鹅副粘病毒HN基因的克隆与序列分析 被引量：19

1

作者 赵文华 朱建波 +3 位作者 姚龙涛 信爱国 何水林 张念祖 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第2期10-13,共4页

以鹅副粘病毒GPVSF0 2毒株的基因组RNA为模板 ,通过RTPCR方法扩增出HN基因片段 ,然后将其克隆至T载体中。经PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序 ;测序后拼接得出HN基因的全序列。经分析HN基因编码区核苷酸序列 ,所测GPVSF0 2毒株与参考毒株N... 以鹅副粘病毒GPVSF0 2毒株的基因组RNA为模板 ,通过RTPCR方法扩增出HN基因片段 ,然后将其克隆至T载体中。经PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序 ;测序后拼接得出HN基因的全序列。经分析HN基因编码区核苷酸序列 ,所测GPVSF0 2毒株与参考毒株NL 96核苷酸序列的同源性为 86 %。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 HN基因 克隆 序列分析 RT-PCR 基因工程疫苗

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鹅副粘病毒与鹅细小病毒主要免疫原性基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的共表达及其免疫 被引量：9

2

作者 毕玉海 曹璐 +3 位作者 李志杰 母连志 徐明 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期125-127,共3页

根据测得的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片段(去除终止密码子),与转座载体pFastBac连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒(GPV)G... 根据测得的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片段(去除终止密码子),与转座载体pFastBac连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板,PCR扩增出有Linker的VP3基因(命名为LVP3)。再将重组质粒pFastBac-F与LVP3片段连接,构建重组转座载体pFF-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得重组Bacmid F-L-VP3转染Sf9昆虫细胞,所表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,特异蛋白分子质量约123 000。将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定证明,表达的F-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 鹅细小病毒 F基因 VP3基因 杆状病毒 免疫原性

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一株分离的鹅副粘病毒的毒力、致病性和传播方式的研究 被引量：10

3

作者 梁华丽 童富淡 +3 位作者 华炯钢 徐辉 顾亚仙 何永强 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第3期151-155,共5页

采用血清学、生物学方法,从一群病死鹅中分离到1株鹅副粘病毒(GPMV)。血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-I型(PMV-I);毒力测定显示分离病毒GPMV毒力与鸡F48E9毒株的毒力相似;F基因裂解位点序列的分析表明该分离病毒GPMV融合蛋白F裂... 采用血清学、生物学方法,从一群病死鹅中分离到1株鹅副粘病毒(GPMV)。血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-I型(PMV-I);毒力测定显示分离病毒GPMV毒力与鸡F48E9毒株的毒力相似;F基因裂解位点序列的分析表明该分离病毒GPMV融合蛋白F裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117。分离病毒GP-MV攻击不同新城疫(ND)抗体水平的雏鸡、蛋鸡和鹅,结果显示分离病毒GPMV与鸡ND强毒株的致病性相似,既可引起鸡、鹅典型的ND,也可引起非典型的ND,其发病率、死亡率、临床症状和病理变化与鸡、鹅本身的免疫状况有关。经不同途经感染试验表明,分离病毒GPMV可通过呼吸道、消化道和直接接触等方式传播给鸡。 展开更多

关键词 病毒 鹅副粘病毒 新城疫 非典型新城疫 HI抗体

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鹅副黏病毒与鸡新城疫病毒抗原变异关系的研究 被引量：8

4

作者 李志杰 毕玉海 +1 位作者 徐明 丁壮 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期322-324,共3页

试验对鹅副黏病毒NA-1株和鸡新城疫F48E9强毒株的抗原变异性进行了研究。经交叉血凝抑制试验、鸡胚交叉中和试验,采用R值分析方法,用抗原比值定量确定2种抗原的相似程度。结果表明:R值分别为0.446和0.500,二者确实存在抗原差异。

关键词 鹅副黏病毒病 鸡新城疫 抗原变异 R值 病毒中和试验

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鹅源副粘病毒NA-1株与鸡新城疫病毒F48E9株的抗原变异关系分析 被引量：4

5

作者 李志杰 丁壮 +1 位作者 毕玉海 徐明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期235-238,共4页

对鹅源副粘病毒NA-1株和鸡新城疫病毒F48E9株进行鸡胚半数感染量(EID50)与半数细胞感染量(TCID50)的测定,并采用交叉血凝抑制试验、鸡胚交叉中和试验、细胞交叉中和试验、交叉动物保护试验的比较,确定2种抗原的抗原比值和相似程度。结... 对鹅源副粘病毒NA-1株和鸡新城疫病毒F48E9株进行鸡胚半数感染量(EID50)与半数细胞感染量(TCID50)的测定,并采用交叉血凝抑制试验、鸡胚交叉中和试验、细胞交叉中和试验、交叉动物保护试验的比较,确定2种抗原的抗原比值和相似程度。结果表明:前3个交叉中和试验的R值分别为0.446、0.50、0.56,表明2毒株确实存在抗原差异;交叉动物保护试验说明,对制苗毒株的保护率高于非制苗毒株,提示仅采用新城疫疫苗很难有效预防鹅副粘病毒病,应倡导用现地分离的毒株制苗。 展开更多

关键词 鹅源副粘病毒 鸡新城疫病毒 抗原变异 R值 病毒中和试验

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F-Ⅶ型鹅源禽副黏病毒的分离及其特性研究 被引量：4

6

作者 卫广森 董国英 +8 位作者 李惠兰 徐连壁 韩德胜 顾贵波 段亚良 李胜杰 王丽云 魏澍 李风元 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第8期7-10,共4页

从辽宁省某鹅场雏鹅体内分离到 1株副黏病毒 ,该分离毒株具有血凝活性且血凝活性能被NDV标准阳性血清和鹅副黏病毒阳性血清所抑制 ,能使SPF鸡胚、非免疫鸭胚和鹅胚 10 0 %死亡 ;电镜观察见病毒颗粒呈多形性 ,多为圆形 ,有囊膜 ,直径 2 0... 从辽宁省某鹅场雏鹅体内分离到 1株副黏病毒 ,该分离毒株具有血凝活性且血凝活性能被NDV标准阳性血清和鹅副黏病毒阳性血清所抑制 ,能使SPF鸡胚、非免疫鸭胚和鹅胚 10 0 %死亡 ;电镜观察见病毒颗粒呈多形性 ,多为圆形 ,有囊膜 ,直径 2 0 0nm左右 ;ELD50 为 10 8.6 /mL ,MDT为 5 6h ,ICPI为 1.94。通过RT PCR扩增出F基因 ,鉴定为基因Ⅶ型强毒株 ,测序结果为HBS2 0 9,与CH2 0 0 0的同源率为 91.8% ,从而确定分离毒株属于禽副黏病毒Ⅰ型 (APMV Ⅰ )的基因变异强毒株。动物接种试验表明 ,该毒株对鸭无致病性 ,对鹅、鸡、鸽的致病率和致死率均达10 0 %。 展开更多

关键词 F一Ⅶ型鹅源禽副黏病毒 分离 强毒株 鉴定 F基因 形态特征 基因序列

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鹅副黏病毒辽宁分离株HN基因的克隆与序列分析 被引量：4

7

作者 刘艳霞 卫广森 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期90-94,共5页

采用RT-PCR技术对鹅副黏病毒辽宁分离株DG-01的HN基因进行了扩增,获得了1条1.8 kb的特异性条带.将此扩增产物克隆至pGEM-T载体,重组克隆质粒经鉴定后进行DNA序列测定.测序结果表明,所克隆的基因片段长度为1 810 bp,含有1个1 716 bp的开... 采用RT-PCR技术对鹅副黏病毒辽宁分离株DG-01的HN基因进行了扩增,获得了1条1.8 kb的特异性条带.将此扩增产物克隆至pGEM-T载体,重组克隆质粒经鉴定后进行DNA序列测定.测序结果表明,所克隆的基因片段长度为1 810 bp,含有1个1 716 bp的开放性阅读框架,编码571个氨基酸.核苷酸同源性分析表明:DG-01株与我国其他9株鹅副黏病毒的同源性为89.9%～95.1%;与国内外NDV HN基因的同源性为82.1%～95.2%,与国内标准强毒F48E9的同源性为84.7%,与Taiwan95和NL/96株的同源性分别为94.1%和95.2%. 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 HN基因 分离株 同源性 强毒 克隆 扩增产物 RT—PCR技术 DG 序列分析

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鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：4

8

作者 易春华 潘杰 +3 位作者 付薇 颜健华 徐贤坤 熊毅 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第25期11900-11902,共3页

[目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因，并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV—SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物，对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增，将扩增产物与pMD18-T载... [目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因，并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV—SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物，对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增，将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。[结果]该株副粘病毒株的HN基因和F基因核苷酸序列全长分别为1716和1662bp，与GPV—SFO2株的同源性均在97．3％左右，与LaSota株、F48E9株、JS株的同源性为80．3％～97．5％，与Miyadera株的同源性仅84．8％。[结论]分离株GX1株与禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）强毒株特征相符，属于APMV-1基因Ⅶ型。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 HN蛋白基因 F蛋白基因 克隆 序列分析

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鹅副粘病毒F和HN基因的克隆及原核表达载体的构建

9

作者 高宏丽 王君伟 +2 位作者 于天飞 管雪婷 唐志芬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期90-93,共4页

根据发表的鹅副粘病毒SF0 2株全基因组序列 ,分别设计合成一对引物和二对引物 ,分别采用RT_PCR方法和RT_套式PCR扩增出与预期设计大小相符的F基因和HN基因特异性条带。将扩增出的DNA片段克隆到pMD18_T载体中 ,转化TGI感受态细胞 ,经AMP/... 根据发表的鹅副粘病毒SF0 2株全基因组序列 ,分别设计合成一对引物和二对引物 ,分别采用RT_PCR方法和RT_套式PCR扩增出与预期设计大小相符的F基因和HN基因特异性条带。将扩增出的DNA片段克隆到pMD18_T载体中 ,转化TGI感受态细胞 ,经AMP/IPTG/X_Gal平板筛选 ,酶切鉴定 ,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定 ,结果表明 :鹅副粘病毒JS/ 1/ 97/Go株F基因全长 16 6 2bp ,编码 5 5 3个氨基酸残基 ;F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112 R_R_Q_K_R_F117,与NDV的强毒株特征相符。HN基因全长 1716bp ,编码 5 71个氨基酸残基。将F基因插入到原核表达质粒pGEX_6P_1的EcoRⅠ、XhoI多克隆位点之间 ,转化到TGI感受态细胞中 ,获得了表达F基因的阳性亚克隆重组质粒 ;将HN堪因插入原核表达质粒pProEXHTb的XBaⅠ、XhoⅠ多克隆位点之间 ,转化到TGI感受态细胞中 。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 RT-PCR F基因 HN基因

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鹅副粘病毒YF株的分离鉴定与生物学特性研究 被引量：3

10

作者 舒秀伟 陈生雷 +3 位作者 周丽 刘艳霞 苗玉和 李学志 《中国兽药杂志》 2013年第2期18-20,23,共4页

从辽宁省某鹅场病死鹅中分离到1株禽I型副粘病毒。应用鸡胚传代、电镜形态学观察、红细胞凝集、红细胞凝集抑制试验、血清中和试验、动物回归试验、免疫保护试验进行了研究,并进行了最小致死量平均死亡时间(MDT)、脑接种致病指数(ICPI)... 从辽宁省某鹅场病死鹅中分离到1株禽I型副粘病毒。应用鸡胚传代、电镜形态学观察、红细胞凝集、红细胞凝集抑制试验、血清中和试验、动物回归试验、免疫保护试验进行了研究,并进行了最小致死量平均死亡时间(MDT)、脑接种致病指数(ICPI)、静脉内接种致病指数(IVPI)三项毒力指标的测定。参照新城疫病毒毒力判定的标准及其方法,分别测定该分离株的鸡(鹅)胚MDT、1日龄鸡(鹅)ICPI和6周龄鸡(鹅)IVPI为51.6/68.6 h、1.75/1.70和1.68/1.72。结果表明,该分离株为鹅副粘病毒强毒株,命名为YF株。应用YF毒株制备的油乳剂灭活苗免疫实验鸡和雏鹅,结果表明有良好的保护率。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 分离鉴定 生物学特性

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鹅细小病毒-鹅副黏病毒二联嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定

11

作者 单春辉 李金斗 +5 位作者 吴佳奇 冯嘉轩 丁佳欣 陈凯楠 郭春红 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2237-2242,2307,共7页

基于新城疫病毒样颗粒(Newcastle disease virus-like particles,NDV VLPs)载体平台,采用胞外域替换的策略、昆虫杆状病毒表达系统、蔗糖密度梯度离心和透射电镜等方法,构建嵌合型病毒样颗粒。将鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)的VP3... 基于新城疫病毒样颗粒(Newcastle disease virus-like particles,NDV VLPs)载体平台,采用胞外域替换的策略、昆虫杆状病毒表达系统、蔗糖密度梯度离心和透射电镜等方法,构建嵌合型病毒样颗粒。将鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)的VP3基因与鹅副黏病毒病(goose paramyxovirus)的HN基因相连并命名为rVP3并构建了表达rVP3蛋白的重组杆状病毒rBV-rVP3,将其与本实验室前期构建的rBV-M和rBV-HN共感染sf9细胞72 h后获得鹅细小病毒病-鹅副黏病毒病二联嵌合型病毒样颗粒(GPV-NDV cVLPs)。采用超速离心和蔗糖密度梯度离心的方法纯化GPV-NDV cVLPs,并通过透射电镜进行观察,可见与野生NDV形态相似的cVLPs;利用Western blot技术对GPV-NDV cVLPs各组分蛋白进行鉴定,结果显示蛋白表达均正确。本试验为预防鹅细小病毒病(goose parvovirus infection,GP)和鹅副黏病毒病提供一种安全的、可“一针多防”的新型疫苗候选株。 展开更多

关键词 鹅细小病毒病 鹅副黏病毒病 VP3基因 嵌合型VLPs

原文传递

鹅副黏病毒NP蛋白间接ELISA检测方法的建立及免疫鹅抗体水平的检测 被引量：1

12

作者 周丽 藏玉婷 王君伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期695-699,共5页

以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、... 以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、血清和二抗均于37℃反应1 h,底物于37℃显色15 min。此间接ELISA方法的特异性强、重复性好。应用该方法对试验鹅血清进行检测,以HI试验为参照。经统计学处理后,比较了两方法测得的抗体效价,分别建立了各组鹅群的回归方程。显著性检验证明,这两种方法检测的抗体效价呈显著相关关系。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 NP蛋白 间接ELISA 消长规律

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鹅副粘病毒F基因的克隆及遗传变异分析 被引量：2

13

作者 董国英 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期176-179,共4页

以鹅副粘病毒LN-7-02株基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因片段,并克隆至T载体.经质粒PCR及酶切鉴定后,对阳性克隆进行测序.测序后拼接得到F基因上游539bp核苷酸序列,并推导出ATG后1～374bp氨基酸序列.序列分析表明,LN-7-02株F蛋... 以鹅副粘病毒LN-7-02株基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因片段,并克隆至T载体.经质粒PCR及酶切鉴定后,对阳性克隆进行测序.测序后拼接得到F基因上游539bp核苷酸序列,并推导出ATG后1～374bp氨基酸序列.序列分析表明,LN-7-02株F蛋白裂解位点区的氨基酸组成为112R-R-Q-K-R-F117,与禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1)强毒株特征相符.将LN-7-02与AMPV-1株CH2000、F48E9和LaSota进行同源性比较,结果LN-7-02与CH2000、F48E9和LaSota的同源性分别为91.8%、86%和84%,表明该毒株相对于经典的AP-MV-1在F基因上已发生了较大变异.根据国内外70株APMV-1的F基因核苷酸序列绘制系统发育进化树,结果疫苗株Lasota属于基因Ⅱ型,经典株F48E9属于我国特有的基因Ⅸ型,而LN-7-02株与鹅副粘病毒JS-9-01、ZJ-100和GD-QY97同属于APMV-1基因Ⅶ型. 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 F基因 克隆 序列分析

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鹅源副黏病毒融合蛋白在毕赤酵母细胞中的表达 被引量：2

14

作者 冯新 宋战昀 +3 位作者 刘阳 张琼 姜永莉 丁壮 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期7-11,共5页

应用特异性引物,从鹅源副黏病毒NA-1株中扩增出F蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pT-F。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pT-F,回收目的基因F片段,并将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαA-F。用PmeⅠ酶切pPICZαA-... 应用特异性引物,从鹅源副黏病毒NA-1株中扩增出F蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pT-F。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pT-F,回收目的基因F片段,并将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαA-F。用PmeⅠ酶切pPICZαA-F使其线性化,电击转化至感受态毕赤酵母GS115菌中。PCR法鉴定阳性重组子,10 mL/L甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Westernblot分析。结果表明,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为63 ku的重组蛋白,该重组蛋白可与NA-1株鹅源副黏病毒多克隆抗体发生特异性血清学反应。 展开更多

关键词 鹅源副黏病毒 F蛋白 毕赤酵母 表达

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鹅副粘病毒HN蛋白的原核表达与免疫学鉴定 被引量：2

15

作者 李彤彤 李银 +5 位作者 黄欣梅 赵冬敏 刘宇卓 张敬峰 刘飞 李祥瑞 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期217-220,共4页

以GenBank登录的鹅源副粘病毒GPMV ZJI株基因组全序列为模板,在HN基因开放阅读框上下游设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增得到HN基因,将目的基因克隆至pET32a表达载体上,转化至BL21中,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表... 以GenBank登录的鹅源副粘病毒GPMV ZJI株基因组全序列为模板,在HN基因开放阅读框上下游设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增得到HN基因,将目的基因克隆至pET32a表达载体上,转化至BL21中,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达。由结果可知,通过RT-PCR法扩增出HN基因,大小与预期一致。SDS-PAGE和Western-blot均得到预期条带,说明pET32a表达载体在BL21中成功表达了HN蛋白,为后续相关免疫学研究奠定基础。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 HN基因 原核表达

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RNAi靶向NP、L基因抑制鹅源副黏病毒在鸡胚成纤维细胞中的复制 被引量：2

16

作者 刘美 母连志 +4 位作者 孟轲音 丁壮 丛彦龙 尹仁福 李志杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期705-709,共5页

构建了针对鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株NP及L基因的RNA干扰质粒;将转染质粒36 h后的鸡胚成纤维细胞接种病毒,通过病毒滴度、实时荧光定量RT-PCR、细胞病变以及间接免疫荧光结果分析,表明均能抑制GPMV在CEF中复制和增殖。本试验对研究GPMV... 构建了针对鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株NP及L基因的RNA干扰质粒;将转染质粒36 h后的鸡胚成纤维细胞接种病毒,通过病毒滴度、实时荧光定量RT-PCR、细胞病变以及间接免疫荧光结果分析,表明均能抑制GPMV在CEF中复制和增殖。本试验对研究GPMV复制和抗病毒治疗提供了技术基础。 展开更多

关键词 鹅源副黏病毒 RNA干扰 鸡胚成纤维细胞 抑制

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鹅副粘病毒WF_(00)G分离株HN蛋白基因的测序与序列分析 被引量：1

17

作者 胡元庆 路振香 +2 位作者 张训海 金光明 陈会良 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期469-471,474,共4页

用鹅副粘病毒凤阳分离株WF00G做9～10日龄SPF鸡胚的尿囊腔接种，成功增殖了该病毒，采用一步法RT-PCR技术扩增WF00G病毒的HN基因，获得了1条约1．8kb的特异性条带。PCR产物回收纯化后测序。测序结果表明，扩增片段大小为1844bp，含有1个... 用鹅副粘病毒凤阳分离株WF00G做9～10日龄SPF鸡胚的尿囊腔接种，成功增殖了该病毒，采用一步法RT-PCR技术扩增WF00G病毒的HN基因，获得了1条约1．8kb的特异性条带。PCR产物回收纯化后测序。测序结果表明，扩增片段大小为1844bp，含有1个1716bp的开放性阅渎框，编码571个氨基酸。核苷酸同源性分析表明：WF00G株与其他12株鹅副牯病毒的同源性为89．9％-99．2％，与国内外其他NDVHN基因的同源性为81．7％～95．7％，其中与国内标准强毒株F48E9的同源性为84．7％，说明WF00G与国内外的传统毒株有较大变异。与Taiwan95株和NL／96株的同源性为94．3％和95．7％，说明WF00G与Taiwan95株和NL／96株亲缘关系较近，具有较高的相似性。 展开更多

关键词 鹅源副粘病毒 HN基因 序列测定 同源性分析

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鹅副黏病毒HN基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果

18

作者 夏铭崎 王淳玉 +1 位作者 许洪洁 胡桂学 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期204-207,共4页

以大量提取的鹅副黏病毒(GPMV)HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN和空载体pVAXⅠ肌肉注射BALB/c小鼠。利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,用ELISA方法检测小鼠血清中GPMV抗体,观察GPMV HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN在小鼠中的免疫效果。... 以大量提取的鹅副黏病毒(GPMV)HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN和空载体pVAXⅠ肌肉注射BALB/c小鼠。利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,用ELISA方法检测小鼠血清中GPMV抗体,观察GPMV HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN在小鼠中的免疫效果。结果表明:试验组小鼠血清中GPMV特异性抗体水平显著高于对照组,ELISA试验结果OD492值分别为1.360 0±0.101 7和0.358 0±0.018 1;试验组与对照组的淋巴细胞增殖试验刺激指数(SI)差异不显著,其SI值分别为1.181 2±0.030 1和1.119 1±0.035 5。由此说明,GPMV HN基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 HN基因 真核表达载体 免疫

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鹅副黏病毒分离株的生物学特性鉴定 被引量：1

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作者 吕晓娟 施祖灏 +3 位作者 俞燕 龚建森 单燕菊 刘学贤 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期530-534,共5页

从江苏某地患病鹅群的脑、脾病料组织中分离到1株病毒。经过试验鉴定,该毒株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,而不能被AI（H5亚型与H9亚型）和EDS-76标准阳性血清抑制。人工感染雏鹅,引起100%的发病和死亡,并与自然病例有... 从江苏某地患病鹅群的脑、脾病料组织中分离到1株病毒。经过试验鉴定,该毒株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,而不能被AI（H5亚型与H9亚型）和EDS-76标准阳性血清抑制。人工感染雏鹅,引起100%的发病和死亡,并与自然病例有相似的症状和病变。该野外分离病毒的鸡胚半数致死量为每0.1mL含有10-9.16,最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间（MDT）为58.8 h,1日龄SPF鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1.41,电境观察病毒颗粒呈多形性,粒径100～200 nm,有囊膜和纤突。综合上述结果得出,该野外分离病毒为鹅副黏病毒（GPMV）强毒力毒株。人工感染发病的鹅和鸡其临床症状及病理变化均与自然发病鹅的相类似。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 分离 鉴定 生物学特性 人工感染

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NA-1株鹅源副黏病毒表面结构蛋白HN的真核表达 被引量：1

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作者 冯新 宋战昀 +1 位作者 母连志 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期709-712,共4页

应用特异性引物,从鹅源副黏病毒NA-1株中扩增出HN蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHN。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pTHN,回收目的基因HN片段并将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαAHN。用SacⅠ酶切pPICZαAH... 应用特异性引物,从鹅源副黏病毒NA-1株中扩增出HN蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHN。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pTHN,回收目的基因HN片段并将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαAHN。用SacⅠ酶切pPICZαAHN使其线性化,并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1%甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western-blot分析。结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为63000的重组蛋白,且该重组蛋白可与NA-1株病毒多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明NA-1的HN蛋白片段在Pichiapastoris中获得成功表达。 展开更多

关键词 鹅源副黏病毒 HN蛋白 毕赤酵母 表达

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