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Expression and analysis of zinc fi nger family gene in Lenzites gibbosa
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作者 Jun Zhang Yujie Chi +2 位作者 Shuxuan Li Jian Zhang Jie Chen 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2020年第5期1889-1898,共10页
Zinc finger transcription factors play significant roles in the growth and development of plant and animal,but their function remains obscure in fungi.Lenzites gibbosa mycelia were extracted and sequenced by transcrip... Zinc finger transcription factors play significant roles in the growth and development of plant and animal,but their function remains obscure in fungi.Lenzites gibbosa mycelia were extracted and sequenced by transcriptome analysis after growing on sawdust at different times to support mycelial growth of L.gibbosa in a nutrient matrix.Data bases used for analysis were the Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)annotation,the cluster of orthologous groups of proteins(COG)and gene ontology(GO)annotation.Zinc finger class genes related to the growth and development of L.gibbosa were screened.GO annotation and enrichment analysis of diff erentially expressed genes were carried out.A total of 114.55 Gb Clean Data were obtained from the L.gibbosa transcriptome.The average Clean Data in each sample was 6.16 Gb.The relative efficiency of reads between each sample and the reference genome was 88.5%to 91.4%.The COG analysis showed that most zinc finger protein genes were related to replication,recombination and repair function.GO enrichment analysis showed that the expressed genes involved in cellular process,cell part and binding.We identifi ed seventy-two expressed genes including seven up-regulated genes and sixty-five down-regulated genes by applying DESeq2 data analysis software.By comparing the significantly expressed genes with KEGG database,66 annotated sequences were obtained,and 35 primary metabolic pathways were annotated.Pathway enrichment analysis showed that differentially expressed genes were signifi cantly enriched in protein processing in endoplasmic reticulum and ubiquitin-mediated proteolysis pathways.Gene_11750 and gene_5266 are highly correlated with the growth and development of L.gibbosa and are closely related to protein processing in endoplasmic reticulum and ubiquitin-mediated proteolysis pathway.According to gene functional analysis,seven important differentially expressed genes related to the growth and development of L.gibbosa were identified. 展开更多
关键词 Lenzites gibbosa Differently expressed genes The transcriptome Zinc finger
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偏肿栓菌产锰过氧化物酶条件优化 被引量:9
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作者 张玉龙 池玉杰 闫洪波 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期88-94,共7页
采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基用4种不同的底物处理方式,对白腐菌偏肿栓菌在28℃下进行静止培养,得到不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测在470,420,310nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基... 采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基用4种不同的底物处理方式,对白腐菌偏肿栓菌在28℃下进行静止培养,得到不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测在470,420,310nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为其木质素降解酶系统锰过氧化物酶(MnP)、漆酶和木质素过氧化物酶(LiP)产生的依据。结果表明:偏肿栓菌可产生MnP(必须在Mn2+存在的条件下)和漆酶(不依赖于Mn2+),但不产生LiP;在培养液内添加底物木屑和2,6-DMP后可显著提高2种酶的分泌量。在此基础上,用含Mn2+和青杨木屑的LNAS培养基对偏肿栓菌在30℃下静止培养作为初始培养条件,然后采用2次正交试验和多种单因素试验对偏肿栓菌产MnP的培养基组分和培养条件进行优化。结果表明:在试验设定的因素和水平范围内的最优组合是培养液果糖浓度为5g.L-1、酒石酸铵浓度为15mmol.L-1、锰离子浓度是200μmol.L-1、吐温-80浓度为0.25mL.L-1,MgSO4.7H2O浓度为0.35g.L-1、矿质元素溶液和维生素溶液加入量分别为10和1mL.L-1;培养液pH值4.5;培养温度27℃;150r.min-1摇瓶培养条件下装液量为110mL。酶活可达314.52U.L-1,比优化前提高8.4倍。 展开更多
关键词 偏肿栓菌 木质素降解酶 锰过氧化物酶 培养条件 正交试验
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偏肿栓菌内生木霉菌株18-21抑菌效果研究 被引量:8
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作者 李强 李小林 +4 位作者 黄羽佳 陈诚 黄文丽 熊川 郑林用 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期17-21,共5页
为了筛选获得对植物根腐病及食用菌腐败等有效的生防菌,采用抑菌圈法和对峙培养法筛选生防菌株,通过形态学和16S r DNA分子鉴定确定生防菌分类地位。从1株野生偏肿栓菌Trametes gibbosa子实体中分离获得1株具有抑菌效果的生防菌,代号为1... 为了筛选获得对植物根腐病及食用菌腐败等有效的生防菌,采用抑菌圈法和对峙培养法筛选生防菌株,通过形态学和16S r DNA分子鉴定确定生防菌分类地位。从1株野生偏肿栓菌Trametes gibbosa子实体中分离获得1株具有抑菌效果的生防菌,代号为18-21。筛选获得的这株生防菌对植物根腐病及食用菌腐败病原菌腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)的抑制率分别为56.7%、65.8%,并对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、侧芽胞杆菌(Bacillus latersprorus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)等病原细菌均具有显著的抑菌效果,通过形态学和分子生物学分类鉴定,确定为渐绿木霉(Trichoderma viridescens)。研究结果拓宽了生防菌的分离材料来源,丰富了生防资源,具有很大的应用潜力。 展开更多
关键词 偏肿栓菌 内生菌 生物防治 抑菌 镰刀菌
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偏肿拟栓菌共代谢降解芘条件的优化 被引量:6
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作者 温继伟 高大文 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1516-1522,共7页
为提高中国东北土著白腐真菌偏肿拟栓菌(Pseudotrametesgibbosa)对高分子量多环芳烃芘的共代谢降解效果,通过正交试验研究了共代谢基质、接种量、装液量及2,2'-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)的最佳配比,同时采用浓度... 为提高中国东北土著白腐真菌偏肿拟栓菌(Pseudotrametesgibbosa)对高分子量多环芳烃芘的共代谢降解效果,通过正交试验研究了共代谢基质、接种量、装液量及2,2'-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)的最佳配比,同时采用浓度梯度法考察芘的初始浓度对偏肿拟栓菌共代谢降解芘的影响.结果表明,偏肿拟栓菌Pseudotrametesgibbosa共代谢降解芘的最佳培养基为:麸皮浓度为20WL,接种量为3片直径为10mm的菌片,装液量为50mL,不加ABTS,在该培养条件下,酶活可达53.41U/mL,对芘的降解率达到88.8%.初始浓度小于10mg/L的芘对菌体产酶有一定的促进作用,大于10mg/L时抑制漆酶的分泌,同时菌体对初始浓度小于90mg/L芘的降解率在22.24%-93.54%之间. 展开更多
关键词 共代谢 漆酶 偏肿拟栓菌 白腐真菌
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偏肿革裥菌GMC基因家族在木质条件下转录表达分析
5
作者 池玉杰 陈欣妍 +4 位作者 杨旭欣 郝雅昕 赵予璐 贾子烨 苏文浩 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期228-238,共11页
为揭示偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)在分解木材过程中葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(Glucosemethanol-choline oxidoreductases,GMCs)基因的功能,采用高通量测序技术对L.gibbosa分解木屑过程中0,3,5,7,11 d的菌丝体进行转录组测序,以Coun... 为揭示偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)在分解木材过程中葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(Glucosemethanol-choline oxidoreductases,GMCs)基因的功能,采用高通量测序技术对L.gibbosa分解木屑过程中0,3,5,7,11 d的菌丝体进行转录组测序,以Count值与校正后的FPKM值为表达量进行基因筛选。分析基因表达量变化情况及在eggNOG,COG,GO,KEGG,NR,SwissProt和Pfam等数据库中的功能注释结果,通过qPCR验证基因表达量。根据基因注释结果共筛选到23个GMCs基因,表达量变化表明其中有9个是差异基因。功能注释及富集结果表明,L.gibbosa的GMCs至少有6种,分别为纤维二糖脱氢酶、葡萄糖氧化酶、吡喃糖脱氢酶、L-山梨糖1-脱氢酶、醇氧化酶、吡喃糖氧化酶,属于CAZy-AA3家族下的4个亚家族,在木材木质素与综纤维素的降解过程中,它们主要参与能量转运和代谢有关的碳代谢、甲烷代谢、氨基酸代谢和脂质代谢;GMCs与木质素降解过程中H_(2)O_(2)的形成有特定关系,可与FAD结合,将初级醇基氧化形成醛并释放H_(2)O_(2),为过氧化物酶提供恒定反应底物。由于能在木质素和纤维素的降解过程中发挥重要的辅助作用,GMCs属于与木材降解相关的重要辅助酶系,为白腐菌中GMC家族在木材降解过程中的功能研究提供了依据。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶 木质素降解 转录组 差异表达基因
原文传递
偏肿革裥菌降解木质素关键基因挖掘 被引量:5
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作者 赵清泉 池玉杰 +1 位作者 张健 冯连荣 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期79-83,共5页
通过对白腐菌偏肿革裥菌( Lenzites gibbosa )在木质和非木质环境下的转录组进行测序,从而预测和筛选出 L.gibbosa 与木材降解有关的基因。采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO等数据... 通过对白腐菌偏肿革裥菌( Lenzites gibbosa )在木质和非木质环境下的转录组进行测序,从而预测和筛选出 L.gibbosa 与木材降解有关的基因。采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO等数据库注释方法对转录本进行比较分析,预测和筛选出 L.gibbosa与木材降解有关的基因。L.gibbosa 转录组测序两组试验组分别设置3个生物学重复样本,共得到6个样本42.71 Gb Clean Data,各样品Clean Data平均达到7.11 Gb,各样品的Reads与参考基因组的比对效率在88.51~91.37%。差异表达分析得到差异表达基因1 120个,其中上调370个,下调750个。差异基因被注释到GO数据库的有493个,注释到eggNOG数据库的有857个。eggNOG分析表明,差异基因表达多聚集在翻译后修饰、蛋白质折叠、蛋白分子伴侣;碳水化合物的运输和代谢;能量产生和转化;次生代谢产物的生物合成、运输和分解代谢等功能分类下。GO分析表明,显著性富集与频率较高的生物过程是氧化还原过程、氧化还原酶活性和木质素代谢过程。 L.gibbosa 降解木材与木质素分解代谢过程(GO:0046274)、氧化还原过程(GO:0055114)和氧化还原酶活性(GO:0016491)等3个基因本体功能类目密切相关。根据基因功能注释的结果得到7个与白腐菌降解木质素相关的重要差异表达基因。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 白腐菌 转录组 木质素 降解
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岭南乡土植物链荚豆、丁葵草、酢浆草的坪用价值 被引量:5
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作者 袁丽丽 樊波 +3 位作者 邹佩 邓惠娟 刘卓成 何国强 《草业科学》 CAS CSCD 2018年第8期1890-1898,共9页
乡土地被植物因其适应性强、病虫害少及养护成本低等优势在城市园林绿化应用中逐渐受到人们的关注。本研究选择深圳地区常见的3种乡土植物链荚豆(Alysicarpus vaginalis)、丁癸草(Zornia gibbosa)和酢浆草(Oxalis corniculata),通过测... 乡土地被植物因其适应性强、病虫害少及养护成本低等优势在城市园林绿化应用中逐渐受到人们的关注。本研究选择深圳地区常见的3种乡土植物链荚豆(Alysicarpus vaginalis)、丁癸草(Zornia gibbosa)和酢浆草(Oxalis corniculata),通过测定其株高、质地、密度、绿度、均一性、绿期、盖度、建植速率以及耐践踏性共9项指标,并按照"景观-性能-应用适合度"综合评价指标体系进行评价。结果表明,链荚豆耐践踏性较强、草坪强度高、建植速率较快,可作为游憩草坪以及保土草坪替代品种推广;丁癸草耐践踏性强、草坪强度高,可作为游憩草坪替代品种进行推广;酢浆草则因为叶形美、密度高、生长均匀,适宜作为观赏草坪替代品种进行推广。坪用价值综合评分以链荚豆在3种植物中最高,为14.550分;丁癸草次之(13.850);酢浆草最低(12.650)。3种乡土植物均具有较好的园林草坪应用前景,为深圳市及我国南方地区绿化工作提供了草坪草种新选择。 展开更多
关键词 深圳市 乡土植物 草坪草 坪用价值 链荚豆 丁癸草 酢浆草
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迷宫栓孔菌子实体提取物的抗氧化活性研究 被引量:1
8
作者 晏飞利 刘丹 +2 位作者 陈艾萌 吕向阳 马林 《安徽农业科学》 CAS 2023年第3期167-170,175,共5页
[目的]探究水和乙醇对迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)的提取效果及其提取物的抗氧化活性,并分析其主要抗氧化成分。[方法]以水和60%乙醇为溶剂提取迷宫栓孔菌子实体,以DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率以及铁离子还原力进行抗... [目的]探究水和乙醇对迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)的提取效果及其提取物的抗氧化活性,并分析其主要抗氧化成分。[方法]以水和60%乙醇为溶剂提取迷宫栓孔菌子实体,以DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率以及铁离子还原力进行抗氧化活性评价,福林酚法测定多酚含量,硫酸蒽酮法测定多糖含量,将抗氧化指标与多酚和多糖含量之间进行Pearson相关性分析。[结果]水提取物的得率为10.60%,60%乙醇提取物得率为4.27%;水提取物的多酚含量较高,60%乙醇提取物的多糖含量较高;所有处理均表现出良好的DPPH自由基清除能力和铁离子还原力,以及一定程度的超氧阴离子自由基清除能力,且水提取物的前2项指标均显著高于60%乙醇提取物;3项抗氧化指标均与多酚和多糖含量呈极显著正相关。[结论]迷宫栓孔菌的水提取物和60%乙醇提取物均具有抗氧化活性,水提取物的抗氧化活性更强,多酚及多糖都是其提取物的重要抗氧化活性成分,多酚的活性更强。 展开更多
关键词 迷宫栓孔菌 子实体提取物 抗氧化活性 多酚 多糖
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偏肿革裥菌产漆酶活性的诱导 被引量:4
9
作者 石亚攀 池玉杰 于存 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第12期150-155,共6页
【目的】研究不同诱导剂及其添加量对漆酶的诱导效果,以期在漆酶活性优化培养的基础上进一步提高偏肿革裥菌的漆酶活性。【方法】通过单项诱导剂筛选试验,检测在液体培养条件下12种不同诱导剂对漆酶活性的影响,进行最佳单项诱导剂浓度... 【目的】研究不同诱导剂及其添加量对漆酶的诱导效果,以期在漆酶活性优化培养的基础上进一步提高偏肿革裥菌的漆酶活性。【方法】通过单项诱导剂筛选试验,检测在液体培养条件下12种不同诱导剂对漆酶活性的影响,进行最佳单项诱导剂浓度的单因素试验,2种最佳诱导剂组合、Cu2+浓度、接种量、培养方式对漆酶活性的影响试验。【结果】在初始培养基中含有0.2 mmol·L^(-1)Cu2+的情况下,生物诱导剂麦麸和化学诱导剂愈创木酚对漆酶的诱导效果好、酶活性高,二者的最适添加量分别为1.5%和1.00 mmol·L^(-1),单独添加时在13天酶活性分别达1 873.16和1 975.72 U·L^(-1),是初始产酶培养基酶活性的13.0和13.7倍;而2种诱导剂组合即同时添加1.5%麦麸与1.00 mmol·L^(-1)愈创木酚,比单独使用其中1种诱导剂的效果更好,在150 r·min^(-1)摇动培养条件下,第11天酶活性峰值可达3 594.46 U·L^(-1),是初始培养条件酶活性的24.9倍。【结论】2种诱导剂组合可大幅度提高偏肿革裥菌的漆酶活性,比培养条件优化对酶活性的提高更显著。 展开更多
关键词 白腐菌 偏肿革裥菌 诱导剂 漆酶 酶活性
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偏肿革裥菌C2H2型转录因子SFP1基因克隆、生物信息学及表达分析
10
作者 王莹 池玉杰 +2 位作者 张健 谷新治 杨旭欣 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期100-107,共8页
以L.gibbosa菌丝体总RNA反转录的cDNA为模板,通过RT-PCR克隆得到一个C2H2型锌指转录因子的cDNA序列。对该基因进行基因克隆、生物信息学分析,并利用实时荧光定量法对木屑处理下该基因的表达进行分析。通过保守结构域预测与结构分析发现... 以L.gibbosa菌丝体总RNA反转录的cDNA为模板,通过RT-PCR克隆得到一个C2H2型锌指转录因子的cDNA序列。对该基因进行基因克隆、生物信息学分析,并利用实时荧光定量法对木屑处理下该基因的表达进行分析。通过保守结构域预测与结构分析发现该基因为裂指蛋白1类(SFP1)C2H2型锌指转录因子,具有2个C2H2家族的保守结构域,将该基因命名为Lg-sfp1。该基因CDS全长1947 bp,编码一个由648个氨基酸组成的亲水性膜内蛋白,蛋白大小为68.27 ku。通过SWISS-MODEL预测的三级空间结构发现两个完整的C2H2结构。木屑处理下Lg-sfp1基因表达比无木屑处理下表达量低,推断木屑促进了L.gibbosa氧化应激反应,当氧化应激反应大量发生时,参与氧化应激反应负调控的sfp1基因表达受到抑制,为后续研究偏肿革裥菌sfp1基因在木材降解,特别是氧化应激反应中的功能提供了理论基础。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 锌指转录因子 SFP1 基因克隆 基因表达
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偏肿革裥菌木屑处理下纤维素酶基因表达
11
作者 谷新治 张俊 池玉杰 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期108-114,共7页
白腐真菌能够降解木质纤维基质的所有成分,为了深入探讨在分子层面其对纤维素降解的机制,检测了白腐真菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)在木质和非木质环境下滤纸酶、β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶等纤维素酶的活性变化。... 白腐真菌能够降解木质纤维基质的所有成分,为了深入探讨在分子层面其对纤维素降解的机制,检测了白腐真菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)在木质和非木质环境下滤纸酶、β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶等纤维素酶的活性变化。并在转录组测序的基础上,对偏肿革裥菌的各种纤维素酶基因进行筛选,分析表达量,结合功能注释、代谢通路富集与生物信息学分析探讨纤维素酶的具体催化分解功能,从而分析这些纤维素酶基因的表达规律。结果表明:滤纸酶、β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶活性被木屑诱导效果明显,但并非一直被诱导表达;转录组测序共筛选出46个纤维素酶基因,京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析发现纤维素酶基因显著富集于淀粉和蔗糖代谢通路(ko00500)和氰基氨基酸代谢通路(ko00460),生物信息学分析发现β-葡萄糖苷酶基因产物中具有较多的非分泌蛋白及跨膜蛋白;β-葡萄糖苷酶基因的表达与其酶活变化关联性较差,其原因:一是对不在淀粉和蔗糖代谢通路中的相应同工酶基因未进行定量分析,二是纤维素酶活性不只受到基因转录水平的控制,且纤维素酶活性与基因转录水平没有直接的关系与关联,主要受到底物和培养条件的制约。本研究为深入了解白腐真菌的木材降解机制提供了纤维素酶基因及其表达的资料。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 转录组 纤维素酶 淀粉和蔗糖代谢通路
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偏肿革裥菌Lg-mnp1基因克隆及表达研究 被引量:4
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作者 闫洪波 池玉杰 吴书景 《安徽农业科学》 CAS 2014年第11期3186-3190,共5页
[目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白... [目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达。[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1。蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43。通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/Lg-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达。[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 基因克隆 毕赤酵母 基因表达
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迷宫栓孔菌热激蛋白基因的生物信息学与表达分析
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作者 杨旭欣 冯连荣 +1 位作者 池玉杰 韩树英 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期776-786,共11页
为了探究迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)家族的功能及结构,对经木屑处理不同时间点的菌丝样品进行cDNA建库,然后根据转录组数据筛选该菌株的所有HSPs基因并进行生物信息学分析;针对HSP100家族进行基... 为了探究迷宫栓孔菌(Trametes gibbosa)热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)家族的功能及结构,对经木屑处理不同时间点的菌丝样品进行cDNA建库,然后根据转录组数据筛选该菌株的所有HSPs基因并进行生物信息学分析;针对HSP100家族进行基因克隆和序列结构分析,并利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)对其在木屑处理下的表达量进行验证。结果如下:在迷宫栓孔菌中共筛选出32个HSPs基因,其编码的蛋白分为5个亚类,分别为HSP100(2个)、HSP90(2个)、HSP70(7个)、HSP60(1个)和小分子热激蛋白[small HSPs(sHSPs),20个],它们在菌体生长调控中具有蛋白翻译后修饰、蛋白质折叠、伴侣蛋白等重要功能。这些HSPs都为疏水蛋白,不同亚类的HSPs理化性质有所差异。HSP100由N-端、核苷酸结合域1(nucleotide-binding domain 1,NBD1)、NBD2、2个NBDs间的接头构成,其中,NBDs具有十分保守的Walker A、Walker B基序及精氨酸指残基。qRT-PCR扩增结果表明,在木屑处理下迷宫栓孔菌HSP100基因表达量有明显上调趋势。综上所述,迷宫栓孔菌中HSPs家族种类多且复杂,在应激情况下HSP100家族承担了重要的蛋白质解聚功能,其序列及结构相对保守。本研究结果为迷宫栓孔菌在胁迫应激方面的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 迷宫栓孔菌 白腐菌 热激蛋白 热激蛋白104 基因克隆 生物信息学
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偏肿革裥菌漆酶基因克隆及不同染料脱色研究 被引量:4
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作者 郑苗苗 池玉杰 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期744-750,共7页
染料由于具有复杂的化学结构通常难以降解.漆酶粗酶液对终浓度为50mg/L的不同化学结构的染料的脱色研究,可快速对蒽醌类茜素红进行脱色可达100%;杂环类中性红、偶氮类刚果红和三苯基甲烷类结晶紫的脱色效果低于茜素红,测试的3种染料均... 染料由于具有复杂的化学结构通常难以降解.漆酶粗酶液对终浓度为50mg/L的不同化学结构的染料的脱色研究,可快速对蒽醌类茜素红进行脱色可达100%;杂环类中性红、偶氮类刚果红和三苯基甲烷类结晶紫的脱色效果低于茜素红,测试的3种染料均可在没有介体存在的条件下被漆酶脱色,显示出偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)漆酶对茜素红染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景.利用PCR和RACE技术首次从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及其基因组全长序列,基因组大小为2 106bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和基因组DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子.cDNA序列的全长为1 982bp,其中包含一个完整的ORF,长度为1 563bp,编码520个氨基酸. 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 漆酶基因 染料脱色 结构域
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茜素红诱导下偏肿革裥菌SSH-cDNA文库构建与差异表达基因筛选 被引量:3
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作者 韩树英 池玉杰 +1 位作者 张健 冯连荣 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期386-394,共9页
为了探索白腐菌偏肿革裥菌降解染料茜素红过程中的生理机制和差异表达基因,在LNAS培养基上培养菌株,以添加茜素红为处理组,加入无菌水为对照组,采用抑制性消减杂交方法构建了在染料降解过程中的差异基因cDNA文库。经过2次差减杂交后所... 为了探索白腐菌偏肿革裥菌降解染料茜素红过程中的生理机制和差异表达基因,在LNAS培养基上培养菌株,以添加茜素红为处理组,加入无菌水为对照组,采用抑制性消减杂交方法构建了在染料降解过程中的差异基因cDNA文库。经过2次差减杂交后所得的阳性克隆,除去重复序列后得到75个独立基因的ESTs序列,即为差异基因的SSH-cDNA文库。文库中显著表达的差异基因主要有编码谷氨酰胺合成酶、热激蛋白70、ɑ,β水解酶、脯氨酰氨肽酶2、MFS普通基质转运蛋白、钙网结构域蛋白、20S蛋白酶体亚基α型3、3脱氧7磷酸庚酮糖合酶、醛酮还原酶、脂肪酸2羟化酶、辅酶Ⅰ黄素氧化还原酶、细胞色素P450等基因,这些差异基因及其产物参加了茜素红的氧化降解反应、糖类和蛋白质的降解作用、应激反应和信号转导途径。此研究结果可为进一步筛选偏肿革裥菌中与染料降解性状相关的基因奠定基础。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 抑制性差减杂交 差异表达基因 氧化还原酶 热激蛋白
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偏肿革裥菌锰过氧化物酶酶学性质和染料脱色 被引量:3
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作者 张玉龙 池玉杰 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第9期73-80,共8页
【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条... 【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条带切割,采用Nano液相色谱-电喷雾串联质谱法联用(Nano LC-ESI-MS/MS)多肽测序技术对蛋白氨基酸序列进行测定。利用该SDS-PAGE图谱,建立蛋白分子量与迁移率的标准直线,从标准直线上求出MnP纯酶样品的表观分子量;参照酶活测定方法检测最适反应温度及温度稳定性、最适反应p H值及p H稳定性;采用lineweaver-Burk双倒数作图法求解米氏动力学常数Km值。研究L.gibbosa菌种培养液和MnP纯酶液对蒽醌类的茜素红、偶氮类的刚果红、杂环类的中性红和三苯基甲烷类的结晶紫等4种不同类型染料的脱色能力。【结果】串联质谱扫描出2条MnP的保守序列肽段,与克隆到的基因Lg-mnp1编码的Lg-MnP1(Gen Bank登录号:ACO92620)序列完全吻合,表明其所代表的酶蛋白Lg-MnP1就是唯一电泳带中主要的蛋白。Lg-MnP1的表观分子量为45.39 k Da,最适反应温度为35℃,在低于40℃的条件下都具有一定的催化能力,但温度超过50℃后迅速失活;其最适反应pH值为3.5,p H超过4.5反应程度就迅速下降,在p H为2~3时最稳定;在以2,6-DMP为底物时,在21℃条件下其米氏常数Km为6.124 mmol·L^(-1)。L.gibbosa培养液对染料在1 h的脱色率分别为茜素红100%、中性红22.17%、刚果红19.09%,对结晶紫的脱色率很低,在36 h脱色率仅为0.018%。纯化后的Lg-MnP1溶液对染料的最大脱色率在2 h分别为中性红100%、刚果红95.55%、茜素红75.85%和结晶紫36.57%。【结论】SDS-PAGE得到的唯一一条电泳带中的MnP是Lg-MnP1。Lg-MnP1是一种中温性、偏酸性的酶,与2,6-DMP的亲和力较大。L.gibbosa含有菌丝的培养液对茜素红具有彻底的降解效果,但Lg-MnP1纯酶� 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 纯化 酶学性质 染料脱色
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Lenzites gibbosa锰过氧化物酶1基因启动子序列的克隆 被引量:3
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作者 吴书景 池玉杰 闫洪波 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期107-109,127,共4页
根据已克隆到的Lenzites gibbosa锰过氧化物酶1cDNA全长基因Lg-mnp1,在5'端设计了3个巢式特异性引物,利用染色体步移技术克隆得到了其上游1 568 bp的启动子序列。采用Signal Scan进行了启动子序列分析。结果表明,在起始密码子上游-9... 根据已克隆到的Lenzites gibbosa锰过氧化物酶1cDNA全长基因Lg-mnp1,在5'端设计了3个巢式特异性引物,利用染色体步移技术克隆得到了其上游1 568 bp的启动子序列。采用Signal Scan进行了启动子序列分析。结果表明,在起始密码子上游-92~-43 bp区域为Lg-mnp1启动子的基础启动子区;在-52 bp处有一个转录起始位点,-83 bp处有1个TATAAA-box,-119、-196 bp有2个反向CCAAT-box(ATTGG)。启动子区也存在多个顺式作用元件,包括转录因子SP-1(GGGCGG)、转录因子AP-2(CCCMNSSS)、热激元件HSE(NTTCNNGAAN)及6个推定的金属响应元件MRE(TGCRCNC)等。 展开更多
关键词 Lenzitesgibbosa 锰过氧化物酶 启动子 染色体步移 序列分析
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偏肿革裥菌在木质环境下转录组构建与相关基因表达分析 被引量:2
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作者 赵清泉 池玉杰 +1 位作者 张健 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期95-105,共11页
【目的】对白腐菌偏肿革裥菌在木质和非木质环境下的转录组进行测序,为白腐菌降解木材的机制研究提供支持。【方法】采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO、KEGG等数据库对转录本进行... 【目的】对白腐菌偏肿革裥菌在木质和非木质环境下的转录组进行测序,为白腐菌降解木材的机制研究提供支持。【方法】采用高通量测序技术对木屑和非木屑处理条件下的菌丝样本进行转录组测序。利用eggNOG、GO、KEGG等数据库对转录本进行注释和比较分析,预测和筛选出偏肿革裥菌与木材降解有关的基因。应用荧光定量PCR(qPCR)检测mnp2等11个与木质素降解相关的差异基因在木屑处理5天条件下的表达量,结合转录组数据对这些基因的表达量变化趋势进行分析。【结果】偏肿革裥菌转录组测序共得到38.9 Gb Clean Data,各样品Clean Data平均达到6.49 Gb,各样品的Reads与参考基因组的比对效率在71.23%~74.25%之间。使用edgeR软件进行差异表达分析,得到差异表达基因898个,其中上调351个、下调547个。差异基因被注释到GO数据库的有251个,注释到KEGG数据库的有223个,注释到eggNOG数据库的有704个。eggNOG分析表明,差异基因表达多聚集在能量产生和转换、转录后修饰、蛋白质代谢、伴侣关系、次生代谢物的生物合成、碳水化合物的运输和分解代谢等功能分类下。GO分析表明,显著性富集与频率较高的生物过程是丙酮酸代谢过程、类异戊二烯生物合成过程、天冬氨酸家族氨基酸代谢过程和木质素分解过程。在KEGG通路分析中,差异基因分布到86个不同的生物途径,差异基因显著富集的代谢通路主要为:碳代谢、柠檬酸循环、芳香化合物降解、乙醛酸代谢。qPCR结果表明在木屑处理条件下基因mnp2、mnp3、lip9、lip2、laccase1和nadp的表达量明显上调;mnp10 s、mrp、cyp450-1、GroES1和GroES2的表达量明显下调,qPCR与转录组测序结果在表达量差异倍数上存在较小偏差,但整体趋势一致,可以证明转录组测序结果是正确可靠的。【结论】偏肿革裥菌降解木材与碳代谢、芳香化合物降解等通路密切相关;与 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 白腐菌 转录组 木质素 降解
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茜素红处理下偏肿革裥菌细胞色素P450基因表达分析 被引量:2
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作者 张健 池玉杰 +1 位作者 赵清泉 冯连荣 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期510-517,共8页
用蒽醌类染料茜素红在0(ck),3(QSH1),7(QSH2),10 h(QSH3)分别处理白腐菌偏肿革裥菌,构建转录组,为研究白腐菌的细胞色素P450(CYP450)基因在脱色降解茜素红机制中的作用提供理论支持。采用高通量测序技术对茜素红处理下的菌丝样本进行转... 用蒽醌类染料茜素红在0(ck),3(QSH1),7(QSH2),10 h(QSH3)分别处理白腐菌偏肿革裥菌,构建转录组,为研究白腐菌的细胞色素P450(CYP450)基因在脱色降解茜素红机制中的作用提供理论支持。采用高通量测序技术对茜素红处理下的菌丝样本进行转录组测序,利用功能注释筛选出CYP450基因。结果表明:4个转录组共得到26.17 Gb的有效数据,与参考基因组的比对效率为71.23%~73.66%,通过功能注释搜索所有基因,共得到96个CYP450基因。通过ck与QSH1、ck与QSH2、ck与QSH3的分组比较,对所有的CYP450基因进行差异表达筛选。其中,有3个基因(gene24255、gene18992、gene7490)在3组对比中都出现。将这3个基因的0~10 h的表达量与茜素红脱色率进行比较,得出这3个基因的表达量与脱色率呈正相关。通过对KEGG通路进行分析,发现gene25488被注释到芳香化合物降解通路,初步印证了CYP450基因可能参与了偏肿革裥菌对茜素红染料的脱色。该研究从转录水平初步分析了偏肿革裥菌的CYP450基因及其产物可能参加了对茜素红降解脱色的相关代谢途径和生物学过程,获得的结果可为后续研究茜素红的降解机制提供参考。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 细胞色素P450 茜素红 转录组 脱色率
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偏肿革裥菌MnP基因在构巢曲霉中转化方法的建立 被引量:2
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作者 胡美美 池玉杰 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期129-133,共5页
对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidula... 对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidulans)尿嘧啶尿苷营养缺陷体菌株TN02A7进行了制备分生孢子原生质体酶解方法的摸索。结果表明:将溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶3种酶以1∶1∶1的比例混合,能有效地使构巢曲霉的分生孢子形成原生质体。采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法成功地将L.gibbosa的MnP基因转入到了构巢曲霉中,获得了携带有白腐菌MnP基因的构巢曲霉转化子菌株。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 构巢曲霉 原生质体
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