用,但目前HBx调控肝癌细胞生长的具体机制仍未完全阐明。miR-122是具有抑癌特性的一类miR,在乙肝相关肝癌中表达减少。为了研究HBx通过微小RNA(microRNA,miR)-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的作用,本研究培养肝癌HepG2细胞株并进行分组,NC组转染NC慢病毒载体、HBx组转染HBx慢病毒载体、HBx+NC模拟物组转染HBx慢病毒载体及NC模拟物、HBx+miR-122模拟物组转染HBx慢病毒载体及miR-122模拟物、NC模拟物组转染NC模拟物、miR-122模拟物组:转染miR-122模拟物。通过MTS法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,PCR检测miR-122表达量,western blot检测细胞周期蛋白G1(CyclinG1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达量。结果显示HBx组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显高于NC组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显低于NC组(P<0.05);HBx+miR-122模拟物组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显低于HBx+NC模拟物组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显高于HBx+NC模拟物组(P<0.05);miR-122模拟物组CyclinG1、XIAP、β-catenin荧光素酶报告基因的荧光活性明显低于NC模拟物组(P<0.05)。本研究结果充分说明HBx能够增强肝癌细胞的增殖活力及明显加速细胞周期,且该作用部分由miR-122的下调所介导。本研究首次阐明了HBx调节肝癌细胞生长的分子机制,也初步探明了具有抑癌活性的miR-122在肝癌细胞中可能靶向CyclinG1、XIAP、β-catenin等基因。
文摘以PubMed和Web of Science数据库作为检索工具,采用文献计量学方法对乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)研究文献从时间分布、期刊分布、国家分布等方面进行分析,通过可视化软件HistCite和CiteSpace对HBx相关文献生成可视化引文编年图及热点知识图谱,探讨HBx研究热点和前沿,揭示其发展历程。
文摘目的观察ASPP2对HBx引起的细胞自噬的改变。方法运用Hbx转染Hep G 2细胞,ASPP2过表达与对照情况下,采用免疫印迹技术检测内源性自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62的表达,采用免疫荧光方法检测LC3荧光颗粒表达水平,采用RT-PCR技术检测自噬相关基因Beclin-1的m RNA转录水平。结果免疫印迹技术显示转染HBx质粒比转染空载组的LC3Ⅱ量增多,但是在加入ASPP2腺病毒组比空载组的LC3Ⅱ表达量减少。免疫荧光显示转染HBx质粒比转染空载组的LC3荧光颗粒多,但是在共转染ASPP2质粒组比空载组的LC3荧光颗粒减少。RT-PCR方法显示转染HBX质粒比转染空载组的表达增多,但是在加入ASPP2腺病毒组比空载组表达量减少。结论ASPP2可以抑制HBx引起的细胞自噬。
文摘上调基因4(up-regulated gene-4,URG4)是受乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)激活的下游基因之一,最初在转染HBx的HepG2细胞中被克隆,因其上调细胞增殖效应而得名。研究发现,URG4在HBx转染后的HepG2细胞中表达明显增加,同时细胞生长加速,存活率提高,表明URG4与乙肝病毒相关的肝细胞癌发生可能相关。近年来,人们发现URG4不仅在肝癌细胞中高表达,还与胃癌、骨肉瘤、非小细胞肺癌、神经母细胞瘤等多种癌症相关。本文结合近年来对URG4的研究成果,包括URG4基因及其蛋白质的结构与功能,URG4在癌症发生发展中的作用,以及在癌症早期诊断和预后中的意义进行综述,可望为后续深入地开展URG4与癌症的研究提供参考。
文摘着色性干皮病D组蛋白(Xeroderma pigmentosum group D,XPD)是基础转录因子ⅡH(Transcript factorⅡH,TFⅡH)复合体的第二大亚基,它在转录和核苷酸剪切修复过程中都发挥着重要作用。我们利用人宫颈鳞癌上皮细胞(HeLa细胞)中提取的总RNA进行逆转录酶-聚合酶链反应(Reverse transcriptase-polymerase chain reac-tion,RT-PCR),克隆出人全长XPD cDNA,把此基因按野生型插入表达绿色荧光蛋白的pEGFP-N2质粒,构建了pEGFP-N2/XPD重组体质粒,并将其转染入整合有乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)的人肝癌细胞Hep3B,分析重组细胞的XPD表达水平、HBx表达水平和细胞增殖力,为进一步研究XPD的各种生物学活性及作用机制奠定了基础。
文摘The chronic infection of hepatitis B virus(HBV) is closely related to the occurrence and development of hepatocellular carcinoma(HCC). Accumulated evidence has shown that HBV X protein(HBx protein) is a multifunctional regulator with a crucial role in hepatocarcinogenesis. However, information on the mechanism by which HBV induces HCC is lacking. This review focuses on the pathological functions of HBx in HBV-induced hepatocarcinogenesis. As a transactivator, HBx can modulate nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells(NF-κB) and transcription factor AP-2. Moreover, HBx can affect regulatory non-coding RNAs(ncRNAs) including microRNAs and long ncRNAs(lncRNAs), such as miRNA-205 and highly upregulated in liver cancer(HULC), respectively. HBx is also involved in epigenetic modification, including methylation and acetylation. HBx interacts with various signal-transduction pathways, such as protein kinase B/Akt, Wnt/β-catenin, signal transducer and activator of transcription, and NF-κB pathways. Moreover, HBx affects cellular fate by shifting the balance toward cell survival. HBx may lead to the loss of apoptotic functions or directly contributes to oncogenesis by achieving transforming functions, which induce hepatocarcinogenesis. Additionally, HBx can modulate apoptosis and immune response by direct or indirect interaction with host factors. We conclude that HBx hastens the development of hepatoma.
文摘Hepatitis B virus(HBV)is regarded as a stealth virus,invading and replicating efficiently in human liver undetected by host innate antiviral immunity.Here,we show that type I interferon(IFN)induction but not its downstream signaling is blocked by HBV replication in HepG2.2.15 cells.This effect may be partially due to HBV X protein(HBx),which impairs IFNβpromoter activation by both Sendai virus(SeV)and components implicated in signaling by viral sensors.As a deubiquitinating enzyme(DUB),HBx cleaves Lys63-linked polyubiquitin chains from many proteins except TANK-binding kinase 1(TBK1).It binds and deconjugates retinoic acid-inducible gene I(RIG I)and TNF receptor-associated factor 3(TRAF3),causing their dissociation from the downstream adaptor CARDIF or TBK1 kinase.In addition to RIG I and TRAF3,HBx also interacts with CARDIF,TRIF,NEMO,TBK1,inhibitor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells,kinase epsilon(IKKi)and interferon regulatory factor 3(IRF3).Our data indicate that multiple points of signaling pathways can be targeted by HBx to negatively regulate production of type I IFN.