卵巢癌组织及外周血淋巴细胞多药耐药基因表达蛋白的定量研究 被引量：31

1

作者 尹格平 陈诵芬 +2 位作者 孙晓明 李秀云 袁玮 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期287-289,共3页

目的探讨卵巢癌组织及化疗期间腹水癌细胞（ＡＣＣ）与外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达蛋白Ｐ１７０含量及其相关性。方法应用流式细胞免疫学方法，对４８例卵巢癌组织细胞、ＡＣＣ及ＰＢＬ的Ｐ１７０含量进行动... 目的探讨卵巢癌组织及化疗期间腹水癌细胞（ＡＣＣ）与外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达蛋白Ｐ１７０含量及其相关性。方法应用流式细胞免疫学方法，对４８例卵巢癌组织细胞、ＡＣＣ及ＰＢＬ的Ｐ１７０含量进行动态定量研究。结果术前２５％卵巢癌组织Ｐ１７０含量阳性；化疗期间ＰＢＬ及ＡＣＣＰ１７０含量均逐渐增高。结论卵巢癌细胞不仅可以原发表达Ｐ１７０，且可随化疗疗程的增加而耐药逐渐增强。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 基因表达 多药耐药性 P糖蛋白

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拉米夫定抗乙肝病毒应答不佳联合应用阿德福韦酯的疗效分析 被引量：6

2

作者 郭新会 金瑞 +4 位作者 张世斌 徐斌 朱任平 张月宁 边新渠 《北京医学》 CAS 2011年第9期717-720,共4页

目的探讨拉米夫定抗乙肝病毒(HBV)应答不佳增用阿德福韦酯的疗效及耐药性。方法对218例血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高、HBV-DNA载量为1.0×104～1.0×108拷贝/ml的HBeAg阳性慢性乙肝初治患者应用拉米夫定治疗,治疗24周时检测HB... 目的探讨拉米夫定抗乙肝病毒(HBV)应答不佳增用阿德福韦酯的疗效及耐药性。方法对218例血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高、HBV-DNA载量为1.0×104～1.0×108拷贝/ml的HBeAg阳性慢性乙肝初治患者应用拉米夫定治疗,治疗24周时检测HBV-DNA水平。如果达到检测下限值(HBV-DNA<500拷贝/ml)则继续应用拉米夫定治疗(单药治疗组),未达到检测下限值者则加用阿德福韦酯(联合治疗组)。所有患者随访至48周。结果拉米夫定治疗至24周时,135例(61.9%)患者HBV-DNA<500拷贝/ml,83例(38.1%)HBV-DNA>500拷贝/ml;治疗至48周时,单药治疗组和联合治疗组的ALT复常率(ALT≤40U/L)分别为86.7%(117/135)和89.2%(74/83),两组比较无显著性差异(P>0.05)。单药治疗组的HBeAg转阴率和HBeAg血清学转换率(HBeAg阴性、HBeAb阳性)分别为20.0%(27/135)和16.3%(22/135),联合治疗组分别为20.5%(17/83)和14.5%(12/83),两组比较无显著性差异(P>0.05)。单药治疗组基因型耐药率为11.9%(16/135),联合治疗组为3.6%(3/83),两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论对拉米夫定治疗24周的抗HBV应答效果不佳者,增用阿德福韦酯治疗至48周,可显著减少耐药的发生,但未明显增加HBeAg血清转换率。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 拉米夫定 阿德福韦酯 基因突变 耐药

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白色假丝酵母菌临床株的药敏分析与耐药基因研究 被引量：2

3

作者 张月香 杨淑华 刘颖 《天津医药》 CAS 北大核心 2009年第8期662-664,共3页

目的:了解引起真菌性阴道炎的白色假丝酵母菌对常见抗真菌药物的耐药性,及其多药耐药基因CDR1、MDR1、FLU1表达与对唑类药物耐药的关系。方法:应用常规方法从临床标本中分离、鉴定白色假丝酵母菌371株,微量稀释法测定其对咪康唑的最小... 目的:了解引起真菌性阴道炎的白色假丝酵母菌对常见抗真菌药物的耐药性,及其多药耐药基因CDR1、MDR1、FLU1表达与对唑类药物耐药的关系。方法:应用常规方法从临床标本中分离、鉴定白色假丝酵母菌371株,微量稀释法测定其对咪康唑的最小抑菌浓度(MIC)值,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测白色假丝酵母菌耐药株和敏感株耐药基因CDR1、MDR1、FLU1的mRNA表达水平。结果:唑类药物中伊曲康唑和咪康唑的耐药率较高,分别为7.55%和7.01%;其次为克霉唑(2.70%);酮康唑和氟康唑的耐药率较低。白色假丝酵母菌咪康唑耐药株组和敏感株组FLU1、CDR1基因mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),MDR1基因mRNA表达水平高于敏感株组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白色假丝酵母菌咪康唑耐药与外排泵基因MDR1过度表达相关,MDR1过度表达是其耐药机制的因素之一。 展开更多

关键词 酵母菌 基因表达 抗药性 多药 聚合酶链反应 阴道炎

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广东省138株不可分型流感嗜血杆菌的病原学特征分析

4

作者 彭淑萍 李柏生 +3 位作者 刘美真 李振翠 何冬梅 廖国东 《实用预防医学》 CAS 2022年第5期564-568,共5页

目的 了解广东省138株不可分型流感嗜血杆菌临床分离株的分子血清分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)、耐药表型和耐药基因等病原学特征。方法 通过国家致病菌识别网监测收集广东省2018—2019年的138株来自不同医... 目的 了解广东省138株不可分型流感嗜血杆菌临床分离株的分子血清分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)、耐药表型和耐药基因等病原学特征。方法 通过国家致病菌识别网监测收集广东省2018—2019年的138株来自不同医院门诊和住院患者的流感嗜血杆菌分离株为研究对象,采用PCR技术对荚膜基因和耐药基因进行检测,同时应用MLST分析菌株之间的群落分布关系并使用描述性流行病学对病例资料进行回顾性分析。结果 138株流感嗜血杆菌临床株男女检出比为1.68∶1,检出人群以儿童(52.90%)和老年人(30.43%)为主,发病季节集中在2—6月份;血清分型结果均为不可分型菌株,其中35.51%(49/138)菌株携带TEM耐药基因,耐药基因亚型可分为3个等位基因亚型(HAEM0118∶8、HAEM0118∶6、HAEM0118∶10),ROB基因未检出。MLST分型一共分成54个ST型,其中12个ST型为新发现的ST型,ST103、ST422、ST836和ST57为4个主要流行的ST型。结论 广东省138株不可分型流感嗜血杆菌在该省部分地区已成为流行的主导血清型,耐药基因携带率高。建议加强本市对不可分型流感嗜血杆菌临床感染株的病原学和耐药性监测,合理使用抗生素,重视并加快疫苗和药物的开发,防止其形成优势克隆后导致社区感染的暴发流行。 展开更多

关键词 流感嗜血杆菌 不可分型 耐药携带基因 多位点序列分型

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p53调控的肺癌细胞顺铂敏感性相关基因片段的分离和克隆

5

作者 张洪涛 汪惠 +2 位作者 赖百塘 张春燕 杨学惠 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第3期172-175,共4页

目的　克隆野生型 p5 3 (wtp5 3 )影响人大细胞肺癌 80 1 D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。 方法　采用转基因方法补偿 80 1 D细胞p5 3功能 ,分别提取经IC50 浓度顺铂刺激的转染wtp5 3细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp5 3细胞RNA ,... 目的　克隆野生型 p5 3 (wtp5 3 )影响人大细胞肺癌 80 1 D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。 方法　采用转基因方法补偿 80 1 D细胞p5 3功能 ,分别提取经IC50 浓度顺铂刺激的转染wtp5 3细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp5 3细胞RNA ,用银染mRNA差异显示方法分离差异表达基因 ,反转录点杂交和巢式PCR进行确证。阳性片段进行克隆及序列分析。结果　获得 6条阳性片段 ,2条含有开放阅读框架(ORF) ,其中 1条片段部分与核糖核苷还原酶α链有 5 6%同源性 ,另一片段D1含有一个长ORF ,与已知cDNA序列同源率低。结论　p5 3对 80 1 D细胞顺铂敏感性的影响有明显的基因水平改变 ,可能诱导了相关基因表达。 展开更多

关键词 肺肿瘤 P53基因 顺铂 药物敏感性 基因片段 克隆 肺癌

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结核分枝杆菌部分耐药相关基因的突变特点

6

作者 韩喜琴 李传友 +5 位作者 高微微 张宗德 黄学锐 谢莉 陈曦 马玙 《结核病与胸部肿瘤》 2008年第2期99-103,共5页

目的分析结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点，评价DNA序列分析用于结核分枝杆菌快速耐药性检测的应用价值。方法利用DNA序列分析检测结核分枝杆菌的KatG、rpoB和gyrA基因片段。结果8681％（79／91）异烟肼耐药株存在katG基因的点突变... 目的分析结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点，评价DNA序列分析用于结核分枝杆菌快速耐药性检测的应用价值。方法利用DNA序列分析检测结核分枝杆菌的KatG、rpoB和gyrA基因片段。结果8681％（79／91）异烟肼耐药株存在katG基因的点突变和／或单碱基插入，最常见的突变形式为R463L，占76．92％（70／91）。90．38％（94／104）的利福平耐药株rrpoB基因耐药决定区（RRDR）发生突变，突变类型有26种，涉及11种氨基酸，突变集中在密码子507～533位。70．49％（86／122）氧氟沙星耐药株在gyrA基因耐药决定区（QRDR）发生突变，突变主要形式为A90V、D94Y、D94N、D94H及S91P。结论耐药相关基因突变的检测可作为临床快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 基因 突变 耐药性

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肠杆菌科细菌16S rRNA甲基化酶基因检测及其同源性研究

7

作者 高燕渝 宗志勇 +3 位作者 吕晓菊 俞汝佳 马晓波 陈建平 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期241-244,259,共5页

目的了解肠杆菌科细菌含16S rRNA甲基化酶基因的现状并初步探讨该基因的传播途径。方法临床分离阿米卡星高度耐药菌株,用PCR方法检测其16S rRNA甲基化酶基因,并进行序列比对;肠杆菌科基因间重复一致性序列-PCR(ERIC-PCR)进行菌株同源性... 目的了解肠杆菌科细菌含16S rRNA甲基化酶基因的现状并初步探讨该基因的传播途径。方法临床分离阿米卡星高度耐药菌株,用PCR方法检测其16S rRNA甲基化酶基因,并进行序列比对;肠杆菌科基因间重复一致性序列-PCR(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析,接合试验验证耐药基因水平传播途径。结果 374株临床分离菌中24株含有甲基化酶基因(6.41%),其中armA基因阳性10株,rmtB基因阳性10株,2种基因同时阳性4株;ERIC-PCR发现其中包含高度同源的大肠埃希菌;45.8%(11/24)16S rRNA阳性菌接合试验阳性。结论肠杆菌科细菌对氨基糖苷类药物高度耐药与16S rRNA甲基化酶有关。16S甲基化酶编码基因既可通过克隆传播,也可通过质粒水平传播。 展开更多

关键词 肠杆菌科 16S rRNA甲基化酶基因 氨基糖苷 耐药性

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肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析 被引量：5

8

作者 黄燕颖 张新蔚 +2 位作者 楼永良 严杰 孙爱华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期424-430,共7页

目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除（ΔstkP）突变株.采用E-test检测青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对Δstkp... 目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除（ΔstkP）突变株.采用E-test检测青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度（MIC）.采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因（stkP）胞外区（EC-StkP）、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段（EC-stkP）,T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白（EC-rStkP）表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法（VT-ITC）和表面等离子共振法（Biacore）检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果 肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感（MIC=0.06和0.12 μg/ml）,但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药（MIC=16和32 μg/ml）.肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关（PASTA）功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP.PCN和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论 肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力. 展开更多

关键词 肺炎链球菌 丝氨酸/苏氨酸激酶 Β-内酰胺类抗生素 结合 基因敲除/耐药

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呼吸机相关性肺炎细菌耐药基因的分子流行病学研究 被引量：3

9

作者 朱斌 张平 +2 位作者 魏晓霞 王天宝 张光文 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第10期941-943,共3页

目的了解呼吸机相关性肺炎细菌耐药性及耐药基因分子流行病学特征,为临床诊疗提供参考。方法对呼吸机相关肺炎(VAP)病原菌构成进行分析,采用纸片扩散法检测主要致病菌耐药情况,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行主要病原菌的同源性和分子分... 目的了解呼吸机相关性肺炎细菌耐药性及耐药基因分子流行病学特征,为临床诊疗提供参考。方法对呼吸机相关肺炎(VAP)病原菌构成进行分析,采用纸片扩散法检测主要致病菌耐药情况,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行主要病原菌的同源性和分子分型研究。结果 572例机械性通气患者中VAP患者247例(占43.18%);共分离致病菌359株,其中革兰阴性菌为231株(64.35%),革兰阳性菌52株(14.48%),真菌76株(21.17%);所有致病菌中,铜绿假单胞菌是主要致病菌,为102株(占28.41%)。铜绿假单胞菌对头孢唑啉和头孢克洛完全耐药,对利福平、氟氯西林的耐药率为98.04%。铜绿假单胞菌共有19个基因型(A^R),在各基因型中,A型有37株(36.28%),B型9株(8.82%),C型6株(5.89%),D型6株(5.89%),E型5株(4.90%)。结论 VAP主要致病菌存在优势克隆株流行,需要加强耐药性检测,预防暴发流行。 展开更多

关键词 呼吸机相关性肺炎 病原菌 耐药性 耐药基因

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臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中检出NDM-1型金属β内酰胺酶基因 被引量：32

10

作者 杨银梅 叶惠芬 +2 位作者 张伟红 陈惠玲 周小棉 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第13期1407-1409,共3页

目的调查对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌中NDM-1型金属β内酰胺酶基因的存在情况。方法应用改良Hodge试验和EDTA协同试验对2007～2010年本院收集的对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行碳青霉... 目的调查对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌中NDM-1型金属β内酰胺酶基因的存在情况。方法应用改良Hodge试验和EDTA协同试验对2007～2010年本院收集的对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶筛选。PCR法扩增NDM-1基因,并对PCR扩增阳性产物进行DNA测序分析。对NDM-1基因阳性菌株用PCR方法检测armA和rmtB16S rRNA甲基化酶基因,VIM、SPM、IMP和KPC碳青霉烯酶基因以及Ⅰ类整合子。Etests法进行药敏试验。结果 70株肠杆菌中10株Hodge Test和EDTA协同试验阳性,55株鲍曼不动杆菌中6株EDTA协同试验阳性。其中1株臭鼻克雷伯和3株鲍曼不动杆菌PCR扩增出NDM-1型金属β内酰胺酶基因目的片段,经测序比对为NDM-1型基因。其中1株臭鼻克雷伯和1株鲍曼不动杆菌检测出armA型16S rRNA甲基化酶基因,1株鲍曼不动杆菌检测出2000 bp左右的Ⅰ类整合子,未检出除NDM-1型外的其他碳青霉烯酶基因。NDM-1基因阳性菌除对替加环素、多黏菌素B敏感外,对其他检测的抗菌剂均耐药。结论臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中存在NDM-1型金属β内酰胺酶基因,有的携带armA型16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子,为该地区首次报道。 展开更多

关键词 碳青霉烯酶 NDM-1型金属β内酰胺酶基因 抗药性 细菌 革兰氏阴性菌

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水产品中副溶血性弧菌的污染、毒力基因及耐药性研究 被引量：19

11

作者 安秀华 宁喜斌 李涛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期209-212,共4页

采集上海市各大农贸市场3类水产品共273份,分离出副溶血性弧菌105株,平均检出率为38.46%,其中甲壳类、贝类、鱼类检出率分别为50.96%、27.12%、15.79%,三者间有极显著差异(P<0.01)。多重PCR检测分离菌株发现所有分离菌株没有耐热直... 采集上海市各大农贸市场3类水产品共273份,分离出副溶血性弧菌105株,平均检出率为38.46%,其中甲壳类、贝类、鱼类检出率分别为50.96%、27.12%、15.79%,三者间有极显著差异(P<0.01)。多重PCR检测分离菌株发现所有分离菌株没有耐热直接溶血毒素和相对耐热直接溶血毒素基因,仅有不耐热溶血毒素基因。K-B氏药敏纸片法检测了105株分离菌株对10种抗生素的耐药性,发现所有菌株对头孢曲松、萘啶酸和诺氟沙星敏感,部分菌株对氨苄西林(69.50%)和阿莫西林(12.38%)等具有较强的耐药性。另外采用碱裂解法提取所有分离菌株的质粒,发现只有7株菌株含有1～3个质粒,大小范围在1～24kb之间,且菌株耐药性与其所携带的质粒的数量和大小并无直接联系。表明分离菌株的耐药性主要是由于细菌染色体相关基因突变造成的。 展开更多

关键词 水产品 副溶血性弧菌(Vp) 毒力基因 耐药性 质粒

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铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因的研究 被引量：14

12

作者 王春新 糜祖煌 +1 位作者 谢国强 秦玲 《现代实用医学》 2003年第9期543-544,550,共3页

目的 研究铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的遗传学机制。方法 建立检测铜绿假单胞菌编码IMP型金属酶基因和外膜蛋白OprD_2基因的PCR法,探讨临床分离的16株纸片协同法产金属酶的铜绿假单胞菌中产金属酶和外膜蛋白OprD_2的缺失与亚胺培南耐... 目的 研究铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的遗传学机制。方法 建立检测铜绿假单胞菌编码IMP型金属酶基因和外膜蛋白OprD_2基因的PCR法,探讨临床分离的16株纸片协同法产金属酶的铜绿假单胞菌中产金属酶和外膜蛋白OprD_2的缺失与亚胺培南耐药的关系。结果 16株产金属酶铜绿假单胞菌IMP基因扩增7株呈阳性,9株阴性;OprD_2基因扩增11株呈阴性,5株呈阳性;11株菌既产金属酶,又存在外膜蛋白OprD_2基因突变。结论 产金属酶和外膜蛋白OprD_2的缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制,并可同时并存。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 亚胺培南 耐药相关基因 研究

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耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌红霉素耐药erm基因检测 被引量：9

13

作者 李立 应冠一 +1 位作者 糜祖煌 秦玲 《现代实用医学》 2003年第6期345-346,共2页

目的　探讨耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)erm基因的存在状况。　方法　应用兼并引物扩增MRCNS菌的erm基因。　结果　 5 5株MRCNS菌中有 4 5株检出erm基因。　结论　MRCNS菌获得erm基因的红霉素耐药率为 81.8%。

关键词 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 红霉素 耐药erm基因 检测 病原菌

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酪氨酸激酶抑制剂在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌患者角蛋白、PAX-8及DNA EGFR基因T790M突变的影响 被引量：8

14

作者 董小帅 王昊 艾克东 《临床和实验医学杂志》 2022年第6期577-581,共5页

目的探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌(NSCLC)患者角蛋白、配对盒基因8(PAX-8)及对血浆中EGFR基因耐药位点T790M突变的影响。方法回顾性选取2018年1月至2019年1月延安市人民医院收治的5... 目的探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌(NSCLC)患者角蛋白、配对盒基因8(PAX-8)及对血浆中EGFR基因耐药位点T790M突变的影响。方法回顾性选取2018年1月至2019年1月延安市人民医院收治的52例耐药NSCLC患者作为研究对象,均予以EGFR-TKIs治疗。分析两组患者的近期疗效;分析患者治疗前后临床特征和CK、PAX-8阳性表达的分布;复发转移及CK、PAX-8表达的关系;比较治疗前后的EGFR基因耐药位点T790M突变情况;比较CK、PAX-8表达及T790M突变与术后生存时间。结果NSCLC患者治疗4周时的有效率、稳定率分别为59.62%、88.46%,高于治疗1周时(26.92%、75.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC患者治疗4周时的CK、PAX-8阳性表达率分别为17.31%、21.15%,显著低于治疗前(40.38%、63.46%),差异均有统计学意义(P<0.05)。淋巴结上的CK、PAX-8阳性表发复发转移率分别为61.90%、72.73%,较阴性表达(35.48%、36.84%)均显著偏高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗4周时血浆中的EGFR基因耐药位点T790M突变率为13.46%,显著低于治疗前(69.23%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后5年总生存率为65.38%(34/52),CK、PAX-8及T790M阳性表达者的生存率均显著低于阴性者。结论耐药NSCLC患者的CK、PAX-8及DNA EGFR基因耐药位点T790M阳性表达越高预后效果越差,针对这3项指标的具体阳性表达情况科学、合理的予以EGFR-TKIs治疗可有效地降低CK、PAX-8阳性表达及DNA EGFR基因耐药位点T790M变异,有较好的临床应用与推广价值。 展开更多

关键词 耐药非小细胞肺癌 酪氨酸激酶抑制剂 分子靶向治疗 角蛋白 配对盒基因8 EGFR基因耐药位点T790M突变

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不同源性大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB部分基因的同源性分析 被引量：7

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作者 马红霞 邓旭明 +1 位作者 欧阳红生 阎继业 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期111-113,共3页

通过聚合酶链式反应从不同源性大肠杆菌的染色体DNA上扩增出大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB的部分片段 ,将该片段分别连接到克隆载体pMD_18T的BamHI、XhoI酶切位点中 ,测定插入片段的核苷酸序列 ,并分别推导出其氨基酸序列。序列分析表... 通过聚合酶链式反应从不同源性大肠杆菌的染色体DNA上扩增出大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB的部分片段 ,将该片段分别连接到克隆载体pMD_18T的BamHI、XhoI酶切位点中 ,测定插入片段的核苷酸序列 ,并分别推导出其氨基酸序列。序列分析表明 :不同源性大肠杆菌的AcrA的部分基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GeneBank中该基因序列的同源性较高 ;不同源性大肠杆菌的AcrB的部分基因的核苷酸序列的同源性较低 。 展开更多

关键词 大肠杆菌多药耐药基因 AcrA ACRB 测序 同源性分析

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p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响 被引量：5

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作者 陶虹 朱允中 +7 位作者 汪惠 赖百塘 张春彦 湛秀萍 王玥 杨学惠 岳文涛 张洪涛 《结核病与胸部肿瘤》 CAS 2008年第2期91-99,共9页

背景与目的肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一，已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关。本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响，为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方... 背景与目的肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一，已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关。本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响，为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方法采用质粒pEGFP，分别构建含正义、反义p53cDNA的真核细胞表达载体，测序法检测外源p53基因。用脂质体介导转染人肺癌细胞系801D，建立含不同p53基因状态的单克隆细胞系，分别为pEGFP-801D、pEGFP—sensep53—801D[含有正义p53，pEGFP—p53（RS）-801D]、pEGFP—antisensep53—801D[含有反义p53，pEGFP—p53（AS）-801D]。荧光显微镜观察细胞绿色荧光，PCR法检测外源基因，MTT法检测耐药性，流式细胞术检测细胞周期与凋亡。结果测序结果显示外源p53基因分别以正向、反向连接于载体，荧光显微镜下转染细胞可见绿色荧光，PCR法检测出外源p53基因和neo基因。pEGFP—p53（AS）1801D细胞系对顺铂（Cisplatin，DDP）的IC50为0．26±0．09mg／ml，显著低于母系（0．55±0．19μg／ml，P〈0．05）和空载系（0．77±013μg／ml，P〈0．05）。pEGFP—p53（RS）-801D细胞系对DDP的IC50为0．43±0．25μg／ml，显著低于空载（P=0．000）但高于pEGFP—p53（AS）-801D（P=0．041）。pEGFP—p53（RS）-801D细胞系对紫杉醇（Paclitaxel，TAX）的IC50为234±0．43ng／ml，显著低于母系（8．40±150ng／ml，P〈0．05），低于空载系但无显著差异。pEGFP—p53（RS）-801D细胞系对5氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5FU）的IC50为2．08±0．18μg／mL，显著低于母系（4．90±1．12μg／ml，p〈005）和空载系（3．41±0．86μg/ml，P〈005）。DDP能诱导pEGFP—p53（AS）-801D出现G2期阻滞，TAX、5FU诱导pEGFP—p53（RS）-801D细胞系分别出现G2、S期阻滞，DDP、TAX能诱导细胞凋亡和死亡。结论肺癌细胞中不同状态的p53基因对化疗药的耐药� 展开更多

关键词 P53基因 耐药 细胞周期 凋亡

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ERCC2诱导表达在人脑胶质瘤细胞对BCNU耐药中的作用 被引量：5

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作者 陈忠平 Grard Mohr +1 位作者 Lawrence C Panasci 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期18-21,共4页

目的　探讨BCNU诱导ERCC2表达在胶质瘤细胞耐药中的作用。方法　选用ERCC2基础表达在蛋白水平相同 ,而mRNA水平不同的 2株人脑胶质瘤细胞T98 G和SK MG 4(在mRNA水平 ,T98 G比SK MG 4高 2 5倍 ) ,在体外培养时用BCNU处理 ,随后采用Wester... 目的　探讨BCNU诱导ERCC2表达在胶质瘤细胞耐药中的作用。方法　选用ERCC2基础表达在蛋白水平相同 ,而mRNA水平不同的 2株人脑胶质瘤细胞T98 G和SK MG 4(在mRNA水平 ,T98 G比SK MG 4高 2 5倍 ) ,在体外培养时用BCNU处理 ,随后采用WesternBlot测定肿瘤细胞的ERCC2蛋白水平变化。结果　对BCNU耐药的T98 G在BCNU处理后 6h ,ERCC2蛋白水平上升 6倍 ,随后逐渐下降 ,48h回复到基础水平。而对BCNU敏感的SK MG 4,BCNU处理后ERCC2蛋白水平没有增加。结论　本研究提示 ,mRNA基础水平与胶质瘤耐药密切相关 ,在mRNA基础水平较高的肿瘤细胞 ,BCNU能诱导ERCC2蛋白表达 ,并直接与肿瘤耐药相关。 展开更多

关键词 ERCC2 脑胶质瘤 BCNU耐药

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抑制性消减杂交技术在寄生虫学研究中的应用 被引量：4

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作者 韩红玉 林矫矫 黄兵 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第2期50-55,共6页

抑制性消减杂交技术(SSH)是一种适用于分离两个遗传背景相关的DNA样品之间差异从而表达基因的方法。目前,该技术在寄生虫学研究中的应用不是很多,主要应用在寻找与寄生虫不同发育阶段相关的差异表达基因和与寄生虫抗药性相关的差异表达... 抑制性消减杂交技术(SSH)是一种适用于分离两个遗传背景相关的DNA样品之间差异从而表达基因的方法。目前,该技术在寄生虫学研究中的应用不是很多,主要应用在寻找与寄生虫不同发育阶段相关的差异表达基因和与寄生虫抗药性相关的差异表达基因以及其他相关基因的研究,如与不同虫株、不同宿主、或性别差异相关的基因。本文从这几个方面综述了SSH技术在寄生虫学研究中的进展情况。了解这些信息,有助于将来更好地利用该技术研究寄生虫学,为寄生虫病的防治提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交 差异表达基因 寄生虫 发育阶段 抗药性

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ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性关系 被引量：4

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作者 袁蕾蕾 王秀问 《华北煤炭医学院学报》 2007年第5期605-607,共3页

①目的探讨DNA切除修复基因ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系。②方法采用免疫组化S-P法检测61例ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者中DNA切除修复基因ERCC-1的表达情况。所有患者均经铂类为基础的化疗方案化疗... ①目的探讨DNA切除修复基因ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系。②方法采用免疫组化S-P法检测61例ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者中DNA切除修复基因ERCC-1的表达情况。所有患者均经铂类为基础的化疗方案化疗。③结果在61例患者中,ERCC-1的表达为37.7%(23/61),与患者性别、年龄及临床分期无关;腺癌的表达明显高于其它病理类型,其表达与以顺铂为基础的化疗耐药有关。化疗耐药组ERCC1的阳性表达率为54.84.%,化疗敏感组的ERCC1的阳性表达率为20%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。ERCC1阳性组平均生存时间为645天,阴性组为500天,用Kaplan-Meier进行单因素的生存分析,其差异无统计学意义(P>0.05)。④结论晚期肺癌存在ERCC1的表达,且与DDP为基础的化疗敏感性相关。检测ERCC-1可以预测晚期肺癌的铂类药物化疗敏感性。 展开更多

关键词 肺肿瘤 非小细胞肺癌 ERCC-1基因 顺铂 耐药性

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反义RNA调节MGMT基因表达逆转肿瘤细胞对嘧啶亚硝脲的耐药性 被引量：2

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作者 季守平 吴英 +3 位作者 侯春梅 由英 毛宁 章扬培 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期8-11,共4页

目的：抑制细胞内的Ｏ６－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）基因表达水平，逆转肿瘤细胞对嘧啶亚硝脲的耐药性。方法：本实验构建了三个表达ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体（ｐＬＭＴＳＮＡＳ，ｐＬＭ５ＳＮＡＳ和ｐＬＭ... 目的：抑制细胞内的Ｏ６－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）基因表达水平，逆转肿瘤细胞对嘧啶亚硝脲的耐药性。方法：本实验构建了三个表达ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体（ｐＬＭＴＳＮＡＳ，ｐＬＭ５ＳＮＡＳ和ｐＬＭ３ＳＮＡＳ），并用它们转导ＨｅＬａＳ３肿瘤细胞，观察细胞在转导前后ＭＧＭＴ基因表达水平及其对嘧啶亚硝脲（ＡＣＮＵ）抗药性的变化。结果：研究发现针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ５端的反义ＲＮＡ能够有效地降低ＨｅＬａＳ３细胞的ＭＧＭＴ基因表达水平（为对照细胞的３０％～４０％），并使细胞对ＡＣＮＵ的敏感性提高４．６倍；针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ全长的反义ＲＮＡ，也能在一定程度上调节细胞的ＭＧＭＴ基因表达水平并增加细胞对ＡＣＮＵ的敏感性，而针对３端序列的反义ＲＮＡ对ＭＧＭＴ基因无调节作用。转导细胞对ＡＣＮＵ耐药性的变化与ＭＧＭＴ基因表达水平的抑制程度密切相关。结论：合适的反义ＲＮＡ能够有效地调节ＭＧＭＴ基因表达水平。 展开更多

关键词 MGMT基因 肿瘤 耐药性 反义RNA 嘧啶亚硝脲

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