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土拉弗朗西斯氏菌LAMP快速检测方法的应用
被引量：
4
1
作者
李子微
邓仲良
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期212-217,共6页
旨在应用环介导恒温扩增技术(LAMP)检测土拉弗朗西斯氏菌。针对土拉弗朗西斯氏的FopA基因设计LAMP引物,优化LAMP反应条件,并对其特异性、灵敏度进行评价。结果显示,(1)对12种细菌和蜱的DNA(含大量假单胞菌属细菌)进行LAMP扩增,仅土拉弗...
旨在应用环介导恒温扩增技术(LAMP)检测土拉弗朗西斯氏菌。针对土拉弗朗西斯氏的FopA基因设计LAMP引物,优化LAMP反应条件,并对其特异性、灵敏度进行评价。结果显示,(1)对12种细菌和蜱的DNA(含大量假单胞菌属细菌)进行LAMP扩增,仅土拉弗朗西斯氏菌发生了扩增反应;(2)土拉弗朗西斯氏菌纯培养物检出限为4.9×102 pg/mL;克隆株质粒检出限为10 copies/μL,低于普通PCR的最低检出值1×103 copies/μL;(3)土壤模拟样本检出限为44 CFU/g;(4)和进口荧光定量PCR试剂对比检测24份(8个稀释度)土拉弗朗西斯氏菌污染土壤样本,在灵敏度范围内,均能准确检测。LAMP技术检测土拉弗朗西斯氏菌特异性强、灵敏度高、高效,对土拉热的病原学诊断具有应用价值。
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关键词
土拉弗朗西斯氏菌
fopa
基因
环介导恒温扩增技术
快速检测
下载PDF
职称材料
TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测土拉弗朗西斯菌
被引量：
3
2
作者
赵素慧
王春晖
+6 位作者
周莹
韦耀
韩桂圆
钮红岺
赵卫
张其威
万成松
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期602-606,共5页
目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制...
目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制作定量标准曲线,并以合成fopA基因为模板,PF、PR为引物,研究其灵敏度、特异性和准确性。结果构建了含fopA基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在103～107拷贝数之间有较好的线性关系。灵敏度试验表明,该方法可检测到30.6个拷贝数的重组质粒,比普通PCR灵敏度高;特异性试验表明,能选择性检测土拉弗朗西斯菌,而与其他病原菌无交叉反应,与普通菌落PCR结果一致;重复性试验表明,拷贝数为3.06×106样品5次平行试验,标准差为0.201,变异系数为0.88%。结论本研究建立了TaqMan探针QF-PCR快速检测技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于快速、实时、定量检测土拉弗朗西斯菌,为快速检测生物战剂级微生物建立了一种人工合成特异基因TaqMan探针实时荧光定量PCR新方法。
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关键词
土拉弗朗西斯菌
TAQMAN探针
fopa
基因
荧光定量PCR
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职称材料
题名
土拉弗朗西斯氏菌LAMP快速检测方法的应用
被引量：
4
1
作者
李子微
邓仲良
机构
南华大学公共卫生学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期212-217,共6页
基金
湖南省教育厅重点项目(15A165)
衡阳市重点实验室项目(2018KJ110)
文摘
旨在应用环介导恒温扩增技术(LAMP)检测土拉弗朗西斯氏菌。针对土拉弗朗西斯氏的FopA基因设计LAMP引物,优化LAMP反应条件,并对其特异性、灵敏度进行评价。结果显示,(1)对12种细菌和蜱的DNA(含大量假单胞菌属细菌)进行LAMP扩增,仅土拉弗朗西斯氏菌发生了扩增反应;(2)土拉弗朗西斯氏菌纯培养物检出限为4.9×102 pg/mL;克隆株质粒检出限为10 copies/μL,低于普通PCR的最低检出值1×103 copies/μL;(3)土壤模拟样本检出限为44 CFU/g;(4)和进口荧光定量PCR试剂对比检测24份(8个稀释度)土拉弗朗西斯氏菌污染土壤样本,在灵敏度范围内,均能准确检测。LAMP技术检测土拉弗朗西斯氏菌特异性强、灵敏度高、高效,对土拉热的病原学诊断具有应用价值。
关键词
土拉弗朗西斯氏菌
fopa
基因
环介导恒温扩增技术
快速检测
Keywords
Francisella tularensis
gene
fopa
LAMP
rapid detection technology
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
下载PDF
职称材料
题名
TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测土拉弗朗西斯菌
被引量：
3
2
作者
赵素慧
王春晖
周莹
韦耀
韩桂圆
钮红岺
赵卫
张其威
万成松
机构
南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期602-606,共5页
基金
广东省社会发展领域科技计划项目(2010B031000005)
广州市科技亚运专项(2010U1-E00591)~~
文摘
目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制作定量标准曲线,并以合成fopA基因为模板,PF、PR为引物,研究其灵敏度、特异性和准确性。结果构建了含fopA基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在103～107拷贝数之间有较好的线性关系。灵敏度试验表明,该方法可检测到30.6个拷贝数的重组质粒,比普通PCR灵敏度高;特异性试验表明,能选择性检测土拉弗朗西斯菌,而与其他病原菌无交叉反应,与普通菌落PCR结果一致;重复性试验表明,拷贝数为3.06×106样品5次平行试验,标准差为0.201,变异系数为0.88%。结论本研究建立了TaqMan探针QF-PCR快速检测技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于快速、实时、定量检测土拉弗朗西斯菌,为快速检测生物战剂级微生物建立了一种人工合成特异基因TaqMan探针实时荧光定量PCR新方法。
关键词
土拉弗朗西斯菌
TAQMAN探针
fopa
基因
荧光定量PCR
Keywords
Francisella tularensis
TaqMan probe
fopa
gene
QF-PCR
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
土拉弗朗西斯氏菌LAMP快速检测方法的应用
李子微
邓仲良
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
4
下载PDF
职称材料
2
TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测土拉弗朗西斯菌
赵素慧
王春晖
周莹
韦耀
韩桂圆
钮红岺
赵卫
张其威
万成松
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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职称材料
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