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发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立 被引量：4
1
作者 王赞 李献 +5 位作者 王慧 许苗苗 张捷 刘帅 周巍 史国华 《乳业科学与技术》 2021年第4期6-10,共5页
建立依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通... 建立依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明:采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10μg,T4 gp32添加量为5.0μg,得到与设计序列长度(304 bp)一致的扩增产物,检出限为2.6×10^(2) CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。 展开更多
关键词 依赖解旋酶恒温基因扩增法 发酵乳 沙门氏菌 快速检测 基础应用
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