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FAH基因敲除克隆小型猪的制备及繁育
被引量：
2
1
作者
王莎莎
朱辉斌
+1 位作者
卢晟盛
潘登科
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2019年第5期29-37,共9页
目的供体的短缺是器官移植所面临的主要问题,制备人源化器官是解决此问题的有效途径之一。缺乏延胡索酸乙酰乙酸水解酶(fumarylacetoacetate hydrolase, FAH)会引起遗传性酪氨酸血症Ⅰ型(hereditary tyrosinemia typeⅠ, HTⅠ),致使患...
目的供体的短缺是器官移植所面临的主要问题,制备人源化器官是解决此问题的有效途径之一。缺乏延胡索酸乙酰乙酸水解酶(fumarylacetoacetate hydrolase, FAH)会引起遗传性酪氨酸血症Ⅰ型(hereditary tyrosinemia typeⅠ, HTⅠ),致使患者肝细胞凋亡,呈现出肝损伤。对猪(Sus scrofa)进行基因编辑,建立FAH基因敲除巴马小型猪,结合人干细胞将有利于人源化干细胞肝的制备。本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1, 3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除巴马小型猪的基础上,通过CRISPR/Cas9技术制备FAH基因敲除(FAH^(+/-)、FAH^(-/-))小型猪,并分析其健康与繁育状况。方法针对猪FAH基因设计单链导向RNA (single guide RNA, sgRNA)构建pX330表达载体转染巴马小型猪耳成纤维细胞(ear fibroblasts of Bama minipigs, BMEF)并进行敲除效率验证,鉴定后选择阳性细胞作为核供体,通过体细胞核移植技术制备FAH基因敲除巴马小型猪。提取仔猪的基因组DNA,经PCR测序后得到突变类型;采集5月龄FAH^(+/-)巴马小型猪血液,检测其血生化与血常规指标并观察肝组织学染色切片;当FAH^(+/-)巴马小型猪公猪性成熟后,与野生型(wild type, WT)母猪配种,以其产仔数评价繁育能力状况。结果得到了FAH^(+/-)巴马小型猪,Western blot显示FAH^(+/-)巴马小型猪的肝和肾中FAH的表达量均有所下降;FAH^(+/-)猪与野生型相比,FAH^(+/-)猪血液理化指标无显著差异;组织学切片染色发现FAH^(+/-)猪肝组织形态出现空泡样变化;与FAH^(+/-)公猪配种的野生母猪产仔数正常;FAH^(+/-)猪具有正常的健康状况和繁育能力。结论本研究制备出了FAH单基因敲除小型猪,健康状况及繁育能力正常,该单基因敲除猪为将来制备出双等位基因敲除猪与人源化肝的研究提供了良好基础。
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关键词
小型猪
基因敲除
延胡索酸乙酰乙酸水解酶(
fah
)
CRISPR/Cas9
繁育
器官移植
人源化肝
下载PDF
职称材料
转基因Fah-/-肝损伤小鼠模型的构建
2
作者
代路路
王弋
+5 位作者
龙淑娴
严家荣
刘月姝
姚欣伶
楼彩霞
邝少松
《实验动物科学》
2024年第1期18-24,共7页
目的 建立转基因Fah-/-肝损伤小鼠模型,探讨其肝损伤的机制。方法 选取SPF级C57BL/6J野生型小鼠作为WT组。取转基因Fah+/-肝损伤杂合子小鼠培育后,根据基因鉴定结果选取6~8周龄的Fah-/-纯合子小鼠24只,分为正常给予NTBC饮水组、停NTBC饮...
目的 建立转基因Fah-/-肝损伤小鼠模型,探讨其肝损伤的机制。方法 选取SPF级C57BL/6J野生型小鼠作为WT组。取转基因Fah+/-肝损伤杂合子小鼠培育后,根据基因鉴定结果选取6~8周龄的Fah-/-纯合子小鼠24只,分为正常给予NTBC饮水组、停NTBC饮水1周组和停NTBC饮水2周组,称量体质量,采血分离血清,进行肝功能生化指标检测,处死动物,取肝组织进行病理学检查、免疫组化检测Fah蛋白酶的表达及采用Western blot方法检测Fah蛋白表达。结果 经基因鉴定,成功繁育Fah-/-纯合子小鼠24只,后续用于肝损伤机制研究结果表明,停NTBC 1周组、停NTBC 2周组肝功能生化指标ALT、AST、TBIL与正常给予NTBC组比较显著升高,而ALB显著降低,差异有统计学意义。肝组织病理HE染色结果表明,WT组及正常给予NTBC组肝组织结构正常,而停NTBC组出现肝细胞肥大、坏死及炎性细胞浸润等不同程度的病变,停NTBC时间越长,肝损伤的程度越严重;肝组织免疫组化结果表明,WT组Fah蛋白酶表达为强阳性,正常给予NTBC组Fah蛋白酶表达阴性,停NTBC 1周组和停NTBC 2周组肝细胞Fah蛋白酶表达弱阳性。Fah蛋白表达结果与免疫组化结果基本符合。结论 成功建立Fah-/-小鼠模型并对其肝损伤机制研究,为后续研究提供实验数据参考。
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关键词
fah
-/-小鼠
NTBC
肝损伤
延胡索酸乙酰乙酸水解酶(
fah
)
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职称材料
题名
FAH基因敲除克隆小型猪的制备及繁育
被引量：
2
1
作者
王莎莎
朱辉斌
卢晟盛
潘登科
机构
广西大学动物科学技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
成都中科奥格生物科技有限公司
四川省医学科学院/四川省人民医院器官移植研究所
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2019年第5期29-37,共9页
文摘
目的供体的短缺是器官移植所面临的主要问题,制备人源化器官是解决此问题的有效途径之一。缺乏延胡索酸乙酰乙酸水解酶(fumarylacetoacetate hydrolase, FAH)会引起遗传性酪氨酸血症Ⅰ型(hereditary tyrosinemia typeⅠ, HTⅠ),致使患者肝细胞凋亡,呈现出肝损伤。对猪(Sus scrofa)进行基因编辑,建立FAH基因敲除巴马小型猪,结合人干细胞将有利于人源化干细胞肝的制备。本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1, 3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除巴马小型猪的基础上,通过CRISPR/Cas9技术制备FAH基因敲除(FAH^(+/-)、FAH^(-/-))小型猪,并分析其健康与繁育状况。方法针对猪FAH基因设计单链导向RNA (single guide RNA, sgRNA)构建pX330表达载体转染巴马小型猪耳成纤维细胞(ear fibroblasts of Bama minipigs, BMEF)并进行敲除效率验证,鉴定后选择阳性细胞作为核供体,通过体细胞核移植技术制备FAH基因敲除巴马小型猪。提取仔猪的基因组DNA,经PCR测序后得到突变类型;采集5月龄FAH^(+/-)巴马小型猪血液,检测其血生化与血常规指标并观察肝组织学染色切片;当FAH^(+/-)巴马小型猪公猪性成熟后,与野生型(wild type, WT)母猪配种,以其产仔数评价繁育能力状况。结果得到了FAH^(+/-)巴马小型猪,Western blot显示FAH^(+/-)巴马小型猪的肝和肾中FAH的表达量均有所下降;FAH^(+/-)猪与野生型相比,FAH^(+/-)猪血液理化指标无显著差异;组织学切片染色发现FAH^(+/-)猪肝组织形态出现空泡样变化;与FAH^(+/-)公猪配种的野生母猪产仔数正常;FAH^(+/-)猪具有正常的健康状况和繁育能力。结论本研究制备出了FAH单基因敲除小型猪,健康状况及繁育能力正常,该单基因敲除猪为将来制备出双等位基因敲除猪与人源化肝的研究提供了良好基础。
关键词
小型猪
基因敲除
延胡索酸乙酰乙酸水解酶(
fah
)
CRISPR/Cas9
繁育
器官移植
人源化肝
Keywords
minipig
gene
knickout
fumarate
acetoacetate
hydrolase
(
fah
)
CRISPR/Cas9
breeding
organ
transplantation
humanized
liver
分类号
R-33 [医药卫生]
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职称材料
题名
转基因Fah-/-肝损伤小鼠模型的构建
2
作者
代路路
王弋
龙淑娴
严家荣
刘月姝
姚欣伶
楼彩霞
邝少松
机构
广东省医学实验动物中心
出处
《实验动物科学》
2024年第1期18-24,共7页
基金
广东省科技计划项目(2019A030317015)。
文摘
目的 建立转基因Fah-/-肝损伤小鼠模型,探讨其肝损伤的机制。方法 选取SPF级C57BL/6J野生型小鼠作为WT组。取转基因Fah+/-肝损伤杂合子小鼠培育后,根据基因鉴定结果选取6~8周龄的Fah-/-纯合子小鼠24只,分为正常给予NTBC饮水组、停NTBC饮水1周组和停NTBC饮水2周组,称量体质量,采血分离血清,进行肝功能生化指标检测,处死动物,取肝组织进行病理学检查、免疫组化检测Fah蛋白酶的表达及采用Western blot方法检测Fah蛋白表达。结果 经基因鉴定,成功繁育Fah-/-纯合子小鼠24只,后续用于肝损伤机制研究结果表明,停NTBC 1周组、停NTBC 2周组肝功能生化指标ALT、AST、TBIL与正常给予NTBC组比较显著升高,而ALB显著降低,差异有统计学意义。肝组织病理HE染色结果表明,WT组及正常给予NTBC组肝组织结构正常,而停NTBC组出现肝细胞肥大、坏死及炎性细胞浸润等不同程度的病变,停NTBC时间越长,肝损伤的程度越严重;肝组织免疫组化结果表明,WT组Fah蛋白酶表达为强阳性,正常给予NTBC组Fah蛋白酶表达阴性,停NTBC 1周组和停NTBC 2周组肝细胞Fah蛋白酶表达弱阳性。Fah蛋白表达结果与免疫组化结果基本符合。结论 成功建立Fah-/-小鼠模型并对其肝损伤机制研究,为后续研究提供实验数据参考。
关键词
fah
-/-小鼠
NTBC
肝损伤
延胡索酸乙酰乙酸水解酶(
fah
)
Keywords
fah
^(-/-)mice
NTBC
liver
injury
fumarate
acetoacet
ic
acid
hydrolase
(
fah
)
分类号
Q95-3 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
FAH基因敲除克隆小型猪的制备及繁育
王莎莎
朱辉斌
卢晟盛
潘登科
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
2
转基因Fah-/-肝损伤小鼠模型的构建
代路路
王弋
龙淑娴
严家荣
刘月姝
姚欣伶
楼彩霞
邝少松
《实验动物科学》
2024
0
下载PDF
职称材料
已选择
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