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广西猪A群轮状病毒G9P[7]型的分离与初步鉴定 被引量：7
1
作者 米雪 陈荣琳 +12 位作者 张胜斌 刘雪婷 秦秋英 王奕斐 边金妮 程振孔 罗允燕 罗期方 张宁 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1722-1728,共7页
猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染仔猪可引起腹泻、脱水甚至死亡,是引起仔猪腹泻的常见病原,给养猪业造成巨大的经济损失。本研究为确定导致广西贵港某猪场仔猪腹泻的病原,采集腹泻仔猪的肠内容物,采用PCR方法检测猪流行性腹泻病... 猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染仔猪可引起腹泻、脱水甚至死亡,是引起仔猪腹泻的常见病原,给养猪业造成巨大的经济损失。本研究为确定导致广西贵港某猪场仔猪腹泻的病原,采集腹泻仔猪的肠内容物,采用PCR方法检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)以及PoRV病原,结果显示,仅PoRV为阳性,将其接种至Marc-145细胞,盲传4代后,可产生细胞皱缩、脱落等明显细胞病变。稳定盲传20代,每隔5代进行PoRV的检测,选取第10代的病毒上清液进行VP4、VP6和VP7基因测序及遗传进化分析,确定该分离株为G9 P[7]型。电镜观察,可见到大小约为70 nm的轮状病毒粒子,符合轮状病毒特征,进一步鉴定分离株为PoRV。结果表明,PoRV的分离鉴定为其分子生物学特性研究以及该病的有效防控奠定了基础,也为疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 腹泻 病毒分离 透射电镜观察
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猪A群轮状病毒LN-01-2013株的分离与鉴定 被引量：7
2
作者 张贺伟 王鑫 +2 位作者 夏铭崎 刘阳欣 武华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期470-475,共6页
将病料与等体积2.5g/L胰酶溶液混合均匀,于37℃恒温培养箱中孵育1h,分别接种于MA-104、Marc-145、ST细胞系以分离病毒并筛选该毒株最适细胞系。通过RT-PCR以及重组质粒构建对其进行分子生物学鉴定以及遗传进化分析。结果显示,成功分离出... 将病料与等体积2.5g/L胰酶溶液混合均匀,于37℃恒温培养箱中孵育1h,分别接种于MA-104、Marc-145、ST细胞系以分离病毒并筛选该毒株最适细胞系。通过RT-PCR以及重组质粒构建对其进行分子生物学鉴定以及遗传进化分析。结果显示,成功分离出猪A群轮状病毒LN-01-2013株,MA-104细胞系为其最适细胞系。LN-01-2013株的VP4基因型与P[7]基因型同源性最高,VP7基因型与G[9]基因型同源性最高。根据A群轮状病毒最新分类方法,LN-01-2013分离株属于P[7]G[9]型。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 分离 鉴定
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贵州1株G9P[23]型猪A群轮状病毒的分离鉴定及基因组序列分析
3
作者 柳佳佳 梁海英 +7 位作者 曾智勇 汤德元 王彬 叶泥 边孟婷 黄书 田红利 潘向英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期900-906,913,共8页
为了解贵州省G9型猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的基因组特征和遗传进化关系,本试验对送检腹泻仔猪的肠内容物和粪样进行病原检测,选取G9型PoRV阳性样品通过Vero细胞进行分离培养及病毒鉴定,并对分离毒株进行基因组遗传变异分析。结果显示,... 为了解贵州省G9型猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的基因组特征和遗传进化关系,本试验对送检腹泻仔猪的肠内容物和粪样进行病原检测,选取G9型PoRV阳性样品通过Vero细胞进行分离培养及病毒鉴定,并对分离毒株进行基因组遗传变异分析。结果显示,阳性样品经胰酶预处理后接种至Vero细胞,盲传至第15代出现稳定CPE,前期细胞变圆后固缩、脱落,后期胞浆界限不清,出现拉网现象,用特异性引物对细胞培养物进行RT-PCR鉴定,成功扩增341 bp的目的条带。细胞培养物的间接免疫荧光鉴定显示有特异性绿色荧光反应,电镜观察下可见晶格状排列的无囊膜病毒粒子,大小约70 nm,表明成功分离到1株PoRV,将之命名为GZZY2021。病毒增殖曲线结果显示,用GZZY2021株感染细胞后,0~12 h病毒含量最低,12~30 h病毒增殖速度最快,30~48 h病毒增殖速度较平缓,48 h病毒滴度达到峰值(10-5.60/0.1 mL),而后进入稳定期。全基因组克隆测序分析结果显示,GZZY2021分离株基因组全长为18 506 bp, 11个基因最相似序列同源性均>95.00%,VP1、VP2、VP4、VP7、NSP1、NSP3、NSP4基因与猪源毒株同源性最高,VP3基因与大熊猫源毒株相似性最高,VP6、NSP2、NSP5基因与人源毒株同源性最高,提示分离株为三元重配毒株,完整的基因型为G9-P[23]-I1-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1。VP4、VP7基因与同型参考毒株相比,分别发生5、3处独有氨基酸位点变异;与NX疫苗株的中和表位分别存在22、4处氨基酸位点差异。重组分析结果显示,GZAS2020株的NSP5基因是以PTR(FJ422141.1)为主要亲本毒株,A411(EF990694.1)为次要亲本毒株重组产生的毒株,重组断点位于121和321 bp。综上所述,本研究应用Vero细胞成功分离到1株G9P[23]型基因重配PoRV,不但可对持续监测贵州省PoRV的流行动态趋势提供研究数据,而且对筛选该领域的候选疫苗株以及该病的深入研究打下基础。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 分离鉴定 序列分析
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2022—2023年我国部分地区猪A群轮状病毒分子流行病学调查分析 被引量：1
4
作者 谷拉强 陶然 +5 位作者 程曦 张雪寒 周金柱 王丹丹 王建新 李彬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3083-3091,共9页
【目的】探究我国部分地区猪A群轮状病毒(RVA)的分子流行病学特征,明确当前的优势基因型,为RVA科学防控与疫苗研发提供理论依据。【方法】2022年1月—2023年3月收集江苏、江西、福建、山西和贵州5省36个规模化猪场送检的434份腹泻仔猪... 【目的】探究我国部分地区猪A群轮状病毒(RVA)的分子流行病学特征,明确当前的优势基因型,为RVA科学防控与疫苗研发提供理论依据。【方法】2022年1月—2023年3月收集江苏、江西、福建、山西和贵州5省36个规模化猪场送检的434份腹泻仔猪粪便样品,采用RT-PCR检测样品RVA阳性情况,对部分RVA阳性样品的VP7和VP4基因进行扩增及测序,与各型参考序列进行多序列比对,使用MegAlign进行核苷酸序列同源比对分析,并采用MEGA 7.0的邻接法构建系统发育进化树。【结果】RT-PCR检测结果显示,434份腹泻仔猪粪便样品中RVA阳性样品为196份,阳性检出率为45.16%。2022年与2023年初的阳性检出率分别为40.37%(132/327)和59.81%(64/107)。根据样品来源地区,RVA阳性检出率最高的是江苏(57.70%),其次是江西(55.71%),福建、贵州和山西的RVA阳性检出率分别是35.66%、30.00%和22.23%。共获得各地区12株RVA的VP4和VP7基因序列信息,遗传进化分析结果表明,G型中G9为优势基因型(占83.4%),G4和G5分别占8.3%;而P型中P7为优势基因型(占75.0%),其次为P13和P23,分别占16.7%和8.3%;12株RVA分属4种基因型组合,分别为G9P[7](占75.0%)、G5P[13](占8.3%)、G9P[13](占8.3%)和G4P[23](占8.3%)。【结论】我国部分省份猪场RVA阳性检出率持续升高,猪群中RVA基因型复杂多样,优势基因型组合为G9P[7]。因此,今后有必要对猪群中RVA的流行情况进行持续监测,结合基因型致病性制定预防措施并开发针对性疫苗。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 VP4基因 VP7基因 分子流行病学
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一起仔猪大肠杆菌与猪A群轮状病毒混合感染的诊断 被引量：1
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作者 梁乔 赵凤菊 +4 位作者 赵晓彤 曹东 顾贵波 杨本勇 李井春 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2017年第6期109-110,113,294,共4页
为了解抚顺市某猪场仔猪腹泻疫情的病因,对发病猪进行了病理剖检,并采取病料进行了细菌分离鉴定、药敏试验、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(PRV-A)三种病毒性腹泻病原的三重实时荧光RT-PCR检测。结... 为了解抚顺市某猪场仔猪腹泻疫情的病因,对发病猪进行了病理剖检,并采取病料进行了细菌分离鉴定、药敏试验、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(PRV-A)三种病毒性腹泻病原的三重实时荧光RT-PCR检测。结果表明:细菌分离鉴定所分离到的菌株培养特性及生化反应特性与大肠杆菌基本一致,经血清学鉴定所分离菌株菌体抗原血清型为O8;所分离菌株存在多重耐药现象,对四环素类、氯霉素类、磺胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、青霉素类药物均耐药;该猪场存在PRV-A感染。 展开更多
关键词 仔猪 细菌分离鉴定 RT-PCR检测 大肠杆菌 A群轮状病毒 耐药性检测
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猪A群轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
6
作者 韩斅 陈建飞 +5 位作者 时洪艳 张鑫 石达 迟延彬 李长龙 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期885-888,共4页
为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,r VP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂... 为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,r VP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1F4)。MAb鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1型,轻链为κ链;细胞上清液及腹水效价分别为1∶12 800和1∶106。Western blot和间接免疫荧光结果显示该MAb能够与天然的VP6蛋白反应。应用肽扫描技术鉴定显示该MAb对应抗原表位核心序列为134DYIENWNLQNR144。该MAb的制备为进一步研究VP6蛋白功能和建立RV检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 A群轮状病毒 VP6蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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猪A群轮状病毒的分离与鉴定 被引量：18
7
作者 库旭钢 张坤 +1 位作者 刘羽茜 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期275-281,共7页
目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行... 目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行病毒分离传代。再对分离毒株进行常规RT-PCR鉴定和电镜观察,并对分离毒株的VP6、VP7和VP8基因进行测序及序列分析。结果成功分离猪A群轮状病毒TM-a株,经序列同源性分析发现,与TM-a株VP6、VP7和VP8基因同源性最高的毒株分别为中国北京人源LL3354株、印度人源RMC321株和日本野猪源GUB-71株,其相似性为96.0%、95.1%和97.0%。该TM-a株轮状病毒不同基因表现出与人源轮状病毒和猪源轮状病毒的高度同源性,推测猪A群轮状病毒可能在人畜间传播,发生基因重组现象。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 分离 鉴定
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重组G3P[13]型A群猪轮状病毒全基因组测序分析 被引量：4
8
作者 王一丹 向华 +4 位作者 张斌 向萌 任玉鹏 邱文英 付利芝 《动物医学进展》 北大核心 2022年第4期1-7,共7页
为了解引发四川某猪场腹泻疫情的猪轮状病毒(PoRV)基因组特征和遗传变异规律,采用RT-PCR分别扩增PoRV 11个基因节段,并克隆测序,通过生物信息学分析软件研究病毒基因组特征、变异性及遗传进化规律。结果显示,SCMY-1株基因合型为G3-P[13]... 为了解引发四川某猪场腹泻疫情的猪轮状病毒(PoRV)基因组特征和遗传变异规律,采用RT-PCR分别扩增PoRV 11个基因节段,并克隆测序,通过生物信息学分析软件研究病毒基因组特征、变异性及遗传进化规律。结果显示,SCMY-1株基因合型为G3-P[13]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1,即G3P[13]型毒株。该毒株VP2、NSP2和NSP4基因与人源毒株同源性最高,分别与3株人源轮状病毒RVA/Human-wt/LKA/R1207/2009株、RVA/Human-wt/ZAF/UFS-NGS-MRC-DPRU2291/2009和RVA/Human/CU331-NR/08株单独聚为一小支,推测这可能增加SCMY-1株跨种传播到人的风险。此外,SCMY-1株VP4基因与美国3个猪源毒株同处一个小分支;VP7基因与RVA/Pig/China/LNCY/2016株遗传进化距离最近。上述结果提示,PoRV可能在国际和国内生猪贸易过程中被广泛传播。与NCBI上已登录毒株相比,SCMY-1株VP4、VP7蛋白氨基酸分别存在13个和2个独有氨基酸位点的突变,可能对VP4和VP7两个主要抗原毒力及抗原性产生影响。重组分析显示,SCMY-1株VP3基因由两个猪源亲本株重组而来,推测这可能增强病毒毒力和宿主适应性。研究结果丰富了PoRV基因组学和分子流行病学相关研究资料,为PoRV预防控制提供理论参考,也为深入研究PoRV跨物种传播的分子基础提供科学依据。 展开更多
关键词 型A群猪轮状病毒 基因组 遗传变异 基因重组
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A群轮状病毒NSP5蛋白在细胞器中定位特性 被引量：1
9
作者 谷凤丽 石达 +6 位作者 时洪艳 陈建飞 张鑫 袁婧 徐天 董慧 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期143-145,共3页
为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5... 为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,表达蛋白在MA-104细胞中的线粒体、内质网、高尔基体中均有分布,主要定位于细胞质。本研究为进一步分析病毒的复制和致病机理提供依据。 展开更多
关键词 A组猪轮状病毒 NSP5蛋白 MA-104细胞 共定位
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