红曲霉原生质体的制备、再生及其遗传转化系统 被引量：37

1

作者 周礼红 李国琴 +1 位作者 王正祥 诸葛健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期423-428,共6页

原生质体是研究和建立真菌遗传转化系统的重要工具。为了建立原生质体介导的红曲霉遗传转化系统,考察了各种细胞壁裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉原生质体形成和再生的影响。将红曲霉分生孢子在铺有玻璃纸的平板上30℃培养30～40h收获... 原生质体是研究和建立真菌遗传转化系统的重要工具。为了建立原生质体介导的红曲霉遗传转化系统,考察了各种细胞壁裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉原生质体形成和再生的影响。将红曲霉分生孢子在铺有玻璃纸的平板上30℃培养30～40h收获的菌丝体最有利于原生质体的形成和释放。红曲霉菌丝体形成和释放原生质体最适裂解酶和酶解时间分别为:0.3%lysingenzyme、0.1%cellulase和1%snailase的酶组合,30℃作用2.5h;最适渗透压稳定剂是:1mol/LMgSO4。最适合原生质体再生的培养基为含0.6mol/L蔗糖的CM培养基。原生质体液涂布单层再生培养基的方法,再生率最高,菌株M34和N18分别为8.5%和36.4%。在PEG和CaCl2存在下,以潮霉素B为抗生素选择标记,用质粒pBC Hygro和pNL1共转化菌株M34原生质体,每微克DNA可获得100个稳定转化子。 展开更多

关键词 红曲霉 原生质体 形成与再生 遗传转化系统

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红色酵母原生质体形成和再生条件的研究 被引量：9

2

作者 曲秋皓 宁国赞 《工业微生物》 CAS CSCD 1998年第4期38-41,共4页

研究了不同渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间、温度等对红色酵母（Ｐｈａｆｆｉａｒｈｏｄｏｚｙｍａ）原生质体的形成与再生的影响。实验结果表明：使用对数生长期早期的细胞、蜗牛酶浓度１％，３０°Ｃ处理５０～６０ｍｉｎ，山梨... 研究了不同渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间、温度等对红色酵母（Ｐｈａｆｆｉａｒｈｏｄｏｚｙｍａ）原生质体的形成与再生的影响。实验结果表明：使用对数生长期早期的细胞、蜗牛酶浓度１％，３０°Ｃ处理５０～６０ｍｉｎ，山梨醇为渗透压稳定剂，有利于原生质体制备和再生。 展开更多

关键词 红色酵母 原生质体 形成 再生

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碱性脂肪酶产生菌——扩展青霉K40原生质体的制备和再生 被引量：7

3

作者 黄文树 施巧琴 吴松刚 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第3期77-82,共6页

采用 0 .6%纤维素酶加 0 .6%蜗牛酶的混合酶由扩展青霉 K4 0中获得大量的原生质体 ,并比较了菌龄、二硫苏糖醇 ( DTT)预处理方式、酶解时间、温度、 p H、培养基成分及稳定剂等因素对原生质体的形成和再生的作用 .选出制备原生质体的最... 采用 0 .6%纤维素酶加 0 .6%蜗牛酶的混合酶由扩展青霉 K4 0中获得大量的原生质体 ,并比较了菌龄、二硫苏糖醇 ( DTT)预处理方式、酶解时间、温度、 p H、培养基成分及稳定剂等因素对原生质体的形成和再生的作用 .选出制备原生质体的最适条件 :0 .6%纤维素酶 +0 .6%蜗牛酶 ,在 0 .6mol/L Na Cl+0 .3 %Ca Cl2 ,DTT预处理 0 .5h,菌龄为 1 9～ 2 0 h,p H 5.4 ,2 8℃酶解 3～ 3 .5h,原生质体产量可达 2 .3 6× 1 0 7个/ml,实现再生 ,再生率达 70 %～ 80 % . 展开更多

关键词 扩展青霉 原生质体 制备 再生 碱性脂肪酶 菌种

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蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)原生质体形成与再生条件研究 被引量：8

4

作者 涂永勤 肖崇刚 《生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期18-19,17,共3页

研究了溶菌酶浓度、酶解温度及时间、制备液的pH值、渗透压稳定剂对蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)TO-8-24-2原生质体的形成与再生的影响。TO-8-24-2菌株原生质体形成和再生的最佳条件是以SMM pH7.5作酶解缓冲液,溶菌酶浓度为0.15mg/mL,... 研究了溶菌酶浓度、酶解温度及时间、制备液的pH值、渗透压稳定剂对蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)TO-8-24-2原生质体的形成与再生的影响。TO-8-24-2菌株原生质体形成和再生的最佳条件是以SMM pH7.5作酶解缓冲液,溶菌酶浓度为0.15mg/mL,在37℃下,酶解45分钟。原生质体形成率为91.7%,再生率为13.6%。 展开更多

关键词 原生质体 形成与再生 蜡质芽孢杆菌

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安琪超级酿酒酵母原生质体制备与再生条件研究 被引量：3

5

作者 赵悦茗 杜跃超 罗晨 《酿酒科技》 北大核心 2008年第1期17-20,共4页

应用正交试验研究预处理剂、酶种类和浓度、渗透压稳定剂和酶解时间对安琪超级酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)原生质体形成率和再生的影响。结果表明,渗透压稳定剂在上述4种因素中对原生质体的形成和再生影响最大。最优组合为:使用... 应用正交试验研究预处理剂、酶种类和浓度、渗透压稳定剂和酶解时间对安琪超级酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)原生质体形成率和再生的影响。结果表明,渗透压稳定剂在上述4种因素中对原生质体的形成和再生影响最大。最优组合为:使用β-巯基乙醇作预处理剂,0.4%蜗牛酶加0.4%纤维素酶,使用0.53 M蔗糖做渗透压稳定剂,28℃酶解1 h。安琪超级酿酒酵母原生质体的形成率为98.6223%,再生率为19.9904%。 展开更多

关键词 微生物 安琪超级酿酒酵母 原生质体 制备与再生

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灰绿拟青霉U-2原生质体形成和再生条件研究 被引量：2

6

作者 戴美学 奚新伟 《生物技术》 CAS CSCD 1997年第4期34-37,共4页

发绿拟青霉U－2原生质体形成和再生的较为适宜的条件为：YD培养48～52h，用0．15％流基乙醇预处理0．5h，以pH650．6MKCl作为渗透压稳定剂，用1％真菌治壁酶于28℃酶解4h；在合1％琼脂的再生培养基上再生。

关键词 真菌 灰绿拟青霉 原生质体 形成 再生

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纤溶酶产生菌原生质体形成与再生条件的探索

7

作者 梁惠仪 郭勇 《现代食品科技》 EI CAS 2007年第5期23-25,共3页

本文研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解pH、温度、渗透压稳定剂及青霉素对枯草芽孢杆菌DC-12原生质体形成和再生的影响。确定了DC-12原生质体最佳的形成和再生条件是以改良HM高渗溶液作稳渗系统,在pH7.5、酶浓度为0.2mg/ml(活力单位为... 本文研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解pH、温度、渗透压稳定剂及青霉素对枯草芽孢杆菌DC-12原生质体形成和再生的影响。确定了DC-12原生质体最佳的形成和再生条件是以改良HM高渗溶液作稳渗系统,在pH7.5、酶浓度为0.2mg/ml(活力单位为50000U/g)和35℃的条件下酶解60min;此条件下所得原生质体形成率为96.1%;以0.6mol/LNaCl为渗透压稳定剂的DM3再生培养基中再生率为21.6%。 展开更多

关键词 原生质体 形成和再生 枯草芽孢杆菌

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SD－5菌株原生质体形成与再生条件的研究 被引量：1

8

作者 戴美学 祖爱民 《山东师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1996年第3期77-81,共5页

探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ... 探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ再活化５ｈ，以ＳＭＭｐＨ６．５作酶解缓冲液，溶菌酶浓度０．６ｍｇ／ｍｌ，３４℃处理６０ｍｉｎ． 展开更多

关键词 苏云金杆菌 原生质体 形成 再生 培养基

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钝齿棒杆菌AS1.998原生质体形成与再生条件的研究 被引量：1

9

作者 刘晓波 李宗伟 +2 位作者 丁晓兵 闫世梁 秦广雍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期55-58,共4页

研究了影响L-异亮氨酸(L-Isoleucine)产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.998原生质体形成和再生的各个因素。结果表明:菌体培养至对数生长期,0.8 U/mL青霉素G处理3 h后,1.0mg/mL的蛋清溶菌酶37℃,150 r/min酶解15 h,原生... 研究了影响L-异亮氨酸(L-Isoleucine)产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.998原生质体形成和再生的各个因素。结果表明:菌体培养至对数生长期,0.8 U/mL青霉素G处理3 h后,1.0mg/mL的蛋清溶菌酶37℃,150 r/min酶解15 h,原生质体形成率可达98.0%以上,在含8.5%蔗糖的再生完全培养基上,再生率可达20.0%～30.0%。 展开更多

关键词 钝齿棒杆菌AS1.998 原生质体 形成率与再生率 L-异亮氨酸

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链霉菌702原生质体的制备和再生条件研究

10

作者 熊姗薇 孙宇辉 涂国全 《江西科学》 2007年第6期733-736,共4页

为了确定链霉菌702菌株原生质体制备和再生较优组合条件,以链霉菌702菌株为试验材料,试验设计以单因素和多因素多水平的正交试验。在单因素试验结果中探索该菌的对数生长期为35 h^50 h,在菌丝体培养基中添加1.0%甘氨酸有利于该菌原生质... 为了确定链霉菌702菌株原生质体制备和再生较优组合条件,以链霉菌702菌株为试验材料,试验设计以单因素和多因素多水平的正交试验。在单因素试验结果中探索该菌的对数生长期为35 h^50 h,在菌丝体培养基中添加1.0%甘氨酸有利于该菌原生质体制备和再生;正交试验分别以影响该菌原生质体制备和再生的菌丝体培养时间、溶菌酶使用浓度、酶解温度和酶解时间的四因素三水平的L9(34)正交试验,试验表明:链霉菌702菌株原生质制备和再生较优组合为A2B2C3D1,即菌丝体培养时间为43 h,溶菌酶浓度为2.0 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间60 m in,原生质体的制备率和再生率分别达到96.5%和27.8%。本试验为该菌进一步进行原生质体诱变打下良好的基础。 展开更多

关键词 链霉菌702 原生质体 制备与再生 综合评分法

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野油菜黄单胞菌原生质体形成及再生条件的研究

11

作者 刘瑾 《广西医科大学学报》 CAS 1998年第1期30-32,共3页

目的：研究野油菜黄单胞菌原生质体形成和再生的最适条件及进一步进行诱变，筛选高产优质的优良菌株提供实验依据。方法：先根据培养时间，绘制出野油菜黄单胞菌的生长曲线，分别选取不同菌龄的菌体，用不同的溶菌酶浓度，不同的酶作用... 目的：研究野油菜黄单胞菌原生质体形成和再生的最适条件及进一步进行诱变，筛选高产优质的优良菌株提供实验依据。方法：先根据培养时间，绘制出野油菜黄单胞菌的生长曲线，分别选取不同菌龄的菌体，用不同的溶菌酶浓度，不同的酶作用时间、作用温度，在３种不同的渗透压稳定剂中进行处理，记录其原生质体形成率和再生率。结果：选用对数生长早中期的菌体，用１０μｇ／ｍｌ的溶菌酶液在３０℃时酶解３０ｍｉｎ，采用以蔗糖为主的渗透压稳定剂，野油菜黄单胞菌原生质体的形成和再生最佳。结论：野油菜黄单胞菌可形成原生质体并进行再生。 展开更多

关键词 野油菜黄单胞菌 原生质体 形成 再生

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黑暗链霉菌原生质体制备、再生及其DNA转化条件的研究 被引量：12

12

作者 吴胜 夏焕章 程杉 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2001年第3期213-216,共4页

利用CP培养基培养黑暗链霉菌 (Streptomycestenebrarius) 990 4,采用二级培养即首先在37℃培养 48h ,然后按 10 %的转种量转种于新鲜的培养基中 ,同时补加 2 %甘氨酸 ,2 8℃培养 2 0h ,收获的菌丝体对溶菌酶敏感。在适宜的酶解条件下可... 利用CP培养基培养黑暗链霉菌 (Streptomycestenebrarius) 990 4,采用二级培养即首先在37℃培养 48h ,然后按 10 %的转种量转种于新鲜的培养基中 ,同时补加 2 %甘氨酸 ,2 8℃培养 2 0h ,收获的菌丝体对溶菌酶敏感。在适宜的酶解条件下可形成 4 6 2× 10 9/mL原生质体 ,再生率为18%。利用经修饰的质粒DNA转化冻存的原生质体获得成功 ,转化率为 10 3～ 10 4 / μgDNA。 展开更多

关键词 黑暗链霉菌 原生质体 形成 再生 转化 DNA 尼拉霉素 安普霉素

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黑曲霉与里氏木霉原生质体形成和再生条件选择 Ⅰ.缓冲稳定剂系统及酶配比 被引量：10

13

作者 艾云灿 赵学慧 汪履绥 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期376-381,共6页

关键词 原生质体形成 再生 黑曲霉

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无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨 被引量：7

14

作者 宛晓春 李平 +1 位作者 丁霄霖 陶文沂 《应用生态学报》 CAS CSCD 1998年第4期440-442,共3页

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件，用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞，原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１，渗透压稳定剂为０．６... 根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件，用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞，原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１，渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中，酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响，可确定最佳再生条件，再生率达３０％以上． 展开更多

关键词 无花果曲霉 原生质体形成与再生

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红霉素链霉菌原生质体的形成和再生及其对紫外光的敏感性 被引量：7

15

作者 邹美云 朱卫民 +1 位作者 俞学琴 孙理晓 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期1-5,共5页

红霉素链霉菌的菌丝生长在含有0.8％甘氨酸的S培养基中,对溶菌酶的作用敏感,通过酶解,并利用一个包含10mM-MgCl_2和25mM-CaCl_2的高渗培养基能使其菌丝脱壁形成10^(10)/ml的原生质体。 原生质体能再生细胞壁,回复成为一个完整的细胞。... 红霉素链霉菌的菌丝生长在含有0.8％甘氨酸的S培养基中,对溶菌酶的作用敏感,通过酶解,并利用一个包含10mM-MgCl_2和25mM-CaCl_2的高渗培养基能使其菌丝脱壁形成10^(10)/ml的原生质体。 原生质体能再生细胞壁,回复成为一个完整的细胞。最佳条件时再生频率达90％左右。 利用紫外光对红霉素链霉菌的孢子及原生质体分别照射3分钟,其致死率分别为97.95％和98.81％。 展开更多

关键词 红霉素链霉菌 原生质体 紫外光

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黑曲霉和里氏木霉原生质体形成与再生条件选择──Ⅱ．菌龄、酶配比及酶解温度和时间的选择 被引量：5

16

作者 艾云灿 赵学慧 汪履绥 《华中农业大学学报》 CSCD 北大核心 1994年第1期55-58,共4页

用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）ＡＭＳ１１和里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响... 用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）ＡＭＳ１１和里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响。结果表明，ＡＭＳ１１和ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的４个因素的合理参数分别是：菌龄１４～１６小时和１８～２０小时；三种酶配比（纤维素酶：蜗牛酶：溶菌酶）（ｍｇ／ｍｌ）为（８：４：２）和（５：２．５：２．５）；酶解温度均为３２℃；酶解时间均为２～３小时。 展开更多

关键词 黑曲霉 里氏木霉 原生质体 再生

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褐黄孢链霉菌原生质体制备与再生 被引量：6

17

作者 王艳婷 骆健美 王敏 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期59-63,共5页

以纳他霉素产生菌株褐黄孢链霉菌SG-2002为出发菌株,考察了菌丝体培养基、甘氨酸浓度、培养时间、溶菌酶浓度、酶解温度、酶解时间及再生培养基对原生质体形成与再生的影响。原生质体形成和再生的最佳条件为S培养基中添加1%的甘氨酸,菌... 以纳他霉素产生菌株褐黄孢链霉菌SG-2002为出发菌株,考察了菌丝体培养基、甘氨酸浓度、培养时间、溶菌酶浓度、酶解温度、酶解时间及再生培养基对原生质体形成与再生的影响。原生质体形成和再生的最佳条件为S培养基中添加1%的甘氨酸,菌丝体培养30h,溶菌酶浓度40mg/(g菌体干重),酶解温度30℃,酶解时间60min。褐黄孢链霉菌的原生质体形成量达到4.0×106个/mL,再生培养基选择R5′培养基,再生率为9.0%。 展开更多

关键词 褐黄孢链霉菌 原生质体形成 原生质体再生 再生率

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林肯链霉菌原生质体的形成、再生及其影响因素 被引量：4

18

作者 朱建伟 何雯 +2 位作者 刘颐屏 朱宝泉 童村 《医药工业》 CAS 1987年第3期108-112,共5页

林肯链霉菌林肯变种(Streptomyces lincolnensis var.lincolnensis)在含有0.5%甘氨酸的 S培养基上生长的菌丝体对溶菌酶敏感,酶解后产生10~8/ml 的原生质体。在适当的条件下可有20%的原生质体再生成细胞。原生质体在4℃贮存20h 后再生... 林肯链霉菌林肯变种(Streptomyces lincolnensis var.lincolnensis)在含有0.5%甘氨酸的 S培养基上生长的菌丝体对溶菌酶敏感,酶解后产生10~8/ml 的原生质体。在适当的条件下可有20%的原生质体再生成细胞。原生质体在4℃贮存20h 后再生活力下降至原来的20%以下。原生质体在紫外光照射下比孢子更易发生突变。 展开更多

关键词 原生质体形成及再生 林肯链霉菌

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洛伐他汀产生菌土曲霉原生质体的制备与再生 被引量：5

19

作者 蔡晶晶 李季伦 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期1-5,共5页

报道了产生降血脂药物洛伐他汀 (lovastatin)的土曲霉 (Asp ergillus terreus)原生质体的制备与再生条件及原生质体形成过程。结果表明用溶壁酶 5mg.m L-1、Zymolyase2 0 T2 .5mg.m L-1和蜗牛酶 2 .5mg.m L-1配制的混合酶液 ,可制备出... 报道了产生降血脂药物洛伐他汀 (lovastatin)的土曲霉 (Asp ergillus terreus)原生质体的制备与再生条件及原生质体形成过程。结果表明用溶壁酶 5mg.m L-1、Zymolyase2 0 T2 .5mg.m L-1和蜗牛酶 2 .5mg.m L-1配制的混合酶液 ,可制备出土曲霉原生质体 ;其最佳酶解温度为 34℃ ,作用 5h。 展开更多

关键词 土曲霉 洛伐他汀 原生质体 制备 再生

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康氏木霉B-7和黑曲霉X-15原生质体的形成和再生 被引量：2

20

作者 王景林 殷勤燕 +1 位作者 陈宗泽 袁毅 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期19-23,共5页

研究了康氏木霉B－7和黑曲霉X－152株纤维素酶高产菌株的原生质体制备与再生。结果表明，采用纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合酶液，可成功地制备2株真菌的原生质体。其中，B－7以这3种酶的配比6：5：2为最佳，X－15以8：4：2为最佳。... 研究了康氏木霉B－7和黑曲霉X－152株纤维素酶高产菌株的原生质体制备与再生。结果表明，采用纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合酶液，可成功地制备2株真菌的原生质体。其中，B－7以这3种酶的配比6：5：2为最佳，X－15以8：4：2为最佳。原生质体形成的缓冲液系统均以0．2mol/L，pH6．0磷酸盐缓冲液为宜，渗透压稳定剂则分别以0．6mol/LNaCl和0．6mol/L蔗糖为宜。以菌龄18h（B-7）和16h（X－15）2株真菌的菌丝体，在37℃下酶解90min可获得最适量的原生质体，产量分别达9×106个／ml和1．9×107个／ml，且其再生率也较高，均达95％左右。 展开更多

关键词 康氏木霉 黑曲霉 原生质体形成和再生

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