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基因敲除技术现状及应用 被引量:8
1
作者 万海英 汤华 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期86-90,共5页
功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选到动物模型的建立各方面都得到了发展。其中Cre-LoxP系统可以有效的控制打靶的发育阶段和组织类型,实现特定基因在特定时间和(或)空间的功能研究... 功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选到动物模型的建立各方面都得到了发展。其中Cre-LoxP系统可以有效的控制打靶的发育阶段和组织类型,实现特定基因在特定时间和(或)空间的功能研究;转座子系统易于操作,所需时间短,具有高通量的特点,可以携带多种抗性标记,方便了同时进行多基因功能研究;基因捕获技术提供了获得基因敲除小鼠的高效方法,方便了进行小鼠基因组文库的研究。此外,进退策略、双置换法、标记和交换法、重组酶介导的盒子交换法也从不同方向发展了基因敲除技术。 展开更多
关键词 基因敲除 Cre—LoxP系统 转座子 基因捕获
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基因功能研究方法浅介 被引量:3
2
作者 刘楠梅 《生物技术通讯》 CAS 2000年第3期231-233,共3页
随着人类基因组计划的进展 ,数据库中积累了越来越多未知功能的基因序列 ,分析这些基因的功能将成为基因组计划的主要任务。
关键词 基因功能 转基因动物 基因敲除 基因敲入
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Conditional gene manipulation:Cre-ating a new biological era 被引量:7
3
作者 Jian ZHANG Jing ZHAO +3 位作者 Wen-jie JIANG Xi-wei SHAN Xiao-mei YANG Jian-gang GAO 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2012年第7期511-524,共14页
To solve the problem of embryonic lethality in conventional gene knockouts, site-specific recombinase (SSR) systems (Cre-loxP, FIp-FRT, and φC31) have been used for tissue-specific gene knockout. With the combina... To solve the problem of embryonic lethality in conventional gene knockouts, site-specific recombinase (SSR) systems (Cre-loxP, FIp-FRT, and φC31) have been used for tissue-specific gene knockout. With the combination of an SSR system and inducible gene expression systems (tetracycline and tamoxifen), stage-specific knockout and transgenic expression can be achieved. The application of this "SSR+inducible" conditional tool to genomic manipulation can be extended in various ways. Alternatives to conditional gene targeting, such as conditional gene trapping, multipurpose conditional alleles, and conditional gene silencing, have been developed. SSR systems can also be used to construct precise disease models with point mutations and chromosomal abnormalities. With these exciting achievements, we are moving towards a new era in which the whole genome can be manipulated as we wish. 展开更多
关键词 Site-specific recombinase gene targeting gene trapping Inducible systems φC31 system
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小鼠基因敲除的研究进展 被引量:5
4
作者 张剑 杨晓梅 高建刚 《山东大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期183-196,共14页
随着人类基因组计划(HGP)的顺利完成,后基因时代的生物学研究迫切需要一种有效的基因功能分析方法。基因敲除小鼠模型的应用,为研究基因的功能和寻找新的治疗人类疾病的干预措施提供了有力支持。基因打靶和基因捕获是两种不同的通过胚... 随着人类基因组计划(HGP)的顺利完成,后基因时代的生物学研究迫切需要一种有效的基因功能分析方法。基因敲除小鼠模型的应用,为研究基因的功能和寻找新的治疗人类疾病的干预措施提供了有力支持。基因打靶和基因捕获是两种不同的通过胚胎干细胞(ES细胞)制作基因敲除小鼠的技术。基因捕获具有高通量、随机性、序列标记等特点,而基因打靶则是针对特定基因的敲除。自基因打靶和基因捕获小鼠首次亮相距今已有近20年的时间。近年来,针对基因打靶和基因捕获的新工具不断涌现,并且相应的组织也已经成立。这些组织能够利用这两种方法敲除小鼠基因组中的基因。国际基因捕获协会(The International Gene Trap Consortium,IGTC)和基因敲除小鼠计划(The Knockout Mouse Project,KOMP)已着手创建世界范围内用于科研的便利资源,并且计划敲除所有小鼠的基因。KOMP的组织者认为这与HGP一样具有重要意义。从传统的基因打靶到现在的高通量的条件基因打靶,基因打靶的方法已经发生了很大的变化。捕获和打靶两者的组合优势大大提升了基因捕获的范围和基因打靶的效率。作为一种新开发的插入式突变系统,转座子在捕获基因方面比逆转录病毒更具有优势。国际基因敲除小鼠协会(The International Knockout Mouse Consortium,IKMC)的出现标志着全球性合作的开始。该组织致力于系统地敲除小鼠基因组中所有基因,进而开展功能基因组的研究。 展开更多
关键词 基因敲除小鼠 基因打靶 基因捕获 转座子 胚胎干细胞
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基因捕获技术及其最新进展(英文) 被引量:3
5
作者 李元元 张靖溥 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期189-198,共10页
基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。基... 基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。基因捕获载体是带有报告基因和/或选择标记基因的不完整的基因表达载体;这些载体所带的基因只有在整合到宿主功能基因内部且与融合的宿主基因编码框一致时才能得以表达。经典的基因捕获载体有:增强子捕获载体、基因捕获载体和启动子捕获载体。增强子载体只有一个最小化的启动子控制下游报告基因的表达活性。只有当启动子上游存在一个增强子时才能启动其下游基因的转录;而单独依靠这个启动子则不能转录。狭义的基因捕获载体是指插入到结构基因内部从而捕获该基因的载体,分为内含子捕获载体和外显子捕获载体。前者插入内含子,因此需要在无启动子的报告基因前面添加一个splice acceptor(SA)位点;后者插入外显子,因此不需SA位点就能产生融合蛋白mRNA。启动子捕获载体由一个无启动子的报告基因和选择标记基因组成,只有在捕获载体插入到内源基因的外显子中,且两阅读框一致的时候才会有报告基因和被捕获的内源基因上游编码区的融合蛋白的表达。利用某些遗传元件的遗传特性也可以构建非常有用的捕获载体。常用的有:逆转录病毒介导的捕获载体和转座子介导的捕获载体等等。该文较为全面地概括了转座子介导的捕获载体的用途和研究现状。比如:在拟南芥中应用Ac/Ds转座子元件,在果蝇中应用P-element和piggyBac转座元件,在斑马鱼中应用Tol2转座子元件,在脊椎动物研究中应用Tcl/meriner转座子超家族,以及在哺乳动物和小鼠ES细胞中应用piggyBac 转座子元件。还列举了设计新颖的载体优化� 展开更多
关键词 基因克隆 功能研究 基因捕获技术 捕获载体 逆转录病毒 转座子
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用无终止子的RFP报告基因捕获水稻终止子研究 被引量:5
6
作者 李军 瞿绍洪 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期758-763,共6页
基因捕获技术已被广泛应用于植物功能基因组学研究。文章构建了水稻PolyA捕获载体pLJ19,该载体含有用于检测转化事件的绿色荧光蛋白报告基因(GFP)及用于进行PolyA捕获的无终止子的红色荧光蛋白报告基因(RFP),在水稻转化愈伤组织阶段筛... 基因捕获技术已被广泛应用于植物功能基因组学研究。文章构建了水稻PolyA捕获载体pLJ19,该载体含有用于检测转化事件的绿色荧光蛋白报告基因(GFP)及用于进行PolyA捕获的无终止子的红色荧光蛋白报告基因(RFP),在水稻转化愈伤组织阶段筛选同时含有GFP及RFP的转化愈伤组织并进行RFP插入位点T-DNA侧翼序列(FST)分析可获得水稻终止子序列。将pLJ19转化粳稻品种‘日本晴’的胚性愈伤组织,获得了17个具有PolyA捕获事件的愈伤组织。FST序列分析表明6个T-DNA插入在水稻基因组序列中,其中有5个T-DNA插入在水稻基因3’端附近。结果表明,pLJ19载体可用于水稻终止子捕获研究中,可为水稻终止子研究提供研究方法和材料。 展开更多
关键词 基因捕获 终止子 红色荧光蛋白 水稻
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植物基因捕获系统及其应用研究进展 被引量:1
7
作者 巩艳青 夏阳 王太明 《山东林业科技》 2006年第6期68-70,共3页
随着人类和其他一些重要动、植物序列数据的快速积累,我们面临着如何鉴定这些序列数据所代表的生物学功能的巨大挑战。基因捕获技术是一种产生大规模基因突变的便利手段,对于揭示大量基因序列所对应的基因功能具有重要应用价值。本文介... 随着人类和其他一些重要动、植物序列数据的快速积累,我们面临着如何鉴定这些序列数据所代表的生物学功能的巨大挑战。基因捕获技术是一种产生大规模基因突变的便利手段,对于揭示大量基因序列所对应的基因功能具有重要应用价值。本文介绍了植物中的基因捕捉系统及其在植物分子生物学研究中的应用。 展开更多
关键词 基因捕获 插入元件 报告基因
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Tc1/Mariner转座子超家族的研究进展 被引量:2
8
作者 沈丹 陈才 +3 位作者 王赛赛 陈伟 高波 宋成义 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-13,共13页
随着高通量测序技术的迅猛发展,越来越多的生物基因组注释结果表明:转座子几乎存在于所有生物的基因组中,是大多数生物基因组的重要组分。其中,Tc1/Mariner转座子是自然界中分布最广泛的一类DNA转座子超家族,在自然界已经发现14个有活性... 随着高通量测序技术的迅猛发展,越来越多的生物基因组注释结果表明:转座子几乎存在于所有生物的基因组中,是大多数生物基因组的重要组分。其中,Tc1/Mariner转座子是自然界中分布最广泛的一类DNA转座子超家族,在自然界已经发现14个有活性的Tc1/Mariner转座子(如Minos,Mos1等),另外通过分子重构也获得高活性的人工转座子,如睡美人转座子(Sleeping Beauty,SB)。SB和Mos1等转座子作为基因转移载体已被广泛应用于转基因、基因捕获和基因治疗等领域的研究中,并取得了很好的应用效果。本文将重点综述Tc1/Mariner转座子的结构、分类、分布、转座机制、活性转座子的挖掘,及其在转基因、基因捕获和基因治疗等研究领域的应用。 展开更多
关键词 Tc1/Mariner转座子 转基因 基因治疗 基因捕获
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基因捕获成体干细胞及鉴定的初步研究 被引量:2
9
作者 王明科 邹仲敏 罗成基 《山西医科大学学报》 CAS 2008年第2期112-115,F0003,共5页
目的探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性。方法线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质... 目的探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性。方法线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质干细胞(hBMSC)。为排除潮霉素B筛选的假阳性干细胞,以C2C12、hBMSC细胞基因组DNA为模板,PCR扩增ROSAFARY上LacZ部分序列(560 bp)进行鉴定。结果ROSAFARY脂质体转染PA317细胞后LacZ染色,400倍镜下可见2-5个蓝色细胞/视野。病毒上清感染种植于24孔板的C2C12和hBMSC,4 d后经LacZ染色,C2C12可见6个蓝色细胞/孔,400倍镜下hBMSC可见4-5个蓝色细胞/视野。最佳PCR鉴定参数为基因组模板量2μg,退火温度55.5℃,Mg2+浓度3 mmol/L。结论逆转录病毒基因捕获载体感染多种成体干细胞后LacZ染色显示可成功捕获激活状态启动子驱动的基因,为基因捕获应用于成体干细胞分化及恶性转化分子机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 基因捕获 成体干细胞 聚合酶链反应 Β-半乳糖苷酶
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肺炎克雷伯菌多药耐药株的耐药机制研究 被引量:2
10
作者 朱健铭 孙晓珍 +3 位作者 姜如金 吴康乐 王建敏 马兆龙 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第17期2549-2552,共4页
目的调查1株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)58种耐药相关基因与可移动遗传元件的存在情况。方法对分离自我国内地的1株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析58种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和其他广谱抗菌药物耐... 目的调查1株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)58种耐药相关基因与可移动遗传元件的存在情况。方法对分离自我国内地的1株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析58种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和其他广谱抗菌药物耐药相关基因与可移动遗传元件。结果该株MDRKP检出TEM-1、SHV-11(均测序比对证实)t、etA、mdfAt、rbCt、np513I、SEcp1基因,且gyrA基因存在突变,其余50种基因未检出。结论该菌株耐Ⅰ~Ⅲ代头孢菌素抗菌药物,可能与同时产TEM-1型和SHV-11型β-内酰胺酶引起牵制耐药机制有关,该株MDRKP表型为多药耐药与gyrA基因突变及获得可移动遗传元件和多种耐药基因相关,在肺炎克雷伯菌中检出ISEcp1为国内首次报道。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 耐药基因 多药耐药 牵制耐药机制
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SUNDER:Self-organized grouping and entrapping method for swarms in multitarget environments
11
作者 Yutong Yuan Zhun Fan +5 位作者 Xiaomin Zhu Li Ma Ji Ouyang Weidong Bao Ji Wang Zhaojun Wang 《Defence Technology(防务技术)》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第8期68-83,共16页
For swarm robots moving in a harsh or uncharted outdoor environment without GPS guidance and global communication,algorithms that rely on global-based information are infeasible.Typically,traditional gene regulatory n... For swarm robots moving in a harsh or uncharted outdoor environment without GPS guidance and global communication,algorithms that rely on global-based information are infeasible.Typically,traditional gene regulatory networks(GRNs)that achieve superior performance in forming trapping pattern towards targets require accurate global positional information to guide swarm robots.This article presents a gene regulatory network with Self-organized grouping and entrapping method for swarms(SUNDER-GRN)to achieve adequate trapping performance with a large-scale swarm in a confined multitarget environment with access to only local information.A hierarchical self-organized grouping method(HSG)is proposed to structure subswarms in a distributed way.In addition,a modified distributed controller,with a relative coordinate system that is established to relieve the need for global information,is leveraged to facilitate subswarms entrapment toward different targets,thus improving the global multi-target entrapping performance.The results demonstrate the superiority of SUNDERGRN in the performance of structuring subswarms and entrapping 10 targets with 200 robots in an environment confined by obstacles and with only local information accessible. 展开更多
关键词 Swarm robots Local information gene regulatory network Swarm grouping trapping pattern Confined multitarget environment
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小鼠新基因Ayu17-449的克隆及表达分析(英文)
12
作者 汤华 荒木喜美 山村研一 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期413-419,共7页
在利用PU8 捕获载体从小鼠 ES 细胞中寻找有关对发育起重要作用基因时,一阳性ES克隆编号为Ayu17-449 被捕获,经过Southern blotting法证实捕获载体单一整合在Ayu17-449号ES细胞的基因组中。通过用 5′RACE 法得到所捕获基因的一小段cDNA... 在利用PU8 捕获载体从小鼠 ES 细胞中寻找有关对发育起重要作用基因时,一阳性ES克隆编号为Ayu17-449 被捕获,经过Southern blotting法证实捕获载体单一整合在Ayu17-449号ES细胞的基因组中。通过用 5′RACE 法得到所捕获基因的一小段cDNA,在EST数据库中比对,得到一5 523 bp cDNA 序列,在Celera数据库中它包含于两个相邻基因,根据这两个基因的 mRNA 设立了一系列的引物进行 RT-PCR 和测序,用这两个基因的不同片段分别作探针进行 Northern blotting 分析,确定这是一个 RNA 约 9 kb 并编码 1 920 个氨基酸的新基因(定名为 Ayu17-449 基因,其 cDNA 序列和编码蛋白序列发表在NCBI数据库,编号为DQ079067)。Northern blotting揭示Ayu17-449基因高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏、肺、肌肉和胃等组织。PU8 捕获载体具有X-gal报告基因,能从蛋白表达水平揭示它所捕获的基因的表达模式。X-gal染色结果显示,Ayu17-449蛋白高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏等组织,与Northern blotting 法的结果高度一致。X-gal染色切片结果进一步证明 Ayu17-449 蛋白主要表达在脑的神经细胞和肾脏近曲小管细胞中。Ayu17-449 基因的编码蛋白在数据库(Scansite, http://scansite.mit.edu/)做功能基团分析后,揭示其编码蛋白的N末端含有Granin基团,大量文献证实Granin基团具有参与激素的分泌的功能,显示Ayu17-449基因可能与激素的分泌有关。 展开更多
关键词 基因捕获法 Ayu17-449基因 全长CDNA Granin基因
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基因捕获技术 被引量:7
13
作者 党素英 王铸钢 《国际遗传学杂志》 CAS 2006年第1期20-25,共6页
基因捕获技术是一种产生大规模基因突变的便利手段,对于揭示大量基因序列所对应的基因功能具有重要应用价值。本文综述了基因捕获技术的基本原理和研究方法、发展现状及远景。
关键词 基因捕获 基因捕获载体 表达筛选
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嘌呤霉素抗性基因捕获载体的构建及在细胞中的功能验证 被引量:1
14
作者 黄婷婷 田园园 +4 位作者 张磊 张小花 万涛 黄爱龙 汤华 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期490-493,共4页
目的构建具有嘌呤霉素抗性基因捕获载体,扩大基因捕获载体的应用范围。方法用经改造的捕获载体(gene trapping vector)稳定转染HepG2.2.15肝癌细胞系,经嘌呤霉素筛选,制作单克隆细胞株。用PCR方法验证该载体的在细胞染色体中的... 目的构建具有嘌呤霉素抗性基因捕获载体,扩大基因捕获载体的应用范围。方法用经改造的捕获载体(gene trapping vector)稳定转染HepG2.2.15肝癌细胞系,经嘌呤霉素筛选,制作单克隆细胞株。用PCR方法验证该载体的在细胞染色体中的整合,ELISA方法证明捕获载体捕获基因后的细胞的功能改变。结果嘌呤霉素抗性基因捕获载体整合在HepG2.2.15肝癌细胞的染色体上,并能影响细胞HBsAg和HBeAg的分泌。结论新构建的嘌呤霉素抗性基因捕获载体能在具有G418抗性的细胞中捕获有意义的目的基因。 展开更多
关键词 捕获载体 嘌呤霉素抗性基因捕获载体 Hep2.2.15肝癌细胞系
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用基因诱捕法制作Ayu17-449基因敲除小鼠模型 被引量:2
15
作者 汤华 唐任宽 +2 位作者 黄爱龙 荒木喜美 山村研一 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期129-132,共4页
为了探明Ayu17449基因在小鼠生长发育过程中的功能,用特殊的诱捕载体(Genetrappingvector)导入小鼠ES细胞中,5′RACE、Southernblot方法鉴定单一捕获Ayu17449基因后,由这种ES制作了Ayu17449敲除小鼠并用Northernblot方法检测该基因在突... 为了探明Ayu17449基因在小鼠生长发育过程中的功能,用特殊的诱捕载体(Genetrappingvector)导入小鼠ES细胞中,5′RACE、Southernblot方法鉴定单一捕获Ayu17449基因后,由这种ES制作了Ayu17449敲除小鼠并用Northernblot方法检测该基因在突变小鼠体内的表达。结果在Ayu17449敲除小鼠体内,诱捕载体位于Ayu17449基因的翻译起始密码上游,Ayu17449基因的转录被抑制。表明Ayu17449敲除小鼠为分析Ayu17449基因的功能提供了可靠的实验材料。 展开更多
关键词 捕获载体 Ayu17-449 ES细胞
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面向后基因组研究的基因陷阱技术 被引量:2
16
作者 黄小乐 《中山大学研究生学刊(自然科学与医学版)》 2003年第3期6-15,共10页
随着越来越多的生物基因组序列的公布,关于后基因组的工作也逐渐展开。基因陷阱,作为克隆基因和研究其功能的重要技术,越来越显示出其举足轻重的作用。其在定向筛选,大规模化等方面的发展,使到它的应用日渐广泛。本文将对近年来基因陷... 随着越来越多的生物基因组序列的公布,关于后基因组的工作也逐渐展开。基因陷阱,作为克隆基因和研究其功能的重要技术,越来越显示出其举足轻重的作用。其在定向筛选,大规模化等方面的发展,使到它的应用日渐广泛。本文将对近年来基因陷阱技术的发展和前景作一综述。 展开更多
关键词 基因陷阱 陷阱裁体 基因陷阱序列标签库 后基因组
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条件性定点基因捕获载体的构建
17
作者 杨建岭 杨艺红 +1 位作者 姚智燕 魏林 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期74-79,共6页
基因捕获是依赖于捕获载体的随机插入产生突变而进行基因功能研究的一类重要技术。由于传统捕获载体在捕获位点上的局限性,各种新型的捕获载体正在不断地被设计并应用于基因捕获技术。以PL-451为基础质粒,结合定点的重组酶识别位点LoxP... 基因捕获是依赖于捕获载体的随机插入产生突变而进行基因功能研究的一类重要技术。由于传统捕获载体在捕获位点上的局限性,各种新型的捕获载体正在不断地被设计并应用于基因捕获技术。以PL-451为基础质粒,结合定点的重组酶识别位点LoxP及Frt序列,突变LoxP的1个碱基的LoxP511A和LoxP511B,SA位点以及不含启动子但有poly(A)的EGFP片断,构建了能够在捕获元件两侧克隆同源臂的条件性基因捕获载体,从而为实现可调控性基因捕获奠定基础。 展开更多
关键词 基因捕获 突变Lox P条件性基因捕获载体 定点基因捕获
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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究 被引量:1
18
作者 孟令英 缪成贵 +3 位作者 杜则澎 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-670,共10页
以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, ... 以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152~- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子. 展开更多
关键词 NGAL基因 寡核苷酸DNA亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应性
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利用基因捕获技术建立稳定表达HBV的细胞模型 被引量:2
19
作者 何云燕 谭畅 +2 位作者 李毅 黄爱龙 汤华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期24-28,共5页
pGEM-HBV1.3质粒经HindIII限制性内切酶消化,将HBV1.3全长DNA切下,与同样经HindIII限制性内切酶降解过的PU21连接,得到PU21-HBV重组质粒。将该重组质粒采用电击转染方法导入HepG2细胞中,G418筛选阳性克隆并以X-gal染色,RT-PCR、Southern... pGEM-HBV1.3质粒经HindIII限制性内切酶消化,将HBV1.3全长DNA切下,与同样经HindIII限制性内切酶降解过的PU21连接,得到PU21-HBV重组质粒。将该重组质粒采用电击转染方法导入HepG2细胞中,G418筛选阳性克隆并以X-gal染色,RT-PCR、Southernblot等方法验证HBVDNA的插入和表达。PU21-HBV重组质粒经测序证明HBV1.3全长DNA正确与PU21载体连接,该重组质粒转染HepG2细胞后经G418筛选,得到一系列阳性克隆,Southernblot证实HepG2细胞基因组中含HBVDNA,RT-PCR结果表明HBVDNA在HepG2细胞中有功能基因的转录。HBV1.3已被整合在HepG2细胞染色体中并能稳定表达其RNA。稳定的HBV表达细胞模型构建成功。HBV表达细胞模型的建立,为进一步研究相关基因对HBV的转录、复制、转录后调节以及HBV各种蛋白的表达机理研究提供实验材料。 展开更多
关键词 PU21基因捕获载体 乙型肝炎病毒(HBV) 表达
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基因捕获技术的现状及应用 被引量:1
20
作者 王明科 孙慧勤 +1 位作者 粟永萍 邹仲敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期107-111,共5页
随着越来越多生物基因组测序的完成,生物医学研究已进入后基因组时代。基因捕获技术由于其在克隆、发现新基因及揭示基因功能方面具有独特的优点,已成为功能基因组时代研究的有力工具,在生物医学研究各个领域的应用日趋广泛。主要对基... 随着越来越多生物基因组测序的完成,生物医学研究已进入后基因组时代。基因捕获技术由于其在克隆、发现新基因及揭示基因功能方面具有独特的优点,已成为功能基因组时代研究的有力工具,在生物医学研究各个领域的应用日趋广泛。主要对基因捕获技术的原理、分类、一般操作流程、优缺点及基因捕获在发育生物学、新基因鉴定、干细胞分化、肿瘤和生殖医学研究方面的应用作一综述,为相关研究者提供借鉴。 展开更多
关键词 基因捕获 发育生物学 新基因鉴定 干细胞分化 肿瘤 生殖医学
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