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正、反义β-1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的转染与鉴定
1
作者 严美娟 程纯 +2 位作者 李爱红 邵晓轶 顾建新 《南通大学学报（医学版）》 2005年第1期7-9,12,共4页
目的 :构建 β- 1,4 -半乳糖基转移酶 - V(β- 1,4 - Gal TV)正、反义表达质粒 ,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞 SHG- 4 4中 ,为探讨神经胶质瘤细胞表达β- 1,4 - Gal TV的生物学意义提供研究基础。方法 :构建 β- 1,4 - Gal TV表... 目的 :构建 β- 1,4 -半乳糖基转移酶 - V(β- 1,4 - Gal TV)正、反义表达质粒 ,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞 SHG- 4 4中 ,为探讨神经胶质瘤细胞表达β- 1,4 - Gal TV的生物学意义提供研究基础。方法 :构建 β- 1,4 - Gal TV表达质粒 ,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞 SHG- 4 4中 ;用 Western印迹和 Northern印迹鉴定转染情况。结果 :通过酶切鉴定和测序分析 ,实验成功构建 β- 1,4 - Gal TV表达质粒。将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞 SHG- 4 4中 ,经鉴定表明 ,转染的正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞 SHG- 4 4中的 β- 1,4 -Gal TV表达量 ,而转染反义质粒则能降低细胞中 β- 1,4 - Gal TV表达量。结论 :正、反义 β- 1,4 - Gal TV表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞 SHG- 4 4中的稳定转染和表达 ,对分析胶质瘤细胞表达β- 1,4 - Gal TV的意义如对肿瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 β-1 4-半乳糖基转移酶-v 星形胶质细胞瘤 SHG-44细胞 表达质粒
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β-1,4-半乳糖基转移酶V对胶质细胞瘤细胞SHG-44粘附的影响
2
作者 程纯 严美娟 +2 位作者 沈爱国 邵晓轶 顾建新 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2004年第6期561-564,共4页
目的 :研究 β 1,4 半乳糖基转移酶V(β 1,4 GalTV)对星形胶质瘤细胞株粘附能力的影响及其与细胞恶性行为的关系。方法 :将转染正义、反义 β 1,4 GalTV和空载体的SHG 4 4细胞株接种于包被有纤连蛋白 (FN)或层连蛋白 (LN)的板上 ,观... 目的 :研究 β 1,4 半乳糖基转移酶V(β 1,4 GalTV)对星形胶质瘤细胞株粘附能力的影响及其与细胞恶性行为的关系。方法 :将转染正义、反义 β 1,4 GalTV和空载体的SHG 4 4细胞株接种于包被有纤连蛋白 (FN)或层连蛋白 (LN)的板上 ,观察细胞粘附力的变化。采用WesternBlot的方法检测整合蛋白 β1表达变化及局部粘着斑激酶 (FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果 :在FN和LN包被的板上 ,与转空载体的SHG 4 4细胞株相比 ,转正义 β 1,4 GalTV比转反义 β 1,4 GalTV的细胞在纤连蛋白和层连蛋白上的粘附能力增高 ,β1蛋白表达水平升高 ,FAK及其酪氨酸磷酸化水平增强。结论 :β 1,4 GalTV对SHG 4 4细胞的粘附能力确有影响 ,提示 β 1,4 展开更多
关键词 SHG-44细胞 粘附能力 β-1 半乳糖 瘤细胞 胶质细胞瘤 层连蛋白 纤连蛋白 FN FAK
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正义和反义β1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的表达与鉴定
3
作者 苗增利 沈爱国 兰青 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期474-477,共4页
目的构建β1,4-半乳糖基转移酶V(β1,4-galactosyltransferase V,β-1,4-GalT-V)正、反义表达质粒,为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的生物学意义提供研究基础。方法构建β-1,4-GalT-V表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细... 目的构建β1,4-半乳糖基转移酶V(β1,4-galactosyltransferase V,β-1,4-GalT-V)正、反义表达质粒,为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的生物学意义提供研究基础。方法构建β-1,4-GalT-V表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中;用Western blot和Northern blot鉴定转染后基因表达情况。结果通过酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了β-1,4-GalT-V表达质粒。将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中,正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1,4-GalT-V表达量,而转染反义质粒则能降低细胞中β-1,4-GalT-V表达量。结论正、反义β-1,4-GalT-V表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达,对分析胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的意义以及对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响,提供了研究基础。 展开更多
关键词 β1 4-半乳糖基转移酶v 星形胶质细胞瘤 SHG-44细胞 表达质粒
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β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ在创伤性脑损伤中的表达
4
作者 张鹏举 钱宇航 +8 位作者 叶永契 尹宝新 徐涛 吴珊珊 张洁 张铭 田桂香 张莉 严美娟 《南通大学学报（医学版）》 2016年第2期104-107,F0003,共5页
目的:探讨创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后,大鼠脑组织中β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ(β-1,4-galactosyltransferaseⅤ,β-1,4-Gal TⅤ)的表达及作用机制。方法:SD大鼠30只,随机分成假手术组、TBI 1 d、3 d、5 d、7 d组(每组6... 目的:探讨创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后,大鼠脑组织中β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ(β-1,4-galactosyltransferaseⅤ,β-1,4-Gal TⅤ)的表达及作用机制。方法:SD大鼠30只,随机分成假手术组、TBI 1 d、3 d、5 d、7 d组(每组6只)。采用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测β-1,4-Gal TⅤm RNA的表达变化,Western Blot检测β-1,4-Gal TⅤ的蛋白表达变化,免疫荧光双标观察β-1,4-Gal T V与神经元标志物Neu N、星形胶质细胞标志物GFAP的共定位情况。结果:TBI后β-1,4-Gal TⅤm RNA和蛋白表达水平一致,与假手术组相比,TBI后表达水平均明显升高,并于损伤后3 d达到高峰。免疫荧光双标检测显示,β-1,4-Gal TⅤ与Neu N存在明显的共定位,与GFAP存在部分共定位。结论:β-1,4-Gal TⅤ在TBI后神经元和星形胶质细胞中均发挥一定的作用,以神经元为主。 展开更多
关键词 创伤性脑损伤 β-1 4-半乳糖基转移酶Ⅴ 星形胶质细胞 神经元
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正、反义β1,4半乳糖基转移酶-V表达质粒的构建
5
作者 严美娟 程纯 +2 位作者 邵晓轶 李爱红 张冬梅 《中国交通医学杂志》 2005年第1期5-7,共3页
目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其... 目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其克隆到 pGEM -T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将 β -1,4-GalTV全长序列克隆到 pcD NA 3 .1表达载体中。设计反义引物 ,以pGEM -β -1,4-GalTV质粒为模板 ,将PCR产物克隆到 pcDNA 3 .1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,得到了正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。 结论 :正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β -1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础。 展开更多
关键词 β1 4半乳糖基转移酶-v 逆转录-聚合酶链反应 正 、反义表达质粒
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鬼臼乙叉甙对SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ后粘附相关分子表达的影响
6
作者 程纯 严美娟 +4 位作者 沈爱国 张冬梅 邵晓轶 王惠民 顾建新 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期412-414,共3页
目的　研究人脑星形胶质细胞瘤SHG 4 4细胞表达 (β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ (beta 1,4 galactosyltransferaseⅤ ,β 1,4 GalTⅤ )后对化疗药物敏感性的影响 ,分析鬼臼乙叉甙 (VP16 )处理表达 β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ的SHG 4 4细胞... 目的　研究人脑星形胶质细胞瘤SHG 4 4细胞表达 (β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ (beta 1,4 galactosyltransferaseⅤ ,β 1,4 GalTⅤ )后对化疗药物敏感性的影响 ,分析鬼臼乙叉甙 (VP16 )处理表达 β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ的SHG 4 4细胞后其细胞粘附作用相关因子水平的变化。方法　用 12 0 μmol/L的VP16处理转染了正义、反义 β 1,4 GalTⅤ和空载体的SHG 4 4细胞 2 4h后 ,采用westernblot检测整合蛋白 β1表达变化及局部粘着斑激酶 (focaladhesionkinase,FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果　在未经VP16处理的 3株SHG 4 4细胞中 ,FAK的蛋白水平没有明显改变 ,而整合蛋白 β1的蛋白表达在转正义 β 1,4 GalTⅤ的细胞中最高 ;经VP16处理后 ,SHG 4 4细胞中整合蛋白β1的表达水平增高 ,FAK及其磷酸化水平下降。但整合蛋白β1,FAK及其磷酸化水平随细胞中 β 1,4 GalTⅤ表达水平不同而变化。 结论　VP16处理对表达不同水平的β 1,4 GalT Ⅴ的SHG 4 4胶质瘤细胞的粘附影响有所不同 ,提示胶质瘤表达 β 1,4 GalTⅤ不仅与肿瘤的恶性行为有关 ,而且与肿瘤的化疗敏感性有关。 展开更多
关键词 鬼臼乙叉甙 SHG-44 胶质瘤 肿瘤细胞 基因表达 β-1 4-半乳糖基转移酶v
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