海产品中溶藻弧菌的筛选及其致病因子的研究 被引量：15

1

作者 彭喜春 张宁 +2 位作者 冉艳红 桂博 陈龙 《现代食品科技》 EI CAS 2008年第4期312-315,共4页

溶藻弧菌能引起人类食物中毒。溶血毒素、耐热性肠毒素(ST)和不耐热性肠毒素(LT)是致病性微生物中常见的致病因子。本文对从扇贝、牡蛎、贻贝、沙虾、虾蛄等海产品中筛选的溶藻弧菌的种属和致病因子进行了研究,生化鉴定显示分离到的两... 溶藻弧菌能引起人类食物中毒。溶血毒素、耐热性肠毒素(ST)和不耐热性肠毒素(LT)是致病性微生物中常见的致病因子。本文对从扇贝、牡蛎、贻贝、沙虾、虾蛄等海产品中筛选的溶藻弧菌的种属和致病因子进行了研究,生化鉴定显示分离到的两株溶藻弧菌来源不同,基因测定显示它们同属于溶藻弧菌(V.alginolyticus);血琼脂平板法、兔小肠结扎法和乳鼠灌胃法显示来源不同的溶藻弧菌其产毒种类也不同,两株溶藻弧菌都能产生不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST),但只有1株能产生溶血毒素。 展开更多

关键词 溶藻弧菌 HSP60基因 耐热性肠毒素 不耐热性肠毒素 溶血毒素

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大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立 被引量：9

2

作者 孟相秋 袁超文 +6 位作者 刘文鑫 关玮琨 杜元策 李丹丹 赵姝静 唐杰 师东方 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期6-10,共5页

目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,... 目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47×103 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素 不耐热肠毒素 多重PCR

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新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌致病因子的分子生物学研究进展 被引量：5

3

作者 卫广森 许崇波 孙宇 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第10期837-842,共6页

阐述了新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)菌毛的结构、分子生物学特性、基因检测技术、菌毛抗原受体的生化特性以及菌毛载体系统的优点;另外,从分子结构与功能、作用机理、基因检测三方面叙述了新生仔猪ETEC不耐热肠毒素和耐热肠毒... 阐述了新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)菌毛的结构、分子生物学特性、基因检测技术、菌毛抗原受体的生化特性以及菌毛载体系统的优点;另外,从分子结构与功能、作用机理、基因检测三方面叙述了新生仔猪ETEC不耐热肠毒素和耐热肠毒素的研究进展。 展开更多

关键词 产肠毒素性大肠埃希氏菌 新生仔猪 菌毛 不耐热肠毒素 耐热肠毒素

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大肠杆菌耐热肠毒素的纯化及部分特性分析 被引量：3

4

作者 魏燕玲 周友泉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1991年第3期5-7,共3页

本文介绍一种简单、快速的提取和纯化大肠杆菌耐热肠毒素(ST)的方法,纯化过程包括:硫酸铵沉淀,Sephadex G-25 Bio-Gel P-4凝胶过滤。纯化后的纯毒素比活性为5×10~5鼠单位/mg蛋白。肠毒素被纯化167倍,回收率为33.7％。

关键词 大肠杆菌 耐热肠毒素 纯化 特性

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肠毒素大肠杆菌耐热肠毒素与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的制备和耐热肠毒素抗体测定 被引量：2

5

作者 郑继平 刘向昕 +3 位作者 王令春 王芃 李淑琴 张兆山 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期617-618,共2页

目的:弥补ST的弱抗原性,实现ST抗体测定。方法:采用生物工程技术,融合表达GST和带有前导序列的突变耐热肠毒素proSTm,制备ST融合蛋白,测定ST抗体。结果:测到了抗ST的血清IgG和黏膜IgA。结论:融合蛋白GST/proSTm能有效提高ST的抗原活性,... 目的:弥补ST的弱抗原性,实现ST抗体测定。方法:采用生物工程技术,融合表达GST和带有前导序列的突变耐热肠毒素proSTm,制备ST融合蛋白,测定ST抗体。结果:测到了抗ST的血清IgG和黏膜IgA。结论:融合蛋白GST/proSTm能有效提高ST的抗原活性,可直接用于ST抗体测定。 展开更多

关键词 耐热肠毒素 谷胱甘肽巯基转移酶 融合蛋白 抗体测定

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大肠杆菌热稳定肠毒素表位与霍乱毒素B亚单位的重组与表达 被引量：1

6

作者 任立成 胥全彬 +3 位作者 张助 赵志虎 刘传暄 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2003年第2期101-104,共4页

霍乱毒素B亚单位(CTB)是半抗原的良好载体,选择CTB基因的翻译调控元件,实现了串联重复的突变型大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)表位与CTB的重组,在大肠杆菌中高效分泌表达,经过亲和层析获得了高纯度的重组蛋白,ELISA表明重组蛋白仍保留与神经... 霍乱毒素B亚单位(CTB)是半抗原的良好载体,选择CTB基因的翻译调控元件,实现了串联重复的突变型大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)表位与CTB的重组,在大肠杆菌中高效分泌表达,经过亲和层析获得了高纯度的重组蛋白,ELISA表明重组蛋白仍保留与神经节苷脂GM1的结合能力和CTB的免疫原性。 展开更多

关键词 大肠杆菌热稳定肠毒素 霍乱毒素B亚单位 细菌性腹泻 免疫原性 基因重组 基因表达

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抗大肠杆菌肠毒素卵黄抗体的制备和鉴定 被引量：2

7

作者 赵姝静 李丹丹 +5 位作者 朱颖 韩林林 李金萍 杜元策 孟相秋 师东方 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期22-26,共5页

为了研究用不耐热肠毒素B亚基(LTB)和耐热肠毒素(STa)的融合蛋白制备鸡卵黄抗体的方法及其中和作用,试验将LTB和STa的编码基因串联并在大肠杆菌中表达获得了重组蛋白,以重组蛋白为免疫原免疫8月龄海兰蛋鸡制备了卵黄抗体,分别用兔肠段... 为了研究用不耐热肠毒素B亚基(LTB)和耐热肠毒素(STa)的融合蛋白制备鸡卵黄抗体的方法及其中和作用,试验将LTB和STa的编码基因串联并在大肠杆菌中表达获得了重组蛋白,以重组蛋白为免疫原免疫8月龄海兰蛋鸡制备了卵黄抗体,分别用兔肠段结扎试验和乳鼠灌胃试验进行了卵黄抗体对不耐热肠毒素(LT)和STa的体内中和试验。结果表明:用LTB和STa融合蛋白免疫产蛋鸡可诱导产生抗LTB和STa的卵黄抗体,其中抗LTB效价最高可达1∶8 647,抗STa效价最高可达1∶768;卵黄抗体对LT和STa均有中和作用。说明用融合蛋白作为免疫原制备的卵黄抗体具有抗LT和STa的生物学活性,对仔猪大肠杆菌性腹泻的临床治疗有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 耐热肠毒素 卵黄抗体 中和作用

原文传递

大肠杆菌热稳定肠毒素与霍乱毒素B亚单位融合蛋白免疫原性的评价 被引量：1

8

作者 任立成 赵志虎 +2 位作者 刘传暄 赵之伟 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期369-371,共3页

构建了霍乱毒素B亚单位CTB和大肠杆菌热稳定肠毒素ST的重组表达载体pMCST1、pMCST2。二者的不同是,前者为单拷贝ST,后者为双拷贝ST。在大肠杆菌DH5α中融合蛋白高效表达。用这两种重组蛋白分别免疫小鼠,都诱导产生了高滴度的抗CTB和抗S... 构建了霍乱毒素B亚单位CTB和大肠杆菌热稳定肠毒素ST的重组表达载体pMCST1、pMCST2。二者的不同是,前者为单拷贝ST,后者为双拷贝ST。在大肠杆菌DH5α中融合蛋白高效表达。用这两种重组蛋白分别免疫小鼠,都诱导产生了高滴度的抗CTB和抗ST的血清。表明这两组融合蛋白具有良好的CTB和ST的免疫原性,为进一步构建抗CTB和抗ST的产毒性细菌腹泻疫苗打下了基础。 展开更多

关键词 霍乱毒素B亚单位 大肠杆菌热稳定肠毒素 疫苗 重组表达载体

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表达大肠杆菌LT-B/ST融合抗原的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建 被引量：1

9

作者 徐兵 舒东 +2 位作者 张兆山 李淑琴 俞守义 《生物技术通讯》 CAS 1998年第4期264-267,共4页

编码LT-B/ST融合抗原的基因插入pYA248载体中,构建了重组质粒pXZL66。该重组质粒转入无毒鼠伤寒沙门氏菌SR-11,ΔCya,Δcrp,Δasd菌株X4072。此无抗药性的杂合菌株X4072(pXZL66)表达的LT-B/ST融合抗原具有LT和ST抗原性而没有生物毒性,... 编码LT-B/ST融合抗原的基因插入pYA248载体中,构建了重组质粒pXZL66。该重组质粒转入无毒鼠伤寒沙门氏菌SR-11,ΔCya,Δcrp,Δasd菌株X4072。此无抗药性的杂合菌株X4072(pXZL66)表达的LT-B/ST融合抗原具有LT和ST抗原性而没有生物毒性,可望成为预防ETEC腹泻和相应的沙门氏菌病双价口服活疫苗候选株。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 热敏肠毒素B亚基 耐热肠毒素 鼠伤寒沙门氏菌

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表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道免疫、屏障及抗氧化功能的影响 被引量：2

10

作者 吕阳 张林 +4 位作者 李雪妮 赵迪 易丹 陈洪波 吴涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1761-1768,共8页

旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道吸收、屏障、转运及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,分成4个处理组,分别为对照组(基础日粮)、STa组(基础日粮+2×109 CFU重组菌LMG194-STa)、LMG194组(基础日粮... 旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道吸收、屏障、转运及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,分成4个处理组,分别为对照组(基础日粮)、STa组(基础日粮+2×109 CFU重组菌LMG194-STa)、LMG194组(基础日粮+2×109 CFU大肠杆菌LMG194)和K88组(基础日粮+2×109 CFU大肠杆菌K88)。使用人工乳饲养,第5天进行攻毒,第7天屠宰取样。测量回肠免疫相关基因IFN-γ、IL-4与VNN1及回肠黏膜损伤基因Villin与MMP3的相对转录量,空肠黏膜上皮连接蛋白Occludin与Claudin-1相对表达量,以及十二指肠、回肠氧化相关酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)的活力与氧化相关产物丙二醛(MDA)的含量。试验结果表明,与对照组相比,STa组显著降低了回肠IFN-γ和IL-4基因相对转录量,VNN1相对转录量显著上调(P<0.05);STa组显著降低了基因Villin与MMP3相对转录量(P<0.05)及蛋白Occludin与Claudin-1相对表达量(P<0.05);同时,STa组十二指肠、回肠GSH-Px和回肠MPO活力显著降低(P<0.05);STa组十二指肠丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05)。结果显示,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪肠道免疫、屏障及抗氧化功能下降。 展开更多

关键词 耐热肠毒素 重组大肠杆菌 肠道免疫 黏膜屏障 抗氧化 仔猪

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CTB-mST2融合蛋白在大肠杆菌表达及其生物活性鉴定

11

作者 赵聪 张艳红 +1 位作者 张部昌 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2007年第3期208-212,共5页

目的:表达霍乱毒素B亚单位(CTB)和大肠杆菌突变的热稳定肠毒素(mST)的融合蛋白,并进行抗原性和免疫原性的分析。方法:通过连接肽(linker)将CTB基因和串连的mST连接,然后插入表达载体pET-22b(+),获得克隆,经IPTG诱导获得CTB-mST2融合蛋... 目的:表达霍乱毒素B亚单位(CTB)和大肠杆菌突变的热稳定肠毒素(mST)的融合蛋白,并进行抗原性和免疫原性的分析。方法:通过连接肽(linker)将CTB基因和串连的mST连接,然后插入表达载体pET-22b(+),获得克隆,经IPTG诱导获得CTB-mST2融合蛋白。采用多因素正交优选法优化了培养基及培养条件,对表达产物进行包涵体复性后,经过亲合层析纯化得到融合蛋白,并对该融合蛋白抗原性和免疫原性进行了分析。结果与结论:构建了高效表达工程菌,经摇瓶培养,在优化培养基及培养条件下融合蛋白表达量可达320 mg/L,占总蛋白40%。融合蛋白免疫小鼠,可获得高滴度抗CTB和ST血清;将融合蛋白与灭活的O157∶H7菌体组合免疫小鼠,可产生对O157∶H7毒株攻击的保护力。本研究可为构建抗ETEC和EHEC复合疫苗提供依据。 展开更多

关键词 霍乱毒素B亚单位 大肠杆菌热稳定肠毒素 大肠杆菌O157:H7 疫苗

原文传递

大肠杆菌耐热肠毒素基因多拷贝串联表达及其单克隆抗体的制备

12

作者 韩林林 阿力马斯别克.哈山 +6 位作者 李金萍 唐杰 刘文鑫 关玮琨 李星月 赵志腾 师东方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期233-237,共5页

为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r ST... 为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r STp5-His为免疫原,重组蛋白MBP-5STp为检测抗原,制备和筛选阳性杂交瘤细胞株,并采用western blot、阻断ELISA方法对MAb进行鉴定。结果显示,r STp5-His主要以包涵体形式表达,大小约为38 ku,具有良好的免疫原性,以其作为免疫原制备了4株能够识别天然STp的MAb,特异性良好。研究表明,多拷贝基因串联表达可以制备具有免疫原性的重组STp蛋白,所制备的MAb为天然STp和重组STp蛋白检测方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 耐热肠毒素 基因串联体 免疫原性 单克隆抗体

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携带大肠杆菌融合基因K88ac-STII的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与鉴定

13

作者 杨冬梅 陈创夫 +1 位作者 王鹏雁 任艳 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第3期312-315,共4页

为构建表达大肠杆菌菌毛蛋白K88ac和热稳定肠毒素STII的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,采用缺失腺苷酸环化酶基因(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(Δasd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)作为宿主,将编码K88... 为构建表达大肠杆菌菌毛蛋白K88ac和热稳定肠毒素STII的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,采用缺失腺苷酸环化酶基因(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(Δasd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)作为宿主,将编码K88ac-STII的融合基因插入Asd+组成型表达载体pYA3334中,通过2次转化引入宿主菌,成功构建了表达K88ac-STII融合基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌株S.typhimuriumX4550(pYA3334K88ac-STII),为防治仔猪腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。 展开更多

关键词 大肠杆菌 融合基因 不耐热肠毒素 鼠伤寒沙门氏菌 重组

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应用地高辛标记的寡核苷酸探针测定小肠结肠炎耶氏菌的耐热毒素

14

作者 袁佩娜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1992年第2期69-72,共4页

一个由23碱基组成的寡核苷酸片段经地高辛(Digoxigenin-11-DUTP)标记作为探针,能特异地测定小肠结肠炎耶氏菌的耐热毒素(yst)。135株致病性小肠结肠炎耶氏菌分布于0∶3,0∶5,0∶8和0∶9四个血清型。用此地高辛标记探针作菌落原位杂交试... 一个由23碱基组成的寡核苷酸片段经地高辛(Digoxigenin-11-DUTP)标记作为探针,能特异地测定小肠结肠炎耶氏菌的耐热毒素(yst)。135株致病性小肠结肠炎耶氏菌分布于0∶3,0∶5,0∶8和0∶9四个血清型。用此地高辛标记探针作菌落原位杂交试验,测得121株菌含 yst 基因,而用乳鼠试验测定时,仅26株菌显示肠毒素活性,其中,由败血症病人分离的9株0∶8型菌株均未能与此标记探针杂交。 展开更多

关键词 合成寡核苷酸 地高辛标记探针 致病性小肠结肠炎耶氏菌 耐热肠毒素

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大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与表达

15

作者 杨冬梅 陈创夫 +3 位作者 王鹏雁 王远志 李有文 刘君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期104-108,共5页

本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含... 本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含有asd基因的表达载体pYA3334,构建pYA-K88ac-STⅡ重组质粒。重组质粒鉴定正确后电穿孔转入缺失腺苷酸环化酶基因(△cya)、环腺苷酸受体蛋白基因(△crp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(△asd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)中,以获得重组菌株X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。结果显示该无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖,口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。通过本试验成功构建了表达K88ac-STⅡ融合基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。为防治仔猪腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。 展开更多

关键词 产肠毒索性大肠杆菌 融合基因 耐热肠毒素 鼠伤寒沙门氏菌 重组

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实时荧光PCR检测肠产毒性大肠埃希菌耐热肠毒素基因

16

作者 于新芬 潘劲草 +3 位作者 汪皓秋 孟冬梅 郑伟 张蔚 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第5期802-804,共3页

目的:建立实时荧光PCR的方法检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素(ST Ia和ST Ib)基因。方法:设计引物和探针,优化实时荧光PCR检测STIa和STIb基因的反应条件。检测ST阳性或阴性的20株大肠埃希菌和2株霍乱弧菌以评估方法的特异性。对9... 目的:建立实时荧光PCR的方法检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素(ST Ia和ST Ib)基因。方法:设计引物和探针,优化实时荧光PCR检测STIa和STIb基因的反应条件。检测ST阳性或阴性的20株大肠埃希菌和2株霍乱弧菌以评估方法的特异性。对90份腹泻病人肛拭子标本,经BP增菌4 h后以煮沸法提取DNA模板,直接检测STIa和STIb基因,阳性标本以普通PCR检测ST基因进行复核,并从阳性的初始肛拭子标本中分离鉴定携带ST的菌株。结果:实时荧光PCR具有较高的特异性。90份腹泻病人标本中,9份标本ST Ib基因阳性(10.0%),2份标本为ST Ia基因阳性(2.2%);阳性标本以普通PCR复核,符合率为100%。在9份STIb基因阳性和2份ST Ia基因阳性的初始肛拭子标本中,分别有8份和2份分离到STIb基因阳性的ETEC和STIa阳性的ETEC。结论:建立的实时荧光PCR方法,可用于ETEC菌株ST毒力基因鉴定和临床腹泻粪便标本的直接快速筛检。 展开更多

关键词 实时荧光PCR 耐热肠毒素 大肠埃希菌

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大肠杆菌耐热性肠毒素ST_1－LacZ融合基因的构建 被引量：10

17

作者 许崇波 冯书章 +2 位作者 刘子 刘晓明 岳军明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第4期313-319,共7页

利用含大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１基因的质粒ｐＢＳＴ２－６和含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ｐＵＣ１８，构建成ＳＴ１－ＬａｃＺ融合基因。将质粒ｐＢＳＴ２－６用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＢｇｌⅡ消化，经３％琼脂糖... 利用含大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１基因的质粒ｐＢＳＴ２－６和含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ｐＵＣ１８，构建成ＳＴ１－ＬａｃＺ融合基因。将质粒ｐＢＳＴ２－６用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＢｇｌⅡ消化，经３％琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收１４７ｂｐＤＮＡ片段，再将载体ｐＵＣ１８用ＢａｍＨＩ消化、碱性磷酸酶处理，最后将处理好的ｐＵＣ１８ＤＮＡ与１４７ｂｐＳＴ１ＤＮＡ通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶进行粘性末端连接，转化至受体菌ＤＨ５ａ中。通过菌落原位杂交筛选，共筛选出５３个为ＳＴ１基因探针杂交阳性的菌落。菌落原位杂交阳性的菌株经培养和抽提纯化质粒后，经限制性内切酶（ＥｃｏＲＩ／ＸｂａＩ和ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ）酶切分析和ＤＮＡ序列分析，证明重组质粒ｐＸＳＴ１含有ＳＴ１基因，而且ＳＴ１基因在重组ＤＮＡ中连接方向是正确的，具有正确的阅读框架。再者，ＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ１）菌株能在含ｘ－Ｇａｌ的ＬＢ平板上长成蓝色菌落，表明该菌株能表达具有β－半乳糖苷酶活性的大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１－β－半乳糖苷酶融合蛋白。ＳＴ１－ＬａｃＺ融合基因的构建，为研究ＳＴ的免疫原性和抗ＳＴ抗体在预防产肠毒素性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）感染中的作用? 展开更多

关键词 大肠杆菌 肠毒素 LACZ 基因 融合基因 基因克隆

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表达大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白工程菌株的免疫原性研究 被引量：5

18

作者 许崇波 卫广森 +1 位作者 王文成 王卓 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期9-12,共4页

已构建的能表达大肠杆菌K88ac_ST1_LTB 融合蛋白的工程菌株BL2 1 (DE3 ) (pXKST3LT5 )及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原 ,免疫小鼠 ,结果免疫小鼠至少能抵抗 2... 已构建的能表达大肠杆菌K88ac_ST1_LTB 融合蛋白的工程菌株BL2 1 (DE3 ) (pXKST3LT5 )及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原 ,免疫小鼠 ,结果免疫小鼠至少能抵抗 2MLD的大肠杆菌强毒株C83 90 2 (K88ac,ST+ ,LT+ )的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后 ,采集的血清能够中和天然ST1的毒性。这表明构建的工程菌株BL2 1 (DE3 ) (pXKST3LT5 )可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。 展开更多

关键词 K88ac-ST1-LTB融合蛋白 大肠杆菌 免疫原性 基因工程菌苗 大肠杆菌性腹泻

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大肠杆菌肠毒素ST_1、LT_B基因融合及其免疫原性研究 被引量：4

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作者 许崇利 许崇波 +1 位作者 逄越 王炎林 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第4期7-10,共4页

目的:构建大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因,并研究其表达产物的免疫原性。方法:采用PCR和基因突变技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增ST1突变基因和LTB基因,通过基因分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建含ST1-LTB融合基因表达载体的... 目的:构建大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因,并研究其表达产物的免疫原性。方法:采用PCR和基因突变技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增ST1突变基因和LTB基因,通过基因分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建含ST1-LTB融合基因表达载体的重组菌株,并用酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒,同时用ST1-LTB融合蛋白粗提物免疫小鼠,观察免疫攻毒保护效果。结果:构建了含ST1-LTB融合基因表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pXSL1),ST1-LTB融合基因的序列和阅读框架均正确,其表达的ST1-LTB融合蛋白能够被ST1单抗和LTB抗体识别,且该融合蛋白已丧失天然ST1肠毒素的活性。ST1-LTB融合蛋白能够诱发小鼠产生抗体,该抗体具有中和天然ST1肠毒素的毒性作用。结论:构建的重组菌株BL21(DE3)(pXSL1)可以高效表达ST1-LTB融合蛋白,其表达产物ST1-LTB融合蛋白具有良好的免疫原性,为更有效地预防仔猪黄痢提供了一种新型基因工程菌苗候选菌株。 展开更多

关键词 ST1基因 LTB基因 融合基因 基因表达 免疫原性

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大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理 被引量：5

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作者 尤建嵩 牛冬燕 +3 位作者 崔乃忠 孙永欣 金礼吉 徐永平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期847-851,共5页

介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b(STb)的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及STb致动物腹泻的机理。认为STb是一种十分重要的肠毒素,应进一步加强对STb及其致腹泻机理的研究。

关键词 产肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素b 腹泻 机理

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