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基因功能研究方法浅介 被引量:3
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作者 刘楠梅 《生物技术通讯》 CAS 2000年第3期231-233,共3页
随着人类基因组计划的进展 ,数据库中积累了越来越多未知功能的基因序列 ,分析这些基因的功能将成为基因组计划的主要任务。
关键词 基因功能 转基因动物 基因敲除 基因敲入
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Progress of gene targeting in mouse 被引量:5
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作者 Xiao Yang Peitang Huang Cuifen Huang 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2001年第4期265-271,共7页
Gene targeting is a powerful approach of studying the gene function in vivo. Specific genetic modifications, including simple gene disruption, point mutations, large chromosomal deletions and rearrangements, targeted ... Gene targeting is a powerful approach of studying the gene function in vivo. Specific genetic modifications, including simple gene disruption, point mutations, large chromosomal deletions and rearrangements, targeted incorporation of foreign genes, could be introduced into the mouse genome by gene targeting. Recent studies make it possible to do the gene targeting with temporal and spatial control. 展开更多
关键词 gene TARGETING gene KNOCKOUT CHROMOSOMAL engineering gene knockin.
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CRISPR/Cas9技术在昆虫基因功能研究中的应用及优化 被引量:2
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作者 刘露露 林哲 邹振 《热带生物学报》 2023年第1期50-59,共10页
主要概述了CRISPR/Cas9技术应用于涉及鞘翅目、鳞翅目、膜翅目、半翅目、直翅目和双翅目的昆虫在色素沉着、抗性、嗅觉、交配和性别发生等方面的研究进展,包括基因敲除和基因敲入技术的应用,同时总结了目前CRISPR/Cas9系统的优化方案,... 主要概述了CRISPR/Cas9技术应用于涉及鞘翅目、鳞翅目、膜翅目、半翅目、直翅目和双翅目的昆虫在色素沉着、抗性、嗅觉、交配和性别发生等方面的研究进展,包括基因敲除和基因敲入技术的应用,同时总结了目前CRISPR/Cas9系统的优化方案,最后对改良CRISPR/Cas9系统在昆虫基因组学研究和农业害虫防控的应用前景进行了展望。利用基因编辑技术对昆虫基因功能进行探究是除基因过表达、RNA干扰等方法外的一种有效策略。CRISPR/Cas9技术是近年来出现并迅速发展的第三代基因编辑工具,以操作简便、成本低和编辑效率高等优点而被广泛应用于生物科学中的各个分支。 展开更多
关键词 基因编辑技术 CRISPR/Cas9 基因敲除 基因敲入
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基因工程改造植物乳杆菌生产光学纯D-乳酸 被引量:3
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作者 张媛 王小艳 +2 位作者 陈博 李义 佟毅 《当代化工》 CAS 2019年第4期674-678,682,共6页
为获得高产高光学纯D-乳酸生产菌,本研究从筛选得到的一株耐高温耐高糖的植物乳杆菌出发,利用基因工程技术,敲除其中与L-乳酸合成相关的基因,引入或增强D-乳酸脱氢酶活性,构建了一株基因工程菌Lp-DA。该菌株可45℃发酵,产乳酸近200 g/L... 为获得高产高光学纯D-乳酸生产菌,本研究从筛选得到的一株耐高温耐高糖的植物乳杆菌出发,利用基因工程技术,敲除其中与L-乳酸合成相关的基因,引入或增强D-乳酸脱氢酶活性,构建了一株基因工程菌Lp-DA。该菌株可45℃发酵,产乳酸近200 g/L,D-乳酸光学纯度达到99.9%,为光学纯D-乳酸工业生产提供了新的菌株选择。 展开更多
关键词 D-乳酸 植物乳杆菌 光学纯 基因敲除 基因敲入
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后基因组时代的基因工程小鼠 被引量:12
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作者 胡以平 曾溢滔 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期117-119,共3页
基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代... 基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代的到来 ,使得生物医药研究对基因工程小鼠的需求日趋增加 ,同时也促使基因工程小鼠技术体系得到了快速的发展。然而 ,在基因工程小鼠的产生中 ,仍存在着一些问题。它们的解决 。 展开更多
关键词 基因工程小鼠 转基因小鼠 基因剔除小鼠 基因替换小鼠
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GATA1s敲除hPSCs模型构建与造血分化影响初探
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作者 李霞 李晓红 +2 位作者 周涯 马峰 张勇刚 《生命的化学》 CAS 2023年第3期443-453,共11页
本文建立了GATA1s敲除人多能干细胞(human pluripotent stem cells,hPSCs)细胞株,并以此为模型探讨了GATA1s缺失对体外诱导造血分化的影响。本文通过构建含有重组臂-敲入片段(GATA1外显子Ⅱ-Ⅵ序列及BGH polyA序列)-LoxP-潮霉素筛选标记... 本文建立了GATA1s敲除人多能干细胞(human pluripotent stem cells,hPSCs)细胞株,并以此为模型探讨了GATA1s缺失对体外诱导造血分化的影响。本文通过构建含有重组臂-敲入片段(GATA1外显子Ⅱ-Ⅵ序列及BGH polyA序列)-LoxP-潮霉素筛选标记-LoxP-重组臂的打靶质粒和含有gRNA-Cas9的gRNA质粒对hPSCs进行基因编辑以敲除GATA1s。通过第一步电穿孔将以上质粒导入细胞,潮霉素初步筛选7 d后的阳性克隆进行下一步电穿孔环化重组酶(Cre)使LoxP位点特异性重组以去除筛选标记,通过单细胞克隆的方式进一步培养,PCR及测序鉴定出正确基因编辑细胞,最后通过蛋白质免疫印迹验证其GATA1与GATA1s蛋白的表达情况,验证敲除GATA1s后的细胞株进行体外诱导造血分化,发现其CD34^(+)、CD43^(+)及CD45^(+)细胞增多,但GPA^(+)、CD41a^(+)及CD42b^(+)细胞显著减少,通过转座子系统过表达GATA1也不能挽救其减少的GPA^(+)、CD41a^(+)及CD42b^(+)细胞。本研究建立了GATA1s敲除hPSCs细胞株,并发现其在造血分化时有重要作用。 展开更多
关键词 GATA1 GATA1s 多能干细胞 基因敲入技术 聚簇规则间隔短回文重复序列 CRISPR相关蛋白 造血分化
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Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型的建立及表型分析
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作者 郑晋华 何敏珠 +3 位作者 奚骏 庄华 王铸钢 匡颖 《实验动物与比较医学》 CAS 2014年第5期345-352,共8页
目的 建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型并开展相关表型分析,以满足我国糖尿病相关研究和药物研发的需求.方法 通过基因工程技术建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型,测定三种基因型小鼠体质量、血糖变化;分别取三种基因型8月龄小鼠,检测... 目的 建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型并开展相关表型分析,以满足我国糖尿病相关研究和药物研发的需求.方法 通过基因工程技术建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型,测定三种基因型小鼠体质量、血糖变化;分别取三种基因型8月龄小鼠,检测血糖、血清胰岛素,以及肝功能、肾功能、血脂等血液生化指标,进行统计分析;对纯合子和野生型小鼠的肝脏、肾脏进行病理分析.结果 成功获得Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型;初步表型分析显示:Leprtm1Srcmo基因敲入纯合子小鼠出生4周起即表现出过度肥胖,纯合子雄鼠表现出高血糖、高胰岛素、脂质代谢紊乱、肝肾功能异常等表型,13月龄Leprtm1Srcmo小鼠血糖恢复正常;病理检测发现,Leprtm1Srcmo小鼠肝肿大,并出现肝细胞空泡化等脂肪变性现象,以及肾小球肥大等病理改变.结论 该模型的建立为进一步研究2型糖尿病发病机制及治疗方法奠定了基础. 展开更多
关键词 Lepr基因 基因敲入小鼠 2型糖尿病
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