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转基因康乃馨两种类黄酮-3',5'-羟化酶基因检测方法的建立
1
作者 钱昌元 尹璐 +2 位作者 傅怡宁 左翠花 李想 《植物检疫》 2023年第6期45-51,共7页
康乃馨(Dianthus caryophyllus L.)是全球贸易量最大的鲜切花之一。转基因康乃馨因颜色新奇、花型丰富、插瓶期长等特点深受消费者喜爱。现有19个转基因康乃馨品系列入全球商业化种植,其中18个品系因转入了类黄酮-3’,5’-羟化酶(flavon... 康乃馨(Dianthus caryophyllus L.)是全球贸易量最大的鲜切花之一。转基因康乃馨因颜色新奇、花型丰富、插瓶期长等特点深受消费者喜爱。现有19个转基因康乃馨品系列入全球商业化种植,其中18个品系因转入了类黄酮-3’,5’-羟化酶(flavonoid-3’,5’-hydroxylase,F3’5’H)基因而产生了蓝紫色花瓣的性状。18个品系转入的F3’5’H基因中11个来源于大花三色堇(bp40基因),还有7个来源于矮牵牛(hf1基因)。我国目前没有批准转基因康乃馨进口,更缺乏相关检测方法。建立转基因康乃馨外源基因筛查方法,用以防范转基因康乃馨种苗、鲜切花等非法进入我国显得至关重要。本研究针对转基因康乃馨中最常见的两种不同来源F3’5’H基因,建立了普通PCR和实时荧光PCR检测方法,构建了适于两个基因检测的质粒分子,并将这两种方法应用于进境产品检测。结果表明,建立的bp40基因和hf1基因检测方法均具有特异性,普通PCR方法的检测下限(LOD)可分别达到25拷贝和12.5拷贝,实时荧光PCR方法的LOD均为10拷贝,在进境康乃馨种苗等样品中未检出该基因。综上,本研究建立的两种F3’5’H基因检测方法适用于康乃馨及其来源产品的转基因筛查检测,为防止未经我国批准的转基因产品非法进入我国提供有效的技术支撑。 展开更多
关键词 转基因康乃馨 F3’5’H基因 bp40 hf1 检测
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转基因康乃馨Moonlite品系检测用质粒标准样品研制
2
作者 杨茹梦 尹璐 +3 位作者 钱昌元 左翠花 于海燕 李想 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1692-1702,共11页
截至2020年底,国际上已有19种转基因康乃馨品系进入商业化种植。为了实现转基因康乃馨的有效检测监管,研制检测标准样品十分必要。目前,国际上还没有该类标准品的相关报道。为此,本文研制了商业化时间最长、种植量较大的转基因康乃馨Moo... 截至2020年底,国际上已有19种转基因康乃馨品系进入商业化种植。为了实现转基因康乃馨的有效检测监管,研制检测标准样品十分必要。目前,国际上还没有该类标准品的相关报道。为此,本文研制了商业化时间最长、种植量较大的转基因康乃馨Moonlite品系质粒标准样品,使其与转基因康乃馨检测技术标准的应用相配套,为口岸转基因产品的检测监管提供必要的技术支撑。首先,将康乃馨内源ANS基因1279 bp片段和转基因康乃馨Moonlite品系406 bp 5′端特异性序列分别插入到pcDNA3.0载体的酶切位点和距离1 kb以上的多克隆位点上,合成质粒DNA标准样品。后将质粒DNA标准样品进行稀释、分装,对其均匀性、最小取样量和短期、长期稳定性等进行测定,采用数字PCR方法对质粒DNA标准样品进行定值,并进行不确定度评估。质粒DNA标准样品pLite经全基因组测序,与公开发布的序列完全一致。均匀性实验结果表明,分别以ANS基因和Moonlite品系特异性序列为目标进行测定,F值分别为1.61和1.14,均小于95%置信区间的F值,质粒DNA标准样品足够均匀。质粒DNA标准样品的最小取样量为2μL。稳定性实验结果表明,质粒DNA标准样品pLite在45℃高温条件下,可稳定保存14 d;在26℃及以下温度条件下,可稳定保存1个月,在4℃及以下温度可稳定保存6个月,说明质粒DNA标准样品适宜运输。质粒DNA标准样品在反复冻融25次后,拷贝数浓度无显著变化。定值结果表明,质粒DNA标准样品pLite中康乃馨内源ANS基因拷贝数的参考值为(6.13±0.22)×10^(6)μL^(-1),Moonlite品系特异性序列拷贝数的参考值为(6.10±0.24)×10^(6)μL^(-1)。研制的质粒DNA标准样品pLite具有良好的均匀性和稳定性,获得国家标准样品证书后,可用于转基因康乃馨Moonlite品系的检测。 展开更多
关键词 转基因康乃馨 Moonlite品系 质粒标准样品
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