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glyA基因及其编码的丝氨酸羟甲基转移酶 被引量：7
1
作者 刘万红 刘爱福 《氨基酸和生物资源》 CAS 2001年第2期13-16,21,共5页
glyA基因广泛存在于生物体中 ,其编码的丝氨酸羟甲基转移酶 (serinehydroxymethyltransferase,SHMT)催化丝氨酸和甘氨酸之间的相互转化 ,转化反应产生的 5,1 0 亚甲基四氢叶酸 (M THF)提供细胞新陈代谢—碳单位 ,此反应在细胞新陈代谢... glyA基因广泛存在于生物体中 ,其编码的丝氨酸羟甲基转移酶 (serinehydroxymethyltransferase,SHMT)催化丝氨酸和甘氨酸之间的相互转化 ,转化反应产生的 5,1 0 亚甲基四氢叶酸 (M THF)提供细胞新陈代谢—碳单位 ,此反应在细胞新陈代谢中处于重要地位。因此 ,研究 glyA基因及其编码的丝氨酸羟甲基转移酶具有重要的意义。介绍了 glyA基因的克隆、序列分析、调控组分和丝氨酸羟甲基转移酶的部分性质。 展开更多
关键词 glya基因 丝氨酸羟甲基转移酶 调控序列
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两种菌株来源的glyA基因的克隆、表达及酶活性检测 被引量：3
2
作者 姚琴 金霞 +1 位作者 宗义强 屈伸 《氨基酸和生物资源》 CAS 2006年第1期20-24,共5页
采用PCR方法,分别从大肠杆菌和嗜热链球菌基因组DNA中扩增获得glyA基因,分别克隆入载体pET-28 a(+)中并进行表达,分离和纯化得到两种不同来源的SHMT,分别检测两种SHMT的逆向酶活。比较来源于大肠杆菌K12与嗜热链球菌AS1.2471中的glyA基... 采用PCR方法,分别从大肠杆菌和嗜热链球菌基因组DNA中扩增获得glyA基因,分别克隆入载体pET-28 a(+)中并进行表达,分离和纯化得到两种不同来源的SHMT,分别检测两种SHMT的逆向酶活。比较来源于大肠杆菌K12与嗜热链球菌AS1.2471中的glyA基因表达的丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)的活性,以获得高活性的SHMT。结果成功获得两种菌中的glyA基因,并表达出具有较高活性的SHMT,其中嗜热链球菌中glyA基因表达出的SHMT的酶活性大约为大肠杆菌的两倍。从嗜热链球菌中克隆表达的SHMT具有更高的催化活性及良好的工业应用前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 嗜热链球菌 glya基因 丝氨酸羟甲基转移酶
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哈维氏弧菌glyA基因的克隆及原核表达分析 被引量：2
3
作者 孙国荣 马少鸿 +3 位作者 韦光本 张依琳 谭慧明 蔡双虎 《广东农业科学》 CAS 2020年第6期84-90,共7页
【目的】哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是存在于海水中的正常菌群,但近几年大密度养殖使它成为海水鱼致病甚至死亡的原因之一。对哈维氏弧菌ZJ0603株中的glyA基因进行克隆及原核表达分析,以期为下一步研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】应... 【目的】哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是存在于海水中的正常菌群,但近几年大密度养殖使它成为海水鱼致病甚至死亡的原因之一。对哈维氏弧菌ZJ0603株中的glyA基因进行克隆及原核表达分析,以期为下一步研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】应用PCR技术克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的glyA基因,并对其编码的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxylmethyltransferase,SHMT)进行理化性质、信号肽、亚细胞定位及高级结构分析。将克隆获得的glyA基因与表达载体pET-28a连接构建重组质粒pET-28a-glyA,然后构建BL21-pET-28a-glyA重组菌株,测序后选取正确的菌株用IPTG诱导并对重组蛋白进行Western blot分析鉴定。对表达重组菌株BL21-pET-28a-glyA的表达条件进行优化以获得大量蛋白。【结果】生物信息学分析结果表明,glyA基因全长为1296 bp,共编码431个氨基酸,SHMT的理论等电点为6.18,不稳定系数为28.66,总平均亲水性为-0.200,整体表现为亲水且分布在细胞质中,预期蛋白分子量为46.60 ku。成功构建表达重组质粒pET-28a-glyA并转入表达菌株中,经IPTG诱导后进行Western blot分析,结果表明成功获得了SHMT重组蛋白。【结论】用控制变量法对表达条件优化后发现,IPTG最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.4 mmol/L和37℃。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 glya基因 克隆 原核表达 条件优化
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大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)的克隆和表达 被引量：1
4
作者 沈天翔 那淑敏 +2 位作者 喻国策 谢家仪 贾盘兴 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期423-428,共6页
利用插入失活及营养缺陷型互补法将大肠杆菌K12 13kb的glyA基因克隆到质粒pBR329中。将重组质粒酶切,亚克隆,确定2.6kb PstI-EcoRI亚克隆片段带有完整的glyA基因。共获得12株glyA基因重组菌,对重组质粒进行了酶切鉴定。不同重组菌丝氨... 利用插入失活及营养缺陷型互补法将大肠杆菌K12 13kb的glyA基因克隆到质粒pBR329中。将重组质粒酶切,亚克隆,确定2.6kb PstI-EcoRI亚克隆片段带有完整的glyA基因。共获得12株glyA基因重组菌,对重组质粒进行了酶切鉴定。不同重组菌丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)活性及其酶表达量均不相同。受体菌未检测到丝氨酸的产生。重组菌株JM109(pSM13)、K12(pSM13)、K12(pSM14)和K12(pSM15)SHMT酶表达量分别占全菌可溶性蛋白的15.7％、15.4％、11.8％和9.48％。 展开更多
关键词 大肠杆菌 丝氨酸 羟甲基转移酶 glya基因 克隆
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一株高产丝氨酸羟甲基转移酶基因工程菌的构建及发酵产酶条件优化 被引量：1
5
作者 喻放 左振宇 +1 位作者 杨忠华 周卫 《武汉科技大学学报》 CAS 2013年第3期219-224,共6页
以E.coli AB90054基因组中DNA为模板,采用PCR方法扩增得到glyA基因,将该基因克隆到表达载体pET28a(+)中,转化表达菌株BL21(DE3)后筛选阳性重组子,并对筛选所得高表达基因工程菌G16进行培养条件和表达条件的优化。结果表明,当培养条件为3... 以E.coli AB90054基因组中DNA为模板,采用PCR方法扩增得到glyA基因,将该基因克隆到表达载体pET28a(+)中,转化表达菌株BL21(DE3)后筛选阳性重组子,并对筛选所得高表达基因工程菌G16进行培养条件和表达条件的优化。结果表明,当培养条件为38℃、pH为7.0、转速为150r/min时,基因工程菌的生长速度和菌液浓度最佳;当表达条件的诱导温度为30℃、诱导剂浓度为0.5mmol/L、诱导时间为5h时,基因工程菌诱导目的蛋白表达效果最好。通过SDS-PAGE分析和酶活测定后发现,在优化条件下基因工程菌G16发酵产丝氨酸羟甲基转移酶能力占菌体总蛋白的60%左右,且蛋白活性正常。 展开更多
关键词 glya基因 丝氨酸羟甲基转移酶 基因工程 发酵产酶
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glyA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
6
作者 王博 祝林 马立新 《氨基酸和生物资源》 CAS 2006年第2期45-47,共3页
根据已知的序列设计引物,以大肠杆菌XL10-Gold总DNA为模板进行梯度PCR,并进行DNA序列测定,其序列与已经报道的glyA基因完全一致。将其克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHBM905C上,获得表达质粒pHBM1001.该质粒转化毕赤酵母GS115所得重组子... 根据已知的序列设计引物,以大肠杆菌XL10-Gold总DNA为模板进行梯度PCR,并进行DNA序列测定,其序列与已经报道的glyA基因完全一致。将其克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHBM905C上,获得表达质粒pHBM1001.该质粒转化毕赤酵母GS115所得重组子经PCR验证后成功进行了诱导表达,并初步测定了酶活力。 展开更多
关键词 glya基因 毕赤酵母 基因克隆 分泌表达
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脱脂乳中苏氨酸的浓度对嗜热链球菌乙醛产量及glyA基因表达的影响
7
作者 丹彤 张和平 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2013年第2期4-6,共3页
这项研究以在酸奶发酵过程中产生良好风味Streptococcus thermophilus S13-6为实验菌株,考察了脱脂乳中苏氨酸的浓度对乙醛产量及glyA基因(编码丝氨酸羟甲基转移酶)表达的影响。结果表明,随着脱脂乳中苏氨酸浓度的增加,S13-6菌株的乙醛... 这项研究以在酸奶发酵过程中产生良好风味Streptococcus thermophilus S13-6为实验菌株,考察了脱脂乳中苏氨酸的浓度对乙醛产量及glyA基因(编码丝氨酸羟甲基转移酶)表达的影响。结果表明,随着脱脂乳中苏氨酸浓度的增加,S13-6菌株的乙醛的产量和glyA基因的表达量明显增加。说明丝氨酸羟甲基转移酶在S13-6菌株的乙醛代谢过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 乙醛 嗜热链球菌 glya 基因表达
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甲醇利用菌SDM11中glyA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1
8
作者 孔庆胜 张向阳 +2 位作者 韩晓琳 林强 董全林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期141-144,157,共5页
对甲醇降解菌Methylobacterium.sp SDM11中的glyA基因进行克隆及特性研究,以获得更多的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)资源。根据GenBank中已报道的Methylobacterium extorquensAM1中的glyA基因序列(登录号:... 对甲醇降解菌Methylobacterium.sp SDM11中的glyA基因进行克隆及特性研究,以获得更多的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)资源。根据GenBank中已报道的Methylobacterium extorquensAM1中的glyA基因序列(登录号:L33463)设计引物,以SDM11的基因组DNA为模板,PCR扩增glyA基因。利用pETblue-2载体将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。PCR扩增到一个1.40 kb大小的DNA片段,经过blast软件比对分析,发现该片段与已报道的Methylobacterium extorquensAM1的glyA基因的序列相似性为95%,氨基酸序列的相似性为98%。该基因编码468个氨基酸,预测的分子量大小为52.2 kD,等电点为7.02,发现纯化后的目标蛋白具有SHMT酶活性,并初步测定了酶活力。 展开更多
关键词 SDM11 glya基因 克隆 表达 SHMT酶
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