-
题名猪圆环病毒2型全基因组的克隆及病毒拯救
- 1
-
-
作者
王紫凝
高章照
董沁芳
全滟平
姜永厚
-
机构
浙江理工大学生命科学学院
-
出处
《浙江理工大学学报（自然科学版）》
2018年第4期468-473,共6页
-
基金
浙江省自然科学基金项目(LY15C010006)
浙江省科技厅项目(2018C37051)
国家自然科学基金项目(31101831)
-
文摘
为构建猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型(PCV2)感染性DNA克隆,以淋巴结病料组织中分离的PCV2细胞培养适应毒株为材料,通过基因序列分析比对,在PCV2基因组序列XbaⅠ酶切位点区设计重叠引物,进行全长扩增并克隆至pMD-18T和pBluescript SK,获得载体pMD-PCV2和pBluescript SK-PCV2。将pMDPCV2重组质粒大量扩增后,用XbaⅠ切出PCV2全基因组,在体外用T4DNA连接酶使其自环化。通过脂质体法将PCV2自环化产物转染至PK15细胞,并且经15次连续传代,分别用PCR、RT-PCR和间接免疫荧光测定(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测到PCV2的复制、转录和蛋白表达。该研究成功构建具有感染性的PCV2全基因组DNA,为PCV2致病机理和基因功能研究奠定基础。
-
关键词
猪圆环病毒2型
全长基因组克隆
细胞转染
病毒拯救
-
Keywords
Porcine circovirus type 2
full length genome cloning
cell transfection
virus rescue
-
分类号
Q939.47
[生物学—微生物学]
-
