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马疱疹病毒1型gD囊膜蛋白磷酸化位点的鉴定及其对亚细胞定位的影响
1
作者 段琦颖 贾万欣 +3 位作者 肖楚宁 屈春惠 李斌 王世民 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期70-76,共7页
为了研究蛋白质磷酸化修饰对马疱疹病毒1型(EHV-1)gD囊膜蛋白高尔基体驻留的影响,通过蛋白质修饰质谱技术鉴定gD囊膜蛋白磷酸化位点,利用Overlap PCR技术构建磷酸化位点突变型真核表达质粒pCAGGS-gD-S391A-myc及pCAGGS-gD-S391D-myc,并... 为了研究蛋白质磷酸化修饰对马疱疹病毒1型(EHV-1)gD囊膜蛋白高尔基体驻留的影响,通过蛋白质修饰质谱技术鉴定gD囊膜蛋白磷酸化位点,利用Overlap PCR技术构建磷酸化位点突变型真核表达质粒pCAGGS-gD-S391A-myc及pCAGGS-gD-S391D-myc,并转染至Hela细胞,经Western blot检测野生型及突变型gD囊膜蛋白表达情况,利用间接免疫荧光技术鉴定gD囊膜蛋白及其突变体的亚细胞定位。质谱结果显示,EHV-1 gD囊膜蛋白的S391位点发生磷酸化修饰;测序结果表明,成功构建模拟磷酸化突变型质粒pCAGGS-gD-S391D-myc及模拟去磷酸化突变型质粒pCAGGS-gD-S391A-myc;间接免疫荧光结果显示,模拟磷酸化突变体gD-S391D-myc与野生型gD-myc定位情况类似,都驻留于高尔基体;而模拟去磷酸化突变体gD-S391A-myc可转运至细胞膜。S391位点的磷酸化修饰对gD囊膜蛋白驻留于高尔基体起到重要作用,阻断该位点磷酸化修饰可促进gD囊膜蛋白转运至细胞膜,为进一步研究gD高尔基体驻留机制提供参考。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 gd囊膜蛋白 磷酸化 亚细胞定位
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荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白在BHK-21细胞亚细胞定位的影响 被引量：3
2
作者 王世民 张艳楠 +3 位作者 胡月 苏艳 冉多良 包晓玮 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1194-1201,共8页
【目的】探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响。【方法】以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFP1-C1和p Ds Red2-N1质粒,构建p Ac-GFP-gD(GFP-gD)和p Ds-... 【目的】探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响。【方法】以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFP1-C1和p Ds Red2-N1质粒,构建p Ac-GFP-gD(GFP-gD)和p Ds-gD-Red(gD-Red)重组质粒;将GFP基因插入gD基因信号肽序列之后并克隆至PVAX-1质粒,构建PVAX-S-GFP-gD’(S-GFP-gD’)重组质粒;将Flag标签序列与gD囊膜蛋白N端序列融合后并克隆至p VAX-1表达载体,构建p VAX-Flag-gD(Flag-gD)重组质粒。将4种不同重组真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过激光共聚焦显微镜对不同融合蛋白gD进行亚细胞定位。【结果】成功构建4种不同的融合蛋白gD真核表达载体;在BHK-21细胞单独表达时,不同融合蛋白gD绝大部分都定位于高尔基体,极少量定位于细胞核内。【结论】不同插入位点的荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白亚细胞定位无明显影响,这对今后研究其它蛋白亚细胞定位提供参考。 展开更多
关键词 EHV-1 gd囊膜蛋白 亚细胞定位 荧光蛋白标签
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