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禽流感病毒血凝素分子生物学研究进展 被引量:24
1
作者 曹梅 田夫林 庄文忠 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期35-37,61,共4页
禽流感病毒基因组由 8条单性负链RNA组成 ,血凝素基因是禽流感病毒基因组中变异最大的基因 ,禽流感病毒的抗原性和致病性很大程度上取决于该基因的变异情况。血凝素在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用 ,但可刺激机体产生中和抗体来中和... 禽流感病毒基因组由 8条单性负链RNA组成 ,血凝素基因是禽流感病毒基因组中变异最大的基因 ,禽流感病毒的抗原性和致病性很大程度上取决于该基因的变异情况。血凝素在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用 ,但可刺激机体产生中和抗体来中和病毒的感染力 ,而且血凝素诱导机体产生的体液免疫反应 ,对宿主抵抗禽流感起到了决定性保护作用 ,使目前研制血凝素基因工程疫苗成为禽流感病毒疫苗的研究热点。血凝素发挥功能之前必须裂解为两条肽链 HA1和 HA2 ,其裂解位点的氨基酸残基的组成是决定禽流感病毒致病力高低的主要因素。文章主要从血凝素的基因及其编码的蛋白、裂解位点序列和基因疫苗等角度对禽流感病毒血凝素分子生物学的研究状况进行了综述 。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 分子生物学 基因组 基因工程疫苗 编码蛋白 序列分析
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禽流感HA基因疫苗脂质体的制备及其理化性质 被引量:17
2
作者 陈吉祥 李广林 +4 位作者 薛飞群 陈化兰 于康震 赵荣材 李树本 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期230-232,共3页
用改良的逆相蒸发法制备了H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(HA)基因重组质粒pSVH7脂质体。电镜观察表明,该脂质体多呈球形的单层或多层结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围20~700nm,平均粒径163nm,主要粒径分... 用改良的逆相蒸发法制备了H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(HA)基因重组质粒pSVH7脂质体。电镜观察表明,该脂质体多呈球形的单层或多层结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围20~700nm,平均粒径163nm,主要粒径分布位于50~200nm(84.80%)。重组质粒DNA在脂质体的制备过程中保持了稳定性,并能抵抗DNA酶的水解破坏作用。吸收光谱表明,在248nm及268nm处脂质体有2个特征吸收峰,DNA的存在不改变吸收峰的位置,但能增加吸收峰的强度。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 疫苗 脂质体 理化性质
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禽流感病毒血凝素疫苗在转基因马铃薯中的表达 被引量:25
3
作者 宋长征 Hugh S Mason 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第5期3-4,共2页
利用转基因马铃薯表达禽流感病毒血凝素疫苗。将含有禽流感病毒血凝素序列的表达载体导入农杆菌 ,再感染马铃薯的幼茎外植体。转化植株的再生及温室栽培。Westernblot分析表明 ,83%的转化植株在其块茎组织中表达了重组血凝素 ,表达量占... 利用转基因马铃薯表达禽流感病毒血凝素疫苗。将含有禽流感病毒血凝素序列的表达载体导入农杆菌 ,再感染马铃薯的幼茎外植体。转化植株的再生及温室栽培。Westernblot分析表明 ,83%的转化植株在其块茎组织中表达了重组血凝素 ,表达量占总蛋白量的 0 0 3%~ 0 0 4 % 。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素疫苗 转基因马铃薯
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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究 被引量:11
4
作者 姜永萍 于康震 +3 位作者 邓国华 田国斌 乔传玲 陈化兰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1071-1075,共5页
表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA... 表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果为1/8和2/6;用剂量为5、20、35和50g pCIHA5分别免疫2次,免疫保护率分别为45.5%(5/11)、58.3%(7/12)、58.3%(7/12)和91.7%(11/12),5g的病毒分离结果为1/5,其余组未分离出病毒;pCIHA5免疫后AGP抗体均未检出,油苗免疫后其HI抗体虽高,但AGP抗体也呈阳性。结果显示,加强免疫应为DNA疫苗质粒pCIHA5的安全免疫方式,DNA疫苗质粒pCIHA5虽具有较为稳定的免疫原性和免疫保护性,但有必要进一步提高其在肌肉组织中的有效表达水平和抗体反应水平。 展开更多
关键词 H5亚型禽流感病毒 HA基因 基因表达 DNA疫苗 免疫保护效力
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广东地区流感H3N2毒株血凝素基因特征、进化和变异分析 被引量:16
5
作者 黄平 钟静 +4 位作者 梁丽君 侯年妹 倪汉忠 武婕 张欣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期330-335,共6页
为揭示广东地区2007~2010年甲型H3N2毒株血凝素(HA)基因特征和变异,采用时空抽样方法抽样,检测广东2007~2010年甲型H3N2毒株HA基因核苷酸序列,同时检索全球HA基因序列作为对照,采用Lasergene7.1和Mega 5.05软件对HA基因核苷酸序列进... 为揭示广东地区2007~2010年甲型H3N2毒株血凝素(HA)基因特征和变异,采用时空抽样方法抽样,检测广东2007~2010年甲型H3N2毒株HA基因核苷酸序列,同时检索全球HA基因序列作为对照,采用Lasergene7.1和Mega 5.05软件对HA基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料,对变异毒株进行进化速度分析;同时进行抗原分析。结果发现,广东2007~2010年H3N2毒株HA基因同义进化(Ks)和错义进化(Ka)速度分别为2.06×10-3~2.23×10-3核苷酸/年和1.05×10-3~1.21×10-3核苷酸/年,HA1较HA2的错义突变速率要高3.13倍。与疫苗株A/Perth/16/2009的HA基因比较,2009年广东毒株同源性达到98.8%~99.7%、2010年同源性达到98.0%~98.4%。在广东2007~2010年毒株中,HA1五个抗原表位均有氨基酸位点变异,尤其是2010年毒株B区(N160K)和D区(K174R/N)的变异;此外,广东2010年毒株受体结合部位(RBS)还发生K189E/N/Q和T228A置换变异;两个糖基化位点变异影响到抗原性;目前使用的H3N2疫苗株与目前流行毒株的抗原性有差异。广东地区2007~2010年的毒株中,血凝抑制抗体的抗原分析结果有差异。结果提示,目前广东乃至全球甲型H3N2毒株HA1B区和D区均有氨基酸位点变异,RBS的两个位点发生置换,糖基化位点变异影响到表位A区和B区抗原性;与WHO推荐2011年流感H3N2毒株疫苗株比较,目前流行毒株HA基因有抗原位点变异。 展开更多
关键词 流感 H3N2毒株 HA基因 表位 进化 疫苗株
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鸡新城疫病毒F48E9株血凝素神经氨酸酶基因免疫诱导免疫保护的初步研究 被引量:6
6
作者 刘胜旺 孔宪刚 +2 位作者 童光志 马云燕 卢景良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1565-1569,共5页
将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空... 将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空质粒作为对照。结果表明 ,新城疫基因疫苗能够诱导机体产生新城疫病毒特异的血清IgG抗体反应 ,但产生抗体所需的时间较长 ,抗体滴度的增加较为缓慢。人工接种新城疫强毒后 ,基因疫苗免疫组 4 / 6的鸡得到保护 ,而且保护鸡具有明显的抗体反应 ,2只鸡未得到保护 ,但其死亡时间明显迟于对照组鸡 ,死亡鸡具有典型的新城疫病毒感染鸡的病理形态学变化。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒F48E9株 血凝素-神经氨酸酶基因 诱导 免疫保护 基因免疫 基因疫苗
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基于血凝素的新型流感疫苗的研究进展 被引量:9
7
作者 李驰 冯靖 +1 位作者 杨春亭 许洪林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期272-279,284,共9页
现有流感疫苗虽然能够预防季节性流感,但不能有效防控流感大流行。在本世纪初人类社会面临H5N1禽流感和H1N1猪源流感等大流行威胁的前提下,欧美各国政府和疫苗企业加速了新型流感疫苗的研发进程。血凝素是现有流感疫苗的主要有效成分,... 现有流感疫苗虽然能够预防季节性流感,但不能有效防控流感大流行。在本世纪初人类社会面临H5N1禽流感和H1N1猪源流感等大流行威胁的前提下,欧美各国政府和疫苗企业加速了新型流感疫苗的研发进程。血凝素是现有流感疫苗的主要有效成分,也是诱生保护性抗体的主要抗原,因此成为新型流感疫苗抗原设计的热门靶点。本文就近年来基于血凝素的新型流感疫苗的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素 流感疫苗
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Avian influenza A(H7N9)virus:from low pathogenic to highly pathogenic 被引量:9
8
作者 William J.Liu Haixia Xiao +7 位作者 Lianpan Dai Di Liu Jianjun Chen Xiaopeng Qi Yuhai Bi Yi Shi George F.Gao Yingxia Liu 《Frontiers of Medicine》 SCIE CSCD 2021年第4期507-527,共21页
OriginalTranslation The avian influenza A(H7N9)virus is a zoonotic virus that is closely associated with live poultry markets.It has caused infections in humans in China since 2013.Five waves of the H7N9 influenza epi... OriginalTranslation The avian influenza A(H7N9)virus is a zoonotic virus that is closely associated with live poultry markets.It has caused infections in humans in China since 2013.Five waves of the H7N9 influenza epidemic occurred in China between March 2013 and September 2017.H7N9 with low-pathogenicity dominated in the first four waves,whereas highly pathogenic H7N9 influenza emerged in poultry and spread to humans during the fifth wave,causing wide concern.Specialists and officials from China and other countries responded quickly,controlled the epidemic well thus far,and characterized the virus by using new technologies and surveillance tools that were made possible by their preparedness efforts.Here,we review the characteristics of the H7N9 viruses that were identified while controlling the spread of the disease.It was summarized and discussed from the perspectives of molecular epidemiology,clinical features,virulence and pathogenesis,receptor binding,T-cell responses,monoclonal antibody development,vaccine development,and disease burden.These data provide tools for minimizing the future threat of H7N9 and other emerging and re-emerging viruses,such as SARS-CoV-2. 展开更多
关键词 H7N9 HPAIV clinical features epidemiology hemagglutinin immunity PATHOGENESIS vaccine
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表达流行性感冒病毒HA基因非复制型重组腺病毒的构建及免疫效果的研究 被引量:5
9
作者 赵小东 韩峰 +3 位作者 应革 王璇 王艳 吴淑华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期6-10,共5页
通过RT PCR扩增流行性感冒(流感)病毒HA基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack CMV,该重组质粒与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。PCR证实HA基因已整合至腺病毒基因组中,... 通过RT PCR扩增流行性感冒(流感)病毒HA基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack CMV,该重组质粒与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。PCR证实HA基因已整合至腺病毒基因组中,Westernblot结果检测到重组病毒感染293细胞中HA的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶10000和1∶1000。除血清IgG外,还在肺灌洗液中检测到分泌型IgA。滴鼻组的免疫效果强于灌胃组。经小剂量攻毒实验显示,重组腺病毒保护率为100%。该文成功构建了表达流感病毒HA基因的非复制型重组腺病毒,重组病毒免疫小鼠可产生较好的免疫效果。 展开更多
关键词 流行性感冒病毒 血凝素 重组腺病毒 疫苗 HA基因 非复制型重组腺病毒 RT-PCR
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H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析 被引量:7
10
作者 范文辉 王萌 +5 位作者 刘丽蓉 张鹤 张爽 凌红丽 刘文军 李晶 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-58,共10页
为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵... 为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZ?A-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株。SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵母中高效分泌表达,发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL,分子量约为37kDa。将酵母发酵上清经浓缩、纯化后,获得重组目的蛋白H5HA。将不同剂量的H5HA与不同佐剂联用后分别以滴鼻和肌肉注射两种方式免疫试验动物,进行免疫效力的评价。试验结果表明,H5HA具有较好的免疫原性,可诱导SPF鸡产生较高水平的IgG (血凝抑制效价达1∶64、病毒中和抗体效价为1∶218),最佳使用剂量为50μg/羽,与白油佐剂联用时效果最佳,且肌肉注射方式的免疫效果优于滴鼻方式。研究结果为H5亚型流感病毒亚单位疫苗的研制提供了理论支撑。 展开更多
关键词 H5亚型流感病毒 血凝素蛋白 毕赤酵母 亚单位疫苗
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2010-2013年中山市流感病毒(H3N2)血凝素基因特征分析 被引量:7
11
作者 吴衍恒 欧慧 +2 位作者 师舞阳 谢颖 周日东 《实用预防医学》 CAS 2015年第4期420-423,共4页
目的研究中山市2010-2013年流行的H3N2亚型流感病毒的血凝素基因特征,分析其基因变异情况。方法选取2010-2013年中山市流行的H3N2亚型流感病毒6株,用MDCK细胞分离病毒,提取病毒RNA,RT-PCR扩增HA基因并测定序列,利用BLASTn对序列进行相... 目的研究中山市2010-2013年流行的H3N2亚型流感病毒的血凝素基因特征,分析其基因变异情况。方法选取2010-2013年中山市流行的H3N2亚型流感病毒6株,用MDCK细胞分离病毒,提取病毒RNA,RT-PCR扩增HA基因并测定序列,利用BLASTn对序列进行相似性检索,分析其与疫苗株,不同年份、区域流行株的进化变异情况。结果共分离鉴定到6株H3N2亚型流感病毒,其中2株为2010年流行株,2株为2012年流行株,2株为2013年流行株。各年流行株与其他国家或地区当年大部分流行株在一个分支上,其进化距离随着进化时间变长而变远。2012年流行株相对2010年流行株在HA1区发生12个氨基酸位点变异,有3个位于B、C区。2013年流行株相对2012年流行株发生4个氨基酸位点变异,有2个位于A区。2012年、2013年流行株相对于疫苗株分别发生6、8个氨基酸位点变异,分别有2、4个位于A、B、C区。受体结合位点未发生变异。结论中山市H3N2亚型流感病毒流行株在年度之间存在一定程度变异,进化距离随着进化时间变长而变远,相对于疫苗株也存在一定程度上的变异。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感病毒 血凝素基因 基因变异 进化 疫苗株
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基于血凝素(HA)的新型流感疫苗研究进展 被引量:6
12
作者 王祥 周东明 《生命科学》 CSCD 2014年第9期943-948,共6页
新型广谱流感疫苗是预防和控制不断变异的流感病毒的重要手段。血凝素(HA)是流感病毒表面的糖蛋白,具有免疫原性,但其变异性强,是A型流感病毒发生抗原变异的主要原因。近年来研究发现,HA存在保守的恒定区,可诱导机体产生流感病毒特异性... 新型广谱流感疫苗是预防和控制不断变异的流感病毒的重要手段。血凝素(HA)是流感病毒表面的糖蛋白,具有免疫原性,但其变异性强,是A型流感病毒发生抗原变异的主要原因。近年来研究发现,HA存在保守的恒定区,可诱导机体产生流感病毒特异性广谱中和抗体,拮抗多种流感病毒的感染。因此,如何采取不同策略和方法,研发基于HA的新型疫苗成为流感防治研究的重点。就基于HA的新型流感疫苗研究进展作一综述。 展开更多
关键词 流感 血凝素 疫苗 中和抗体
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The Protection Efficacity of DNA Vaccine Encoding Hemagglutinin of H5 Subtype Avian Influenza Virus 被引量:2
13
作者 JIANGYong-ping YUKang-zhen DENGGuo-hua TIANGuo-bin QIAOChuan-ling CHENHua-lan 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2004年第12期943-947,共5页
The DNA vaccine pCIHA5 encoding hemagglutinin can protect SPF chicken against lethal H5N1 avian influenza virus challenge. The more characters about its protection efficacity were studied. The protective rates in 10... The DNA vaccine pCIHA5 encoding hemagglutinin can protect SPF chicken against lethal H5N1 avian influenza virus challenge. The more characters about its protection efficacity were studied. The protective rates in 10, 40, 70, 100 and 150 μg groups immunized with pCIHA5 were 12.5 (1/8), 58.3 (7/12), 72.7 (8/11), 50.0 (6/12) and 66.7% (8/12), respectively. The protective rates in 5, 20, 35 and 50 μg groups were 145.5 (5/11), 58.3 (7/12), 58.3 (7/12) and 91.7% (11/12), respectively. The 70, 100 and 5 μg groups have virus shedding of 1/8, 2/6 and 1/5. Though the inactived oil-emulsion vaccine has high HI antibody titers and 100% protective rate, the AGP antibody could be detected after vaccination. Results show that the pCIHA5 is fit to boost by intramuscular injection. This would be useful to the study on gene engineering vaccine of avian influenza virus. 展开更多
关键词 Avian influenza virus hemagglutinin DNA vaccine Protection efficacity
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2014-2015年商洛市流感病毒H3N2亚型血凝素(HA1)基因进化研究 被引量:4
14
作者 齐延亮 史伟 +4 位作者 段勇波 徐纪茹 戴侃记 张芳芳 余鹏博 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期6-11,共6页
目的分析2014-2015年度商洛市流感监测病毒血凝素(HA)基因变异情况并研究与推荐疫苗的匹配性。方法收集2014-2015年商洛市流感监测平台用狗肾传代细胞(MDCK)培养分离的H3N2亚型毒株,利用RT-PCR方法扩增分离HA片段,进行核苷酸序列测定,应... 目的分析2014-2015年度商洛市流感监测病毒血凝素(HA)基因变异情况并研究与推荐疫苗的匹配性。方法收集2014-2015年商洛市流感监测平台用狗肾传代细胞(MDCK)培养分离的H3N2亚型毒株,利用RT-PCR方法扩增分离HA片段,进行核苷酸序列测定,应用clustax2.1软件进行序列比对后,用Mega6.0软件构建系统发育进化树,系统进化树采用Neighboring-joining方法进行分析。结果 2014-2015年度分离的流感H3N2毒株同源性在97.2%~99.9%,与推荐疫苗株A/Texas/50/2012同源性为97.3%~98.5%;将分离毒株的HA1基因氨基酸与疫苗株比较,发现2014年毒株主要抗原决定簇氨基酸变异点有B区Y159F、S198P;2015年主要抗原决定簇氨基酸变异点有A区G142R,B区S159F、S198P。结论2014-2015年度商洛市流感H3N2亚型毒株关键抗原决定簇已经出现改变,A/Texas/50/2012作为疫苗组分已经不是最佳,亟需对我国流感H3N2亚型疫苗组分进行更新,应密切关注流感H3N2基因进化趋势。 展开更多
关键词 流感病毒 H3N2亚型 血凝素(HA) 疫苗株 基因进化
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欧亚类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白的表达及免疫原性评估 被引量:4
15
作者 贾云慧 许程志 +6 位作者 隋金钰 吴运谱 许榜丰 陈艳 杨焕良 乔传玲 陈化兰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期930-938,共9页
【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获... 【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN 展开更多
关键词 欧亚类禽型H1N1猪流感病毒 HA蛋白 重组质粒 免疫原性 DNA疫苗
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2007—2019年北京市朝阳区甲型H3N2流感病毒HA基因特征分析
16
作者 孙灵利 刘丹 +3 位作者 高艳 赵剑虹 张玉松 韩桃利 《国际病毒学杂志》 北大核心 2024年第4期316-321,共6页
目的了解北京市朝阳区甲型H3N2亚型流感病毒HA基因变异情况,为评估疫苗有效性提供基础数据。方法从全球流感共享数据库(GISAID)下载2007—2019年世界卫生组织推荐流感疫苗株及各分支代表株序列,与本研究H3N2亚型分离株的HA基因序列进行... 目的了解北京市朝阳区甲型H3N2亚型流感病毒HA基因变异情况,为评估疫苗有效性提供基础数据。方法从全球流感共享数据库(GISAID)下载2007—2019年世界卫生组织推荐流感疫苗株及各分支代表株序列,与本研究H3N2亚型分离株的HA基因序列进行系统进化、氨基酸变异分析和疫苗效力评估。结果2015年及之前的H3N2亚型流感多数属于3C.3a分支,2016年开始以3C.2a分支为主,2017年以3C.2a2为主,并进化至3C.2a3,2019年又转换为3C.3a1亚分支;2009年、2013年和2015年存在3C.2和3C.3分支共流行的现象。抗原决定簇A~D区共计存在54个氨基酸变异位点;受体结合部位的130环、190螺旋和220环区域均有氨基酸位点发生变异;各年均有发生糖基化位点的缺失/增加/转换,多数发生在HA1区域。预测流感疫苗效力(VE)为5.00%~47.00%(PepitopeMax值:0~0.2105)。结论北京市朝阳区2007—2019年H3N2流感病毒HA基因进化具有多样性和复杂性,且有可能发生了抗原漂移,部分年份流行株与推荐疫苗株匹配性较差,提示持续监测H3N2亚型流感病毒HA基因变异的必要性。 展开更多
关键词 甲型H3N2流感病毒 表面糖蛋白基因 血凝素 氨基酸变异 疫苗效力
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抗牙龈卟啉单胞菌牙周炎基因疫苗的构建及其表达研究 被引量:3
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作者 白国辉 苗晨琛 +3 位作者 陈靖 曾凤娇 田源 刘建国 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期5165-5173,共9页
为构建抗牙龈卟啉单胞菌的牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2-fimA、pVAX1-HA2-fimA/IL-15,并检测其在293T细胞的表达,本研究应用基因重组技术,构建以牙龈卟啉单胞菌HA2和fimA为目的基因、SD大鼠IL-15基因为免疫佐剂的真核表达质粒,用Lip200... 为构建抗牙龈卟啉单胞菌的牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2-fimA、pVAX1-HA2-fimA/IL-15,并检测其在293T细胞的表达,本研究应用基因重组技术,构建以牙龈卟啉单胞菌HA2和fimA为目的基因、SD大鼠IL-15基因为免疫佐剂的真核表达质粒,用Lip2000介导瞬时转染293T细胞,Western Blotting检测目的蛋白体外表达的情况。重组真核表达质粒经酶切及DNA测序鉴定构建正确,转染的293T细胞能够检测到目的蛋白的正确表达。本研究成功构建了真核共表达质粒pVAX1-HA2-fimA、pVAX1-HA2-fimA/IL-15,且目的基因能在真核细胞中正确表达,为下一步研制抗牙龈卟啉单胞菌的牙周炎基因疫苗提供了一定的帮助。 展开更多
关键词 牙周病 牙龈卟啉单胞菌 血凝素 菌毛蛋白 基因疫苗
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A Review on 2009 Influenza A Virus 被引量:3
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作者 刘超 刘连芬 +3 位作者 王波 李付国 姜乃化 曾晓辉 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第2期424-427,共4页
[Objective] The paper was to introduce the research progress of 2009 influenza A virus. [Method] 2009 influenza A virus was introduced from the aspects of classification and host, virology, molecular characteristics a... [Objective] The paper was to introduce the research progress of 2009 influenza A virus. [Method] 2009 influenza A virus was introduced from the aspects of classification and host, virology, molecular characteristics and vaccine. [Result] A novel influenza A/H1N1 virus emerged in early April 2009 quickly spread worldwide through human-to-human transmission. The virus contained a group of novel gene segments, the nearest known precursor was the virus found in swine. The virus appeared to retain the potential to infect swine again and thus continued reassort with swine viruses. All registered 2009 influenza A vaccines were tested for safety and immunogenicity in clinical trials on human volunteers, and all vaccines were found to be safe, single dose of vaccine could cause protective antibody responses. [Conclusion] The paper provided basis for further study on 2009 influenza A virus. 展开更多
关键词 Swine-origin influenza virus Influenza A H1N1 Gene reassortment hemagglutinin vaccine
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甲型H1N1流感病毒HA基因与沙门菌fljB基因的融合表达与鉴定 被引量:2
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作者 杨芸 潘志明 +4 位作者 马全刚 张磊 康喜龙 耿士忠 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期19-23,共5页
目的研发基于鞭毛蛋白的新型甲型H1N1流感疫苗。方法分别以鼠伤寒沙门菌SL7202基因组和含有甲型H1N1流感病毒HA基因的重组质粒pET-HA为模板,通过PCR扩增Ⅱ相鞭毛蛋白fljB和HA1-2基因,再通过overlapPCR将这两基因片段拼接成HA1-2-fljB,... 目的研发基于鞭毛蛋白的新型甲型H1N1流感疫苗。方法分别以鼠伤寒沙门菌SL7202基因组和含有甲型H1N1流感病毒HA基因的重组质粒pET-HA为模板,通过PCR扩增Ⅱ相鞭毛蛋白fljB和HA1-2基因,再通过overlapPCR将这两基因片段拼接成HA1-2-fljB,将其插入原核表达质粒pET30a(+),构建重组质粒pET-HA1-2-fljB,并转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白HA1-2-fljB的表达。结果正确构建出重组质粒pET-HA1-2-fljB,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,融合蛋白分子量约84kD,并具有良好的免疫反应性,能强烈诱导HEK293-mTLR5细胞分泌IL-8。结论成功表达具有TLR5生物学活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究甲型H1N1流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鞭毛蛋白 血凝素 原核表达 疫苗
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表达H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白重组新城疫病毒耐热株的构建 被引量:2
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作者 胡潇 温国元 +3 位作者 王红琳 罗青平 邵华斌 潘兹书 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期345-349,共5页
应用反向遗传操作技术,将H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白基因替换重组新城疫病毒耐热rTS-GFP/M株的绿色荧光蛋白基因,构建表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组新城疫病毒rTS-HA/M株.蛋白表达检测和病毒特性分析结果表明,该重组病毒能够在... 应用反向遗传操作技术,将H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白基因替换重组新城疫病毒耐热rTS-GFP/M株的绿色荧光蛋白基因,构建表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组新城疫病毒rTS-HA/M株.蛋白表达检测和病毒特性分析结果表明,该重组病毒能够在BHK-21细胞中高效表达HA蛋白,具有与亲本毒株类似的增殖能力、耐热特性和低致病性. 展开更多
关键词 H9亚型禽流感 新城疫病毒 耐热株 血凝素 二联疫苗
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