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一个新鼻咽癌抑瘤候选基因的克隆及其功能初步分析 被引量：32
1
作者 余鹰谢 奕曹利 +3 位作者 张必成 周鸣 李桂源 public.cs.hn.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期319-324,共6页
从cDNA代表差异分析法 (cDNArepresentationaldifferenceanalysis ,cDNARDA)分离的新cDNA片段入手 ,进一步采用RT PCR验证 ,其中发现AF152 60 5片段在 74 %鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)活检组织中表达下调和缺失 ,DNA印迹显... 从cDNA代表差异分析法 (cDNArepresentationaldifferenceanalysis ,cDNARDA)分离的新cDNA片段入手 ,进一步采用RT PCR验证 ,其中发现AF152 60 5片段在 74 %鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)活检组织中表达下调和缺失 ,DNA印迹显示其代表一转录本为 2 1kb的基因 ,结合生物信息学 ,运用文库筛选克隆该基因 ,命名为NAG4基因 ,GenBank登录号AF1792 85,定位于 6q2 2 1～ 2 2 33 ,至少含有两个外显子 ,并在第一外显子的上游有TATA盒样序列 ,编码一个 50 8个氨基酸组成的、分子质量为 57 4ku的蛋白质 ;功能预测NAG4基因产物与小鼠溴区蛋白BP75有 84 %同源 ,是含有多个磷酸化位点和溴区结构域的核内转录因子 ;突变分析表明NAG4基因在HeLa细胞株中发生整码突变 .以上结果说明NAG4基因是鼻咽癌抑瘤基因的良好候选者 。 展开更多
关键词 抑瘤基因 鼻咽癌 基因克隆 CDNARDA
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Cecropin B抗菌肽基因的定向诱变与表达 被引量：21
2
作者 胡云龙 胡泰山 +5 位作者 林世康 苏剑 施国民 李伟 赵学忠 屈贤铭 《药物生物技术》 CAS CSCD 1999年第4期193-197,共5页
采用寡核苷酸介导的定向点突变法，对天蚕抗菌肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因１３ 位甲硫氨酸（ Ｍｅｔ） 诱变为亮氨酸（Ｌｅｕ） 或缬氨酸（Ｖａｌ） ，保留１ 位上的Ｍｅｔ，诱变后的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＢＤＮＡ序列分析证明产生了预期的... 采用寡核苷酸介导的定向点突变法，对天蚕抗菌肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因１３ 位甲硫氨酸（ Ｍｅｔ） 诱变为亮氨酸（Ｌｅｕ） 或缬氨酸（Ｖａｌ） ，保留１ 位上的Ｍｅｔ，诱变后的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＢＤＮＡ序列分析证明产生了预期的点突变。将Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ 突变体基因与ｐＧＥＸ４Ｔ２ 融合表达载体中的谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ） 基因融合，在Ｅ．ｃｏｌｉ 中表达，当ＩＰＴＧ 诱导３０ｍｉｎ 后，工程菌的数量开始减少，然后逐渐恢复正常。说明Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ 突变体与ＧＳＴ 基因融合表达后仍然具有很强杀伤原核细胞的作用。 展开更多
关键词 抗菌肽 定向诱变 基因表达 CECROPIN B
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茵陈术附汤对阴黄证大鼠肝细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响 被引量：14
3
作者 张建军 何敢想 张赤志 《中西医结合学报》 CAS 2003年第2期116-118,共3页
目的　观察阴黄证大鼠肝细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax的表达以及茵陈术附汤对其的影响。方法　 48只大鼠随机分为 4组 :正常对照组 ,阴黄模型组 ,阳黄对照组 ,茵陈术附汤组。采用TUNEL和免疫组化法检测大鼠肝细胞凋亡及Bcl 2、Bax... 目的　观察阴黄证大鼠肝细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax的表达以及茵陈术附汤对其的影响。方法　 48只大鼠随机分为 4组 :正常对照组 ,阴黄模型组 ,阳黄对照组 ,茵陈术附汤组。采用TUNEL和免疫组化法检测大鼠肝细胞凋亡及Bcl 2、Bax表达。结果　阴黄证大鼠肝细胞凋亡程度明显高于阳黄及正常对照组 (P <0 .0 1) ,茵陈术附汤组肝组织Bcl 2蛋白表达明显高于阴黄模型组 (P <0 .0 5) ,且其Bax蛋白表达明显低于阴黄模型组 (P <0 .0 5)。结论　茵陈术附汤通过促进Bcl 2表达和抑制Bax表达阻断阴黄证大鼠肝细胞凋亡 。 展开更多
关键词 茵陈术附汤 阴黄证 大鼠 肝细胞凋亡 BCL-2 BAX 表达
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两个鼻咽癌负相关新基因的分离与特性 被引量：8
4
作者 余鹰 张必成 +5 位作者 谢奕 曹利 周鸣 朱诗国 湛凤凰 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第5期637-643,共7页
8个通过 c DNA代表差异分析法 ( c DNA representational difference analysis,c DNA RDA)分离的新 c DNA序列中 ,经 RT- PCR验证 ,发现其中一 c DNA序列 (登录号 :AF0 91 51 7)在 40 %的鼻咽癌活检组织中存在表达缺失和下调 .Northern... 8个通过 c DNA代表差异分析法 ( c DNA representational difference analysis,c DNA RDA)分离的新 c DNA序列中 ,经 RT- PCR验证 ,发现其中一 c DNA序列 (登录号 :AF0 91 51 7)在 40 %的鼻咽癌活检组织中存在表达缺失和下调 .Northern杂交显示 ,AF0 91 51 7代表转录本为 1 .1 kb和 1 .4kb大小的两个基因 ,进而采用文库筛选 ,成功分离出 3′端完全不同的两个基因 ,命名为 NAG1 1和 NAG 1 2 (登录号分别为 AF 1 70 30 7和 AF 1 94971 ) .经过计算机预测 ,NAG 1 1编码 87个氨基酸组成的跨膜蛋白 ,NAG1 2编码 1 36个氨基酸组成的可溶性的核蛋白 ,两者无任何同源性 .NAG 1 1蛋白含有 3个 ATP结合区、两个蛋白激酶 C磷酸化位点和两个 N-肉豆寇酸化位点 ,NAG 1 2含有POU结构域和多个功能位点 .结果说明 NAG1 1和 NAG1 2的表达的缺失与下调可能参与了鼻咽癌的进程 ;NAG1 1基因产物可能与 ATP的跨膜转运有关 ;NAG1 2基因产物可能与转录翻译有关 . 展开更多
关键词 鼻咽癌 分离 抑瘤基因 基因克隆 序列分析
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转sbk和sck抗虫基因水稻的获得 被引量：8
5
作者 张启军 吕川根 +4 位作者 夏士健 宗寿余 漆庆明 虞德容 孙永华 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第1期49-52,共4页
转入多个抗虫基因是解决水稻抗虫的一条有效途径。本研究采用根癌农杆菌介导法将2个抗虫基因(sbk和sck)同时转入3个水稻品种中,通过一系列的分子检测(PCR和RT-PCR)分析,这2个基因已经成功转入3个水稻品种中并得到了表达;同时还获得1株... 转入多个抗虫基因是解决水稻抗虫的一条有效途径。本研究采用根癌农杆菌介导法将2个抗虫基因(sbk和sck)同时转入3个水稻品种中,通过一系列的分子检测(PCR和RT-PCR)分析,这2个基因已经成功转入3个水稻品种中并得到了表达;同时还获得1株不含抗生素筛选标记基因(hpt)和抗虫sbk基因,却含抗虫sck基因的转基因植株,命名为YJ27-5sck。用该植株作为供体,通过杂交将sck抗虫基因转育到另外5个水稻品种中且同样得到了表达,获得了不含筛选标记基因的转sck基因阳性植株。 展开更多
关键词 水稻 抗虫基因 转基因植株 基因表达
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作物杂种优势的生理生化研究进展 被引量：8
6
作者 景小兰 李金梅 +2 位作者 张福耀 赵威军 程庆军 《中国农学通报》 CSCD 2008年第2期233-237,共5页
杂种优势是生物界的一种普遍现象,可以大幅度提高作物产量和改良作物品质,具有巨大的商用价值。基因必须通过DNA→mRNA→蛋白质才能对最终性状起作用。通过从DNA结构、基因表达、生理生化代谢、核质基因组互作等方面的综述,总结了国内... 杂种优势是生物界的一种普遍现象,可以大幅度提高作物产量和改良作物品质,具有巨大的商用价值。基因必须通过DNA→mRNA→蛋白质才能对最终性状起作用。通过从DNA结构、基因表达、生理生化代谢、核质基因组互作等方面的综述,总结了国内外杂种优势遗传机理的研究成果。 展开更多
关键词 杂种优势 DNA结构 基因表达 生理生化代谢 核质基因组互作
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高粱GATA基因家族的全基因组鉴定及表达分析 被引量：6
7
作者 宋迎辉 朱灿灿 +5 位作者 代书桃 秦娜 王春义 张真 李君霞 平西栓 《山东农业科学》 北大核心 2022年第8期14-23,共10页
本研究利用生物信息学方法对高粱GATA基因家族成员进行全基因组鉴定和分析,以期为其基因功能研究奠定基础。结果表明,在高粱基因组中共鉴定到30个GATA基因,不均匀地分布在8条染色体上,2号和7号染色体无分布;26个基因含有CX_(2)CX_(18)CX... 本研究利用生物信息学方法对高粱GATA基因家族成员进行全基因组鉴定和分析,以期为其基因功能研究奠定基础。结果表明,在高粱基因组中共鉴定到30个GATA基因,不均匀地分布在8条染色体上,2号和7号染色体无分布;26个基因含有CX_(2)CX_(18)CX_(2)C保守基序,SbGATA3、SbGATA4、SbGATA18和SbGATA30含有CX_(2)CX_(20)CX_(2)C保守基序;进化树分析表明,高粱GATA基因家族可分为4组,分别包含15、9、4、2个基因,同一组内的成员保守锌指结构域蛋白序列一致性更高,基因结构和保守基序高度相似;高粱GATA蛋白与单子叶植物玉米和谷子的同源性大于双子叶植物拟南芥;顺式调控元件分析发现,SbGATA启动子序列中存在调控生长发育、激素信号传导和逆境胁迫响应元件,检测到光响应元件G-box、脱落酸响应元件ABRE、茉莉酸甲酯响应元件CGTCA-motif和厌氧诱导响应元件ARE数量最多,另外检测到低温响应元件LTR和干旱诱导性元件MBS。表达分析表明,SbGATA16、SbGATA9、SbGATA25和SbGATA20在多数组织中表达量均较高。模拟干旱处理高粱GATA基因转录组数据分析发现,SbGATA11和SbGATA26上调表达,说明这两个基因可能在干旱胁迫响应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 高粱 GATA基因家族 全基因组鉴定 系统发育 表达分析
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小鼠MIF在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量：5
8
作者 侯桂华 于敏 李璐娜 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2003年第5期469-471,共3页
目的:获得足够量的高纯度小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)重组蛋白。方法:酶切重组克隆质粒pMD18-MIF,将片段插入原核表达载体pQE31,构建相应的重组表达质粒pQE31-MIF,将此质粒转化大肠杆菌M15,得到转化子。经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白... 目的:获得足够量的高纯度小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)重组蛋白。方法:酶切重组克隆质粒pMD18-MIF,将片段插入原核表达载体pQE31,构建相应的重组表达质粒pQE31-MIF,将此质粒转化大肠杆菌M15,得到转化子。经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Westernblotting免疫印迹分析,并用Ni-NTA凝胶进行纯化。结果:MIF基因重组体构建成功,克隆的目的基因片段在M15中产生的融合表达产物在Westernblotting检测中具有与抗MIF单克隆抗体发生特异性结合反应的特性。得到了纯化的目的蛋白。结论:MIF基因片段可在大肠杆菌中有效表达,表达产物可以与抗MIF单克隆抗体发生特异性结合反应,并得到纯化的MIF。 展开更多
关键词 巨噬细胞游走抑制因子 小鼠 基因表达 大肠杆菌
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外因遗传学及其重要意义 被引量：3
9
作者 胡楷 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期734-738,共5页
本文综述外因遗传学的提出、发展的各个主要阶段和该学科的确立。基因特性可以从两个层面来进行研究,(1)是遗传物质的传递,(2)是从基因型到表型这个过程。外因遗传学从1942年沃丁顿提出,经1987年霍利迪的发展,到现今在各类生物包括人类... 本文综述外因遗传学的提出、发展的各个主要阶段和该学科的确立。基因特性可以从两个层面来进行研究,(1)是遗传物质的传递,(2)是从基因型到表型这个过程。外因遗传学从1942年沃丁顿提出,经1987年霍利迪的发展,到现今在各类生物包括人类中积累了丰富的资料,并能够用化学分子来说明其作用机理。外因遗传学现代的定义为:基因功能的改变,凡未牵涉到DNA的序列,又可通过细胞的有丝或减数分裂而遗传者,称为外因遗传。作者介绍了外因遗传的范围,如:X染色体剂量补偿、基因组印记、分化细胞的基因组重新编程、癌基因、转录的分子调节、RNA介导的基因沉默、组蛋白码、着丝粒的遗传和进化以及外因遗传的进化。此外,还有科学界的反应和评价,包括其在人类生物学和医学方面的重要性和该理论的重大的意义。组蛋白码不同于DNA码,DNA码需要精确拷贝,而且是静止的;而外因遗传就不是如此之僵硬,而具有一定的弹性,因为组蛋白码是决定于其上下文的,可在不同场景下组合成不同的码,它是为其他的蛋白质所读的。遗传需要稳定性,也需要根据内因和外因的变化而有灵活性,DNA码和组蛋白码相辅相成,对复杂的生物是必备的。 展开更多
关键词 外因遗传学 基因表达 发展阶段 外来基因
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NAG11和NAG12基因转染对鼻咽癌细胞生长的影响 被引量：1
10
作者 余鹰 曹利 +5 位作者 朱诗国 张必成 李忠花 向娟娟 李小玲 李桂源 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第2期177-183,共7页
为了考察鼻咽癌表达下调 /缺失基因 NAG1 1和 NAG1 2对鼻咽癌细胞系 HNE1生长的影响 ,构建了NAG1 1和 NAG1 2基因真核表达载体 pc DNA3.1 ( +) /NAG1 1和 pc DNA3.1 ( +) /NAG1 2 ,采用脂质体转染技术将真核重组质粒和空载体质粒分别导... 为了考察鼻咽癌表达下调 /缺失基因 NAG1 1和 NAG1 2对鼻咽癌细胞系 HNE1生长的影响 ,构建了NAG1 1和 NAG1 2基因真核表达载体 pc DNA3.1 ( +) /NAG1 1和 pc DNA3.1 ( +) /NAG1 2 ,采用脂质体转染技术将真核重组质粒和空载体质粒分别导入 HNE1细胞 ,观察转染后 HNE1细胞生物学特性的变化 .结果显示 ,NAG1 1重表达对 HNE1细胞生长和细胞周期没有明显的影响 ,而 NAG1 2重表达对 HNE1细胞有生长抑制作用 ,与空载体转染组相比 ,倍增时间由 2 4 .1 h延长至 31 .1 h,停滞于 G0 -G1期细胞数由 51 .4 2 %增加至68.1 4 % .以上实验进一步说明鼻咽癌是多基因改变的疾病 ,NAG1 2的重表达有助于鼻咽癌恶性表型的逆转 . 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 NAG11基因 NAG12基因 基因表达 基因转染 癌细胞
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一株普鲁兰酶产生菌的筛选及其基因克隆和酶学特性研究 被引量：3
11
作者 王培立 初晓宇 伍宁丰 《生物技术进展》 2013年第4期264-269,F0002,共7页
普鲁兰酶作为一种解支酶,能够特异地作用于多糖中的α-1,6糖苷键,将淀粉中高度分支的支链淀粉转变成直链淀粉。本文通过以普鲁兰糖为唯一碳源的功能平板筛选方法,从云南腾冲温泉淤泥中分离到1株产普鲁兰酶的菌株73号,经16S rDNA序列分析... 普鲁兰酶作为一种解支酶,能够特异地作用于多糖中的α-1,6糖苷键,将淀粉中高度分支的支链淀粉转变成直链淀粉。本文通过以普鲁兰糖为唯一碳源的功能平板筛选方法,从云南腾冲温泉淤泥中分离到1株产普鲁兰酶的菌株73号,经16S rDNA序列分析,该菌属于厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus sp.)。通过普鲁兰酶的保守区片段扩增及序列比对,最终从该菌中克隆得到普鲁兰酶编码基因pul73,全长2121bp,编码706个氨基酸。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达和纯化,获得酶蛋白Pul73最适温度50℃,最适pH6.0,在65℃有较好的热稳定性,保温30min后仍有72%的剩余酶活。50℃时Pul73对普鲁兰糖的Km为1.643mg/mL,其最大反应速度Vmax为1.34U/mg,kcat为535.8/s。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 基因克隆 基因表达
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伪狂犬病病毒糖蛋白G基因的结构分析及其原核表达 被引量：3
12
作者 闵平 张楚瑜 潘兹书 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期166-171,共6页
利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G +C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷... 利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G +C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分别为 98%、84.1%。 32 0～ 380位之间的氨基酸序列存在较大差异。根据序列分析结果 ,选取 gG基因长短不同的两个片段分别克隆到原核表达载体 pET2 8a(+)进行表达。经SDS PAGE和Dot ELISA分析证实 ,表达出分子量大小分别约为 5 5kD和 6 3kD的特异性gG多肽 ,这为深入阐明PRV gG基因结构与功能及研制 gG 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 糖蛋白G 原核表达 核苷酸序列 氨基酸 序列 基因表达 基因结构
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红叶山茶品种花青素苷相关基因表达水平及代谢产物分析 被引量：3
13
作者 应震 李纪元 +4 位作者 殷恒福 范正琪 倪穗 吴斌 吕焘 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2017年第6期1034-1040,共7页
[目的]通过对花青素苷相关合成基因的表达水平和代谢产物的分析,系统地阐明‘金华美女’叶色变异与基因表达的关系。[方法]以‘金华美女’为材料,‘贝拉大玫瑰’、杜鹃红山茶和红山茶为参照组,使用NCBI Primer Designing Tool设计山茶DF... [目的]通过对花青素苷相关合成基因的表达水平和代谢产物的分析,系统地阐明‘金华美女’叶色变异与基因表达的关系。[方法]以‘金华美女’为材料,‘贝拉大玫瑰’、杜鹃红山茶和红山茶为参照组,使用NCBI Primer Designing Tool设计山茶DFR、ANS、LAR、ANR和UFGT基因的荧光定量引物,使用实时荧光定量PCR仪测定这5个基因在叶片4个发育时期的表达量;采用高效液相色谱仪测定对应时期的多酚合成途径的主要次生代谢产物(儿茶素、表儿茶素),以及花青素苷合成途径的主要代谢产物矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。[结果]表明:(1)在4个时期中,红叶品种叶片中DFR基因表达量与对照组差异不显著,ANS、LAR、ANR和UFGT基因在4个时期的表达量与对照组存在显著差异,这说明‘金华美女’类黄酮代谢途径相关基因在表达水平上发生了改变;(2)‘金华美女’叶片中多酚含量明显低于对照组,其中,表儿茶素含量仅为0.04 0.21 mg·g-1,这说明在生理水平上,‘金华美女’叶片中多酚合成途径可能受阻;(3)‘金华美女’叶片中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量达1.2 1.4 mg·g-1,4个生长阶段均显著高于对照组,这说明‘金华美女’叶片具备持续合成花青素苷的能力。[结论]根据试验结果,推断‘金华美女’叶色变异的主要原因可能是由于花青素还原酶基因的表达水平受到了抑制,降低了矢车菊素催化成表儿茶素的效率,使叶片类黄酮代谢途径中以多酚为主的合成方向转向花青素苷合成方向。 展开更多
关键词 山茶花 花青素苷 多酚 合成途径 基因表达量 叶色
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HPV16L1 ORF的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：3
14
作者 齐眉 于修平 +6 位作者 卞继峰 赵蔚明 董杰德 贾继辉 周亚滨 栾怡 陈华波 《山东医科大学学报》 2000年第2期117-119,共3页
目的 :获得足够量的人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1融合蛋白及含HPV 16L1ORF序列的基因重组体。方法 :通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段 ,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX 1,构建相应的重组表达质粒 pGEMEX L1,将此质粒转化大肠杆菌JM ... 目的 :获得足够量的人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1融合蛋白及含HPV 16L1ORF序列的基因重组体。方法 :通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段 ,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX 1,构建相应的重组表达质粒 pGEMEX L1,将此质粒转化大肠杆菌JM 10 9(DE3) ,得到的转化子经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Westernblotting免疫印迹分析。结果 :HPV16L1基因重组体构建成功 ,克隆的目的基因片段在大肠杆菌中产生的融合表达产物在Westernblotting检测中具有和抗HPV16L1阳性血清反应的抗原性。结论 :HPV16L1基因片段可在大肠杆菌中得到有效表达 。 展开更多
关键词 乳头瘤病毒 大肠杆菌 分子克隆 基因表达
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水稻灌浆期籽粒中光信号相关基因鉴定与表达分析 被引量：3
15
作者 杜彦修 季新 +4 位作者 彭廷 孙红正 张静 李俊周 赵全志 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1637-1647,共11页
光是影响水稻生长发育重要的环境因素,光作为信号物质调控水稻众多生长发育过程,但光信号在水稻籽粒灌浆中的作用研究较少。本研究利用高通量测序技术,对水稻灌浆期强、弱势粒中光信号途径相关基因进行了鉴定,从抽穗后10 d、15 d、21 d... 光是影响水稻生长发育重要的环境因素,光作为信号物质调控水稻众多生长发育过程,但光信号在水稻籽粒灌浆中的作用研究较少。本研究利用高通量测序技术,对水稻灌浆期强、弱势粒中光信号途径相关基因进行了鉴定,从抽穗后10 d、15 d、21 d、27 d和35 d 5个灌浆时期,鉴定出了5个光受体基因,9个光信号途径调控因子基因,8个光信号途径其他基因共22个光信号相关基因。光受体基因包括光敏色素Os PHYB和Os PHYC,隐花色素基因Os CRY1b、Os CRY2和Os CRY-DASH。Os PHYB和Os PHYC在5个灌浆时期强、弱势粒中均表达;Os CRY-DASH在5个灌浆时期弱势粒中均表达,在强势粒中除21 d外其余4个时期均表达。调控因子基因Os PIL15、Os COP1、Os HY5、Os HFR、Os SPT、Os ELF3-1和Os ELF3-2在5个灌浆时期强、弱势粒中均表达。灌浆期基因表达动态分析表明,光信号途径基因在弱势粒中的表达量高于强势粒,光敏色素基因与调控因子基因之间在灌浆期协同表达。 展开更多
关键词 水稻 籽粒 灌浆 光信号 基因表达
原文传递
盐生杜氏藻RNAi应用中的电激转化条件 被引量：1
16
作者 孙国华 隋正红 张学成 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期503-508,共6页
采用了两种电激模式-高电场强度低电容模式下3～7kV／cm和低电场强度高电容模式下300-500V／cm转化质粒pBl221-cat；PCR扩增检测cat基因部分序列及组织化学染色法GUS检测也同时证明质粒pBl221-cat在盐生杜氏藻中瞬时表达。在此基础之上... 采用了两种电激模式-高电场强度低电容模式下3～7kV／cm和低电场强度高电容模式下300-500V／cm转化质粒pBl221-cat；PCR扩增检测cat基因部分序列及组织化学染色法GUS检测也同时证明质粒pBl221-cat在盐生杜氏藻中瞬时表达。在此基础之上，插入pds基因的正反向重复序列，构建RNAi表达载体pBIRNAI-Dsa，电激方法转入杜氏盐藻细胞，荧光定量PCR结果表明，转入干涉载体pBIRNAI-Dsa的实验组的pds基因表达显著下降，最低达对照组的28％，表明表达受到抑制。 展开更多
关键词 盐生杜氏藻 电激转化 RNA干扰 基因表达
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一种嗜酸普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶基因在大肠杆菌中的诱导表达与活性表征 被引量：1
17
作者 王凤寰 续丹丹 +1 位作者 王玉海 于云娟 《北京化工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期82-86,共5页
从嗜酸普鲁兰芽孢杆菌基因组中扩增出普鲁兰酶基因Pul A,并将该基因连接到大肠杆菌表达载体p ET-28a中,构建了普鲁兰酶基因的诱导表达载体p ET-28a-Pul A。测序结果表明,普鲁兰酶基因Pul A长度为2766 bp,编码922个氨基酸。将重组载体转... 从嗜酸普鲁兰芽孢杆菌基因组中扩增出普鲁兰酶基因Pul A,并将该基因连接到大肠杆菌表达载体p ET-28a中,构建了普鲁兰酶基因的诱导表达载体p ET-28a-Pul A。测序结果表明,普鲁兰酶基因Pul A长度为2766 bp,编码922个氨基酸。将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,普鲁兰酶基因Pul A在IPTG诱导下获得表达,产生胞内蛋白。SDS-PAGE测定的分子量约为110 k D。细胞超声破碎液酶活为0.45 U/m L。该酶的最适温度为55℃,最适p H为5.0,金属离子对酶活性影响不显著,具有I型普鲁兰酶特性。此重组普鲁兰酶的酶学性质表明此酶具有独特的耐酸性质,具备一定的工业化应用价值。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 基因克隆 基因表达
原文传递
VP_1intron敲除对pSVL WAP tPA暂时性乳腺定位表达的影响 被引量：1
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作者 李银聚 侯玉泽 +6 位作者 康怀彬 王占彬 赵君 赖良学 扈荣良 殷震 杜利敏 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第4期378-380,共3页
在以ｃＤＮＡ表达外源蛋白时，表达载体中是否含有ｉｎｔｒｏｎ 会对表达造成一定的影响－ 利用基因工程手段将乳腺定位表达载体ｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ 中ＶＰ１ｉｎｔｒｏｎ 敲除，构建了表达载体ΔｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ－ 采... 在以ｃＤＮＡ表达外源蛋白时，表达载体中是否含有ｉｎｔｒｏｎ 会对表达造成一定的影响－ 利用基因工程手段将乳腺定位表达载体ｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ 中ＶＰ１ｉｎｔｒｏｎ 敲除，构建了表达载体ΔｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ－ 采用基因直接注射方法将两种表达载体分别注入家兔乳腺中，溶圈试验结果显示，ＶＰ１ｉｎｔｒｏｎ 去除后，ｔＰＡ 表达水平有所提高，分娩后第５ ｄ 乳中表达水平分别为４００ μｇ·Ｌ－１和６５０ μｇ·Ｌ－ １－ 展开更多
关键词 定位表达载体 基因敲除 乳腺 基因表达
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一种细胞特异性基因转录水平的分析方法
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作者 吴丽娟 黎燕 沈倍奋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期434-436,共3页
目的:报道一种更为灵敏的细胞特异性基因转录水平分析方法。方法:用灵敏度、重复性和线性试验对该法进行评价。结果:本法可以对5×105的细胞进行检测;5×106的细胞受试，杂交信号强度CV值为0.11;在5×105～1×107细胞... 目的:报道一种更为灵敏的细胞特异性基因转录水平分析方法。方法:用灵敏度、重复性和线性试验对该法进行评价。结果:本法可以对5×105的细胞进行检测;5×106的细胞受试，杂交信号强度CV值为0.11;在5×105～1×107细胞范围内，杂交信号强度与细胞数的线性关系较好.结论:该法灵敏度高，重复性和线性满意，可用于细胞核内新生成mRNA的分析。 展开更多
关键词 细胞核 基因表达 MRNA NRTA 基因转录
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利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因研究进展 被引量：1
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作者 曹倩倩 廖德芳 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期34-38,共5页
杆状病毒表达系统是一种新型、高表达的真核表达系统,广泛应用在新疫苗、诊断试剂和新型蛋白药物开发研究方面。不少研究人员报道了利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因生产结构蛋白和非结构蛋白,期望表达的蛋白质具有与真实病毒蛋白相... 杆状病毒表达系统是一种新型、高表达的真核表达系统,广泛应用在新疫苗、诊断试剂和新型蛋白药物开发研究方面。不少研究人员报道了利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因生产结构蛋白和非结构蛋白,期望表达的蛋白质具有与真实病毒蛋白相似的生物学活性,能够应用于候选疫苗或诊断检测抗原。作者对近几年利用重组杆状病毒表达口蹄疫结构蛋白基因和非结构蛋白基因的研究进展进行了综述,并提出相关问题和困难供商讨。 展开更多
关键词 重组杆状病毒 口蹄疫病毒 基因表达
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