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近20年中国部分地区鸡源H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传演化及其变异频率 被引量:29
1
作者 孟芳 徐怀英 +5 位作者 张伟 黄迪海 张再辉 刘霞 常维山 秦卓明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期35-43,共9页
【目的】通过比较不同时期的H9N2亚型禽流感流行毒株HA基因的分子特征和变异频率,揭示免疫压力下病毒的遗传演化趋势。【方法】选取源于课题组的40株鸡源H9N2毒株,以及从Gen Bank下载的136株中国鸡源H9N2流行毒株和7株经典毒株的序列,利... 【目的】通过比较不同时期的H9N2亚型禽流感流行毒株HA基因的分子特征和变异频率,揭示免疫压力下病毒的遗传演化趋势。【方法】选取源于课题组的40株鸡源H9N2毒株,以及从Gen Bank下载的136株中国鸡源H9N2流行毒株和7株经典毒株的序列,利用Lasergen 7.1和MEGA 5.1等软件,对其HA基因进行系统演化、分子特征和变异频率分析。【结果】系统发育分析表明,近20年的鸡源H9N2流行株分属于BJ94、Y280和S2等谱系,优势流行株的分布与年代密切相关。氨基酸序列比较显示,H9N2病毒不同谱系之间具有各自的特征,且存在着明显的氨基酸变异积累。以Ck/BJ/1/1994 HA基因为参照,1994–2014年间,H9N2流行株核苷酸和氨基酸的年均进化率分别为5.73×10^(–3)和4.25×10^(–3)。其中,2011–2014年的核苷酸(氨基酸)年均进化率为6.35×10^(–3)(5.32×10^(–3)),明显高于2006–2010年5.22×10^(–3)(3.70×10^(–3)),更显著高于疫苗推广初期1999–2005年的0.74×10^(–3)(0.50×10^(–3))。【结论】H9N2疫苗株和流行毒株的不匹配是病毒变异频率加快的重要原因。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感 HA基因 进化 变异频率
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畜禽抗性分子育种研究进展 被引量:7
2
作者 安立 龙效梅 《黄牛杂志》 1996年第4期15-19,共5页
近年分子遗传的理论和技术进展迅速,为动物抗性育种的研究开拓了新的空间。本文就抗性遗传概念,抗性基因的来源、标记、选择。
关键词 抗性分子育种 育种 抗性遗传 基因转换 基因突变
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感染性马传染性贫血病毒嵌合克隆的构建 被引量:10
3
作者 何翔 邵一鸣 +4 位作者 薛飞 范秀娟 贾斌 赵全壁 沈荣显 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期128-132,共5页
在已有的全长感染性克隆pFD3的基础上,构建了新的低拷贝的全长克隆pLGFD3-8。按照疫苗制备过程中env基因的变化情况,采用基因替换和定点突变的方法,构建了一系列具有马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株env基因及其主要突变特征的嵌合克隆。... 在已有的全长感染性克隆pFD3的基础上,构建了新的低拷贝的全长克隆pLGFD3-8。按照疫苗制备过程中env基因的变化情况,采用基因替换和定点突变的方法,构建了一系列具有马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株env基因及其主要突变特征的嵌合克隆。利用这些克隆转染FDD细胞,并用逆转录酶活性检测和PCR方法确定其感染性。结果发现,在FDD细胞中传代3次后,可在细胞培养物中检测到逆转录酶活性和原病毒DNA的存在,在电镜下可以观察到典型的EIAV病毒颗粒。这一结果为进一步研究马传染性贫血病毒致病的分子机制和免疫保护机理奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 感染性马传染性贫血病毒 嵌合克隆 基因替换 定点突变 感染性克隆
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Target chromosome-segment substitution: A way to breeding by design in rice 被引量:6
4
作者 Guiquan Zhang 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2021年第3期658-668,共11页
Progress in plant breeding depends on the development of genetic resources,genetic knowledge,and breeding techniques.The core of plant breeding is the use of naturally occurring variation.At the beginning of the post-... Progress in plant breeding depends on the development of genetic resources,genetic knowledge,and breeding techniques.The core of plant breeding is the use of naturally occurring variation.At the beginning of the post-genomic era,a new concept of"breeding by design"was proposed,which aims to control all allelic variation for all genes of agronomic importance.In the past two decades,we have applied a three-step strategy for research on rice breeding by design.In the first step,we constructed a singlesegment substitution line(SSSL)library using Huajingxian 74(HJX74),an elite xian(indica)rice cultivar,as the recipient in which to assemble genes from the rice AA genome.In the second step,we identified a series of desirable genes in the SSSL library.In the third step,we designed new rice lines,and achieved the breeding goals by pyramiding target genes in the HJX74-SSSL library.This review introduces the background,concept,and strategy of breeding by design,as well as our achievements in rice breeding by design using the HJX74-SSSL platform.Our practice shows that target chromosome-segment substitution is a way to breeding by design. 展开更多
关键词 gene pool Chromosome-segment substitution Breeding by design Breeding platform RICE
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Analysis on the Relationship between Selective Pressure and Nucleotide Substitution Rate in Nucleus and Organelle Genes of Sorghum and Maize 被引量:5
5
作者 唐萍 彭程 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第4期24-29,共6页
[Objective]The aim was to research the relationship between nucleotide substitutions rate and selective pressure.[Method]Synonymous and nonsynonymous substitutions and their ratios for some sorghum and maize genes in ... [Objective]The aim was to research the relationship between nucleotide substitutions rate and selective pressure.[Method]Synonymous and nonsynonymous substitutions and their ratios for some sorghum and maize genes in nucleus and organelle genomes were analyzed by statistical method,and comparative analysis of related functional genes were carried out.[Result]The pure selective pressures of the related functional genes were similar between nucleus and chloroplast genomes,but was lower in mitochondrial genome.The significant differences of nucleotide substitution rate between sorghum and maize orthologous genes in nucleus genome,and among different functional genes in nucleus genome were mainly due to the nonsynonymous substitution difference.[Conclusion]The molecular evolutional rate of different functional genes and different lineages were influenced by selective pressure.The differences of molecular evolutional rate among nucleus,chloroplast and mitochondria genomes had no direct relationship with selective pressure. 展开更多
关键词 Nucleus gene Organelle gene Nucleotide substitution Selective pressure
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基因编辑技术在培育抗病毒水稻育种中的应用 被引量:1
6
作者 温国琴 《智慧农业导刊》 2022年第9期5-7,共3页
由于病毒因素的影响,导致水稻的产量以及结实质量难以得到保障,为此,提出基因编辑技术在培育抗病毒水稻育种中的应用研究。以CRISPR/Cas9技术为核心,通过获得的BEL突变体的基因序列,敲掉染色体中表现出相关病毒的抗性功能缺失的基因,并... 由于病毒因素的影响,导致水稻的产量以及结实质量难以得到保障,为此,提出基因编辑技术在培育抗病毒水稻育种中的应用研究。以CRISPR/Cas9技术为核心,通过获得的BEL突变体的基因序列,敲掉染色体中表现出相关病毒的抗性功能缺失的基因,并借助Cas9基因序列的优化机制,降低源基因组的敏感性,结合单碱基编辑、基因替换和基因插入3种手段对基因进行精确编辑,将抗病毒序列嵌入到水稻的基因组中,测试结果表明,基因编辑可以提高水稻的抗病毒能力,改善水稻的产量以及结实质量。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9技术 BEL突变体 Cas9基因序列 单碱基编辑 基因替换 基因插入
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广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换饱和度分析 被引量:3
7
作者 王敏 吕山 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期205-209,共5页
目的检测广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换饱和度。方法收集全国33个采样点的广州管圆线虫成虫130条,对其COX1基因全长进行PCR扩增和测序,拼接、比对后,利用DnaSP软件分析序列的碱基多样性、单倍型数量和突变位点,根据碱基颠换和碱... 目的检测广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换饱和度。方法收集全国33个采样点的广州管圆线虫成虫130条,对其COX1基因全长进行PCR扩增和测序,拼接、比对后,利用DnaSP软件分析序列的碱基多样性、单倍型数量和突变位点,根据碱基颠换和碱基转换随遗传距离增加的变化趋势判断COX1基因饱和度。结果共获得130个COX1全长序列,长度均为1 577 bp,碱基突变位点为171个,占10.8%,核苷酸多态性为0.02841。突变的空间分布无明显聚集性,均匀分布于整条DNA链上。其中单倍型39个,多态性为0.8114。单倍型两两比较发现,随遗传距离增加,广州管圆线虫的COX1基因碱基转换突变和颠换突变均呈直线上升,且转换数量多于颠换数量,增加速率分别为0.76和0.16,碱基置换未饱和;不同氨基酸密码子位点碱基置换速率差异较大,速率最大的为第三位点,其次为第一位点,最小的为第二位点。后圆线虫总科(Metastrongyloidea)7种线虫的COX1基因饱和度分析显示,遗传距离约为0.15时,碱基颠换数量开始超过转换数量。将本研究所获COX1基因序列与后圆线虫总科COX1基因综合分析,结果表明,碱基转换的比例在6%时出现平台期,而碱基颠换仍直线增加。结论广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换未饱和。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 线粒体基因 COX1 置换 饱和度
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马传染性贫血病毒基因非编码区LTR嵌合克隆的构建 被引量:2
8
作者 魏丽丽 王晓钧 +7 位作者 王盈 粱华 沈韬 李景鹏 张晓燕 相文华 邵一鸣 沈荣显 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期149-154,共6页
在已有全长感染性克隆pLGFD3 8 和pD70344 的基础上,根据马传贫弱毒疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,在LTR U3区选取特定的酶切位点对EIAV非编码区LTR基因进行了部分替换。将替换的全基因克隆转染驴胎皮肤细胞(FDD)并以驴白细... 在已有全长感染性克隆pLGFD3 8 和pD70344 的基础上,根据马传贫弱毒疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,在LTR U3区选取特定的酶切位点对EIAV非编码区LTR基因进行了部分替换。将替换的全基因克隆转染驴胎皮肤细胞(FDD)并以驴白细胞(DL)传代,用逆转录酶活性检测、RT PCR方法及Real time RT PCR验证其感染性。结果发现,其衍生病毒感染上述两种细胞均出现明显的细胞病变;细胞培养上清可检测到RT酶活性和RT PCR阳性。电镜下可见大量典型的EIAV颗粒。pLGFD9 12 嵌合克隆衍生病毒与其父本克隆衍生病毒pLGFD3 8具有相似的复制水平,pLGFD9 12嵌合克隆衍生病毒在DL细胞上复制水平略高于FDD细胞。此结果为进一步深入研究LTR对马传染性贫血病毒复制水平和毒力的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 基因替换 嵌合病毒 LTR
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Chromosomal Location of the Genes Associated with Photosynthesis of Lophopyrum elongatum (Host) A.Lve in Chinese Spring Background 被引量:1
9
作者 PENG Yuan-ying PENG Zheng-song +1 位作者 SONG Hui-xing XU Jia-shao 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第8期579-586,共8页
Researches on the relationship between photosynthesis and wheat yield have equally attracted the attention of both domestic and overseas scholars. No report has existed so far on the study of the effects of exogenous ... Researches on the relationship between photosynthesis and wheat yield have equally attracted the attention of both domestic and overseas scholars. No report has existed so far on the study of the effects of exogenous chromosomes on photosynthesis using the substitution series as materials. In this research, Triticum aestivum cv. Chinese Spring-Lophopyrum elongatum (Host) A.Loeve disomic substitution series were used as materials and flag leaves as the measuring position. And the CI-310 Portable Photosynthesis System made by CID Co. in USA was used to measure the net rate of photosynthesis of flag leaves in different developing stages and also to correlate photosynthesis with yield. Results showed that, out of the whole developing stages, at the anthesis stage the line of DS2Ee (2A) had the highest photosynthetic rate, therefore it could be used in improving process of the character of kernel number. The flag leaves of DS4Ee (4A, 4B, 4D) lines demonstrated certain high net photosynthetic rate from heading to grain filling stage, so it is valuable in the researh of promoting the yield index like 1 000-grain weight through improvement of the photosynthetic rate at grain filling stage. 展开更多
关键词 WHEAT Lophopyrum elongatum substitution photosynthetic rate gene location
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大肠杆菌链长控制基因ddsA原位替换及多基因共表达对辅酶Q_(10)合成能力的影响 被引量:2
10
作者 孔璐 傅楠 +2 位作者 叶江 吴海珍 张惠展 《食品与药品》 CAS 2009年第5期9-14,共6页
目的强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力。方法利用途径工程的基本原理,对大肠杆菌辅酶Q生物合成途径中链长控制基因ispB进行遗传操作,并强化表达该途径中多个功能基因。结果首次成功用来自Gluconobacter suboxydans的十聚异戊二烯... 目的强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力。方法利用途径工程的基本原理,对大肠杆菌辅酶Q生物合成途径中链长控制基因ispB进行遗传操作,并强化表达该途径中多个功能基因。结果首次成功用来自Gluconobacter suboxydans的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA原位替换大肠杆菌染色体上ispB基因,构建得到原位替换株JKL;同时强化表达CoQ生物合成途径的相关基因,发现在ubiCA和ddsA协同表达的重组菌pDCA/JKL中CoQ的合成能力比JKL提高了2.3倍,CoQ10合成量提高了2.5倍。检测该重组菌中ubiA的转录水平,发现其mRNA相对拷贝数是对照JKL的125倍。结论成功获得的重组大肠杆菌在降低内源性CoQ8合成能力的同时具备合成较长侧链CoQ10的能力,且通过强化表达相关基因使合成CoQ10的能力得到了提高。 展开更多
关键词 大肠杆菌 ddsA 基因替换 共表达 辅酶Q10 QRT-PCR
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Markov Model Applied to Gene Evolution
11
作者 季星来 孙之荣 《Tsinghua Science and Technology》 SCIE EI CAS 2001年第5期397-400,共4页
The study of nucleotide substitution is very important both to our understanding of gene evolution and to reliable estimation of phylogenetic relationships. In this paper nucleotide substitution is assumed to be ran... The study of nucleotide substitution is very important both to our understanding of gene evolution and to reliable estimation of phylogenetic relationships. In this paper nucleotide substitution is assumed to be random and the Markov model is applied to the study of the evolution of genes. Then a non linear optimization approach is proposed for estimating substitution in real sequences. This substitution is called the 'Nucleotide State Transfer Matrix'. One of the most important conclusions from this work is that gene sequence evolution conforms to the Markov process. Also, some theoretical evidences for random evolution are given from energy analysis of DNA replication. 展开更多
关键词 Markov process model gene evolution nucleotide substitution nucleotide state transfer matrix mutation drive pairwise alignment
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Chromosomal location of yellow rust resistance gene(s) in Triticum aestivum-Lophopyrum elongatum substitution lines
12
作者 Jianxin Ma Ronghua Zhou +1 位作者 Yuchen Dong Jizeng Jia 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1999年第4期344-348,共5页
A set of T. aestivum-L. elongatum substitution lines were studied on yellow rust resistance at seedling stage, inheritance of the resistance and esterase-5 (Est-5) analysis. The results demonstrated that L. elongatum ... A set of T. aestivum-L. elongatum substitution lines were studied on yellow rust resistance at seedling stage, inheritance of the resistance and esterase-5 (Est-5) analysis. The results demonstrated that L. elongatum carried a new yellow rust resistance gene(s), which was dominant and located on chromosome 3E of L. elongatum. The biochemical locus encoding Est-5 was also located on chromosome 3E, and was tentatively named Est-E5, which was co-segregant with the Yr gene(s) in wheat background. In addition, the transmission frequencies of chromosome 3E in 3A/3E and 3D/3E hybrids selfing were significantly higher than that of chromosome 3E in 3B/3E hybrid, which was probably due to the difference on genetic relationships among A, B, D and E genomes. 展开更多
关键词 TRITICUM aestivum-Lophopyrum elongatum substitution lines yellow RUST resistance gene location BIOCHEMICAL marker.
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单宁酶基因在黑曲霉中的同源表达 被引量:1
13
作者 李杰 岳苗苗 +3 位作者 江连洲 韦素真 姚杨 张会 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期61-65,共5页
利用PCR方法从黑曲霉基因组中扩增单宁酶基因的编码区,构建其黑曲霉表达载体pSZH-tan。通过农杆菌介导法将TAN基因导入黑曲霉中,经筛选获得将TNA基因整合到糖化酶基因的同源重组转化子。对转化子表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测... 利用PCR方法从黑曲霉基因组中扩增单宁酶基因的编码区,构建其黑曲霉表达载体pSZH-tan。通过农杆菌介导法将TAN基因导入黑曲霉中,经筛选获得将TNA基因整合到糖化酶基因的同源重组转化子。对转化子表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测,结果表明,重组蛋白分子质量约为76 ku,重组菌株单宁酶表达量为322~581μg·mL^-1,最高发酵酶活为41.12 U·mL^-1。 展开更多
关键词 单宁酶 黑曲霉 基因置换 酶活检测
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利用基因缺陷细胞模型探讨hOGG1和hMTH1的替补作用 被引量:1
14
作者 柯跃斌 吴双 +3 位作者 黄娟 袁建辉 邓平建 程锦泉 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期197-202,共6页
目的 通过建立基因缺陷细胞模型,探讨修复基因hOGG1与hMTH1在DNA氧化性损伤中的作用与关系.方法 利用慢病毒感染人胚肺成纤维细胞(HFL),分别建立hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型.将HFL细胞在100 μmol/L的H2O2中孵育12h,分别利用高... 目的 通过建立基因缺陷细胞模型,探讨修复基因hOGG1与hMTH1在DNA氧化性损伤中的作用与关系.方法 利用慢病毒感染人胚肺成纤维细胞(HFL),分别建立hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型.将HFL细胞在100 μmol/L的H2O2中孵育12h,分别利用高压液相色谱串联电化学检测技术及RT-PCR技术分析8-羟基-脱氧鸟嘌呤(7,8-dihydro-8-oxoguanine,8-oxo-dG)水平及hOGG1和hMTH1基因表达水平.结果 用高滴度慢病毒感染靶细胞后得到hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型,hOGG1 mRNA表达水平(0.09±0.02)比正常HFL细胞(1.00±0.04)下降了91%,hMTH1 mRNA表达水平(0.41±0.04)比正常HFL细胞(1.02±0.06)下降了60%;用100 μmol/L的H2O2诱导12 h,hOGG1基因缺陷细胞的hMTH1基因表达水平(1.26±0.18)相比对照组(1.01±0.07)提高了25%,hMTH1基因缺陷细胞的hOGG1基因表达水平(1.54±0.25)提高了52%;hOGG1基因缺陷细胞的8-oxo-dG水平(2.48±0.54)是对照组(0.80±0.16)的3.1倍,差异有统计学意义(P<0.01),hMTH1基因缺陷细胞(1.84±0.46)的8-oxo-dG水平是对照组(0.80±0.16)的2.3倍,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 利用基因缺陷细胞模型,发现在氧化诱导作用下,修复基因hOGG1与hMTH1在DNA损伤修复活动中可能分别表现出一定的协同性替补作用,hOGG1的替补作用强于hMTH1. 展开更多
关键词 RNA干扰 基因缺陷 DNA氧化 修复基因 生物标志 替补作用
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中国禽源新城疫病毒(NDV)流行株F和HN基因的遗传演化和变异频率
15
作者 徐怀英 黄迪海 +5 位作者 张伟 秦春芝 刘星丽 王友令 欧阳文军 秦卓明 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2933-2941,共9页
【目的】新城疫(ND)是中国流行最严重的疫病之一,对家禽业可造成巨大的经济损失,疫苗防控是控制ND的重要措施。新城疫病毒(NDV)流行株的遗传演化一直是研究NDV的焦点。本文利用分子信息学手段,通过比较近20年间NDV流行株不同基因型F和H... 【目的】新城疫(ND)是中国流行最严重的疫病之一,对家禽业可造成巨大的经济损失,疫苗防控是控制ND的重要措施。新城疫病毒(NDV)流行株的遗传演化一直是研究NDV的焦点。本文利用分子信息学手段,通过比较近20年间NDV流行株不同基因型F和HN基因的分子特征和遗传变异频率,解析免疫压力下NDV的演化规律。【方法】利用Lasergene 7.1和MEGA5.1软件,选取本实验室89株NDV分离株,结合从Gen Bank下载的364株NDV流行株以及15株NDV经典毒株的基因序列,对其进行系统发育、分子特征和替代频率分析。【结果】系统发育表明,NDV已经演化为15个基因型。一致性比较显示,NDV流行株相同基因型之间核苷酸(氨基酸)高度同源,而不同基因型之间差异较大且存在明显的氨基酸变异积累。NDV基因型的分布与时间、地域密切相关,VII d亚型为中国NDV优势流行株。为评估NDV变异的频率,以Go/GD/QY/1997株(中国较早发生的基因VII亚型)为参照,1997-2015年间NDV的F/HN基因的年平均核苷酸(氨基酸)替代率为2.31×10^(-3)(2.26×10^(-3))/3.37×10^(-3)(2.35×10^(-3))。其中,1997-2001年(未使用基因VII型疫苗)F/HN基因核苷酸年平均替代率为4.72×10^(-3)/8.28×10^(-3);2002-2015年(疫苗使用后)为1.6×10^(-3)/1.84×10^(-3),显示出基因VII型疫苗在控制NDV变异速度方面具有明显的效果。【结论】生物信息学分析证实:研制出与NDV流行毒株相匹配的新型疫苗是控制当前NDV变异的关键。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 HN基因 遗传演化 替代频率
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Conservation and variability of hepatitis B core at different chronic hepatitis stages
16
作者 Marcal Yll Maria Francesca Cortese +15 位作者 Mercedes Guerrero-Murillo Gerard Orriols Josep Gregori Rosario Casillas Carolina González Sara Sopena Cristina Godoy Marta Vila David Tabernero Josep Quer Ariadna Rando Rosa Lopez-Martinez Rafael Esteban Mar Riveiro-Barciela Maria Buti Francisco Rodríguez-Frías 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2020年第20期2584-2598,共15页
BACKGROUND Since it is currently not possible to eradicate hepatitis B virus(HBV)infection with existing treatments,research continues to uncover new therapeutic strategies.HBV core protein,encoded by the HBV core gen... BACKGROUND Since it is currently not possible to eradicate hepatitis B virus(HBV)infection with existing treatments,research continues to uncover new therapeutic strategies.HBV core protein,encoded by the HBV core gene(HBC),intervenes in both structural and functional processes,and is a key protein in the HBV life cycle.For this reason,both the protein and the gene could be valuable targets for new therapeutic and diagnostic strategies.Moreover,alterations in the protein sequence could serve as potential markers of disease progression.AIM To detect,by next-generation sequencing,HBC hyper-conserved regions that could potentially be prognostic factors and targets for new therapies.METHODS Thirty-eight of 45 patients with chronic HBV initially selected were included and grouped according to liver disease stage[chronic hepatitis B infection without liver damage(CHB,n=16),liver cirrhosis(LC,n=5),and hepatocellular carcinoma(HCC,n=17)].HBV DNA was extracted from patients’plasma.A region between nucleotide(nt)1863 and 2483,which includes HBC,was amplified and analyzed by next-generation sequencing(Illumina Mi Seq platform).Sequences were genotyped by distance-based discriminant analysis.General and intergroup nt and amino acid(aa)conservation was determined by sliding window analysis.The presence of nt insertion and deletions and/or aa substitutions in the different groups was determined by aligning the sequences with genotype-specific consensus sequences.RESULTS Three nt(nt 1900-1929,2249-2284,2364-2398)and 2 aa(aa 117-120,159-167)hyper-conserved regions were shared by all the clinical groups.All groups showed a similar pattern of conservation,except for five nt regions(nt 1946-1992,2060-2095,2145-2175,2230-2250,2270-2293)and one aa region(aa 140-160),where CHB and LC,respectively,were less conserved(P<0.05).Some group-specific conserved regions were also observed at both nt(2306-2334 in CHB and 1935-1976 and 2402-2435 in LC)and aa(between aa 98-103 in CHB and 28-30 and 51-54 in LC)levels.No differences in insertion 展开更多
关键词 Hepatitis B virus Hepatitis B core gene Next-generation sequencing genetic conservation Amino acid substitution gene therapy Small interfering RNA
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问号赖型钩端螺旋体的进化分析
17
作者 王晓峰 王参军 汪浩 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期231-234,240,共5页
对问号赖型钩端螺旋体的复制基因进行了分析,引入以S为分歧时间的概念,通过对每个同义位点和非同义位点的核苷酸替代数目的比较,并利用最小二乘法进行了函数拟合,得出在早期复制基因受到相对松的净化选择,之后选择约束力不断增强并慢慢... 对问号赖型钩端螺旋体的复制基因进行了分析,引入以S为分歧时间的概念,通过对每个同义位点和非同义位点的核苷酸替代数目的比较,并利用最小二乘法进行了函数拟合,得出在早期复制基因受到相对松的净化选择,之后选择约束力不断增强并慢慢趋于稳定. 展开更多
关键词 问号赖型钩端螺旋体 复制基因 进化 同义替代 非同义替代
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Hydrophobe-substituted bPEI derivatives: boosting transfection on primary vascular cells
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作者 Daniele Pezzoli Eleni K.Tsekoura +3 位作者 Remant Bahadur K.C. Gabriele Candiani Diego Mantovani Hasan Uludag 《Science China Materials》 SCIE EI CSCD 2017年第6期529-542,共14页
Gene therapy targeted to vascular cells repre- sents a promising approach for prevention and treatment of pathological conditions such as intimal hyperplasia, in-stent and post-angioplasty restenosis. In this context,... Gene therapy targeted to vascular cells repre- sents a promising approach for prevention and treatment of pathological conditions such as intimal hyperplasia, in-stent and post-angioplasty restenosis. In this context, polymeric non-viral gene delivery systems are a safe alternative to viral vectors but a further improvement in efficiency and cytocom- patibility is needed to improve their clinical success. Herein, a library of 24 branched polyethylenimine (bPEI) derivatives modified with hydrophobic moieties was synthesised, char- acterised and tested in vitro on primary vascular cells, aim- ing to identify delivery agents with superior transfection effi- ciency and low cytotoxicity. Low molecular weight PEIs (0.6, 1.2 and 2 kDa) were grafted with long (C18) and short (C3) aliphatic chains, featuring different unsaturation degrees and degrees of substitution. 0.6 kDa bPEI-based derivatives were generally ineffective in transfection on vascular smooth mus- cle cells (VSMCs), while among the other derivatives some promising vectors were identified. Forcing polyplexes on the cell surface by means of centrifugation invariably boosted transfection levels but increased cytotoxicity as well. Of note, a propionyl-snbstituted derivative (PEI2-PrA1, C3:0) was the most effective on both VSMCs and endothelial cells (ECs), with higher and more sustained gene expression in combi- nation with markedly lower cytotoxicity with respect to the gold standard 25 kDa bPEI. In addition, a linoleoyl-substi- tuted derivative (PEI1.2-LA6, C18:2) owing to its high effi- ciency in VSMCs and relative inefficacy in ECs, combined with tolerable cytotoxicity was proposed as a vector for spe- cific VSMCs targeting. 展开更多
关键词 non-viral gene delivery POLYETHYLENIMINE hy- drophobic substitution smooth muscle cells endothelial cells TRANSFECTION
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基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的EGFP基因定点整合表达
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作者 郗永义 吴晓洁 +4 位作者 林艳丽 钟荣斌 周艳荣 陈红星 王友亮 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第19期3601-3606,3617,共7页
目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,实现EGFP基因在CHO细胞ACTB基因座位置定点整合和表达,建立基于CRISPR/Cas9技术的外源基因定点整合和表达技术。方法:根据CHO细胞β-actin(ACTB)基因起始密码子区基因序列,设计相应CRISPR/Cas9系统,... 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,实现EGFP基因在CHO细胞ACTB基因座位置定点整合和表达,建立基于CRISPR/Cas9技术的外源基因定点整合和表达技术。方法:根据CHO细胞β-actin(ACTB)基因起始密码子区基因序列,设计相应CRISPR/Cas9系统,同时构建含有ACTB同源臂和EGFP基因的同源供体载体(donor vector),通过脂质体转染法同时转染CRISPR/Cas9和供体载体,流式分选EGFP阳性细胞,分析基因编辑技术在EGFP基因定点整合和表达方面的可行性。结果:构建了能有效切割CHO细胞ACTB基因的CRISPR/Cas9系统,筛选到EGFP定点整合至ACTB基因座并有效表达的细胞,ACTB基因缺失后由于γ-actin代偿性表达增强,ACTB缺失细胞形态和生长未受影响。结论:单纯依靠基因编辑技术可以实现1 kb以内的基因同源置换,但效率较低,如实现更大片段的外源基因置换,需借助其它实验技术。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 同源置换 定点整合
原文传递
利用单片段代换系定位水稻粒形QTL 被引量:54
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作者 曾瑞珍 Akshay TALUKDAR +1 位作者 刘芳 张桂权 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期647-654,共8页
目的水稻谷粒形状(粒长、粒宽和长宽比)是衡量稻米外观品质的重要指标之一,为更好地开展粒形分子育种,对水稻粒形QTL进行分子定位。方法以单片段代换系(SSSL)为材料构建分离群体,利用微卫星标记对控制水稻谷粒长和谷粒宽的2个粒形QTL进... 目的水稻谷粒形状(粒长、粒宽和长宽比)是衡量稻米外观品质的重要指标之一,为更好地开展粒形分子育种,对水稻粒形QTL进行分子定位。方法以单片段代换系(SSSL)为材料构建分离群体,利用微卫星标记对控制水稻谷粒长和谷粒宽的2个粒形QTL进行分子定位。结果粒宽QTLGw-8被定位于第8染色体长臂末端微卫星标记RM502与RM447之间,遗传距离均为0.3cM。在此基础上构建了覆盖Gw-8的物理图谱,RM502与RM447位于同一克隆AP005529,两者之间的物理距离为55.0kb。粒长QTLgl-3被定位于第3染色体着丝粒附近的微卫星标记RM6146和PSM377之间,遗传距离分别为1.5cM和11.0cM。结论利用单片段代换系能准确地定位水稻粒形QTL,这两个粒形QTL的定位为其克隆及稻米外观品质的分子育种奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 基因定位 粒形 单片段代换系
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