银杏叶总黄酮延缓细胞衰老的实验研究 被引量：14

1

作者 宋小平 陈志武 +1 位作者 方安宁 方佩斐 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期100-102,共3页

目的:研究银杏叶总黄酮(total flavone of Ginkgo biloba,FG)延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的作用。方法:采用含FG的大鼠血清对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,观察2BS细胞寿命;采用荧光实时定量PCR法检测P16基因mRNA的表... 目的:研究银杏叶总黄酮(total flavone of Ginkgo biloba,FG)延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的作用。方法:采用含FG的大鼠血清对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,观察2BS细胞寿命;采用荧光实时定量PCR法检测P16基因mRNA的表达。结果:银杏叶总黄酮(FG)能够延长2BS细胞的传代寿命,下调2BS细胞P16基因mRNA的表达。结论:银杏叶总黄酮可通过抑制P16基因表达而延缓细胞衰老。 展开更多

关键词 银杏叶总黄酮 细胞衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞 荧光实时定量pcr

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实时荧光定量PCR快速鉴定短乳杆菌 被引量：8

2

作者 赵敏 潘劲草 +3 位作者 叶榕 孟冬梅 汪皓秋 孙培龙 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第2期209-210,共2页

目的:建立鉴定短乳杆菌的实时荧光定量PCR法。方法:根据GanBank登录的乳酸杆菌序列,以gyrB基因为靶目标设计引物和探针,对啤酒中分离到的6株乳酸杆菌进行实验,并对其中一个短乳杆菌样本作定量检测。结果:实时荧光定量PCR对短乳杆菌可产... 目的:建立鉴定短乳杆菌的实时荧光定量PCR法。方法:根据GanBank登录的乳酸杆菌序列,以gyrB基因为靶目标设计引物和探针,对啤酒中分离到的6株乳酸杆菌进行实验,并对其中一个短乳杆菌样本作定量检测。结果:实时荧光定量PCR对短乳杆菌可产生特异扩增信号,对其他乳酸杆菌无响应。标准曲线的相关系数为0.97739,测得短乳杆菌样本浓度为15635拷贝/m l。结论:实时荧光定量PCR是一种快速、特异、灵敏检测短乳杆菌的方法。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr 短乳杆菌 快速鉴定

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电针足三里等穴对糖尿病胃轻瘫大鼠肠道菌群的影响 被引量：4

3

作者 黎晓宇 肖小娟 +3 位作者 赵莎彤 张天华 肖乐 彭艳 《辽宁中医杂志》 CAS 2023年第5期232-236,I0003,I0004,共7页

目的观察电针“足三里”“梁门”“三阴交”对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastro paresis,DGP)大鼠胃肠动力、肠道菌群结构及特定菌种含量的影响。方法42只SD大鼠雌雄各半随机分为空白对照组、模型组、胃复安组、电针组。按55 mg/kg剂量,采... 目的观察电针“足三里”“梁门”“三阴交”对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastro paresis,DGP)大鼠胃肠动力、肠道菌群结构及特定菌种含量的影响。方法42只SD大鼠雌雄各半随机分为空白对照组、模型组、胃复安组、电针组。按55 mg/kg剂量,采用一次性腹腔注射由柠檬酸-柠檬酸钠配制成2%浓度0.1 mmol/L链脲佐菌素结合高脂高糖不规律饮食制备DGP模型。胃复安组以1 mL/100 gL的剂量予1.7%浓度的胃复安药液灌胃,电针组取同侧“足三里”“梁门”“三阴交”电针治疗。三诺血糖仪测量大鼠血糖、酚红灌胃测量大鼠胃排空率及小肠推进率,16S rRNA高通量测序技术检测肠道菌群结构多样性,实时荧光定量PCR技术测定肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌的含量。结果造模前,各组血糖值差异无统计学意义(P>0.05)。造模后,与空白对照组相比,模型组血糖值显著上升(P<0.01),胃排空率与小肠推进率显著降低(P<0.01),β多样性显示空间距离较远,各组间门水平相对丰度和特定菌种数量差异无统计学意义(P>0.05);电针组和胃复安组血糖值显著上升(P<0.01),胃排空率与小肠推进率显著降低(P<0.01),β多样性显示空间距离较近,各组间门水平相对丰度和特定菌种数量差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,电针组和胃复安组血糖值显著下降(P<0.05),胃排空率与小肠推进率显著升高(P<0.05),β多样性显示空间距离较远,各组间门水平相对丰度和特定菌种数量差异无统计学意义(P>0.05);与胃复安组相比,电针组血糖值、胃排空率与小肠推进率均差异无统计学意义(P>0.05),β多样性空间距离较近,各组间门水平相对丰度和特定菌种数量差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针“足三里”等穴能降低DGP大鼠血糖水平、提升DGP大鼠胃肠推进率,可能与部分调控肠道菌群的结构有关。 展开更多

关键词 糖尿病胃轻瘫 电针 胃肠动力 肠道菌群 高通量测序 荧光实时定量pcr

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主动外排泵外膜蛋白编码基因hefA在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用 被引量：6

4

作者 刘志强 郑鹏远 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第16期1751-1756,共6页

目的:研究幽门螺杆菌(Hpylori)分离株的多重耐药机制.方法:用氯霉素对临床分离株Hpylori和标准株Hpylori进行体外诱导,琼脂稀释法测定诱导后菌株对甲硝唑、四环素、琥乙红霉素、环丙沙星和青霉素G的耐药性,从而筛选出多重耐药株;实时定... 目的:研究幽门螺杆菌(Hpylori)分离株的多重耐药机制.方法:用氯霉素对临床分离株Hpylori和标准株Hpylori进行体外诱导,琼脂稀释法测定诱导后菌株对甲硝唑、四环素、琥乙红霉素、环丙沙星和青霉素G的耐药性,从而筛选出多重耐药株;实时定量PCR检测多重耐药株和敏感株中编码主动外排泵外膜蛋白的结构基因hefA的mRNA水平.通过构建hefA基因敲除株,测定敲除前后菌株对10种抗生素的敏感性.PCR扩增20株Hpylori临床分离株主动外排泵结构基因hefA和hefC.结果:经氯霉素诱导后,筛选出的耐药菌株均表现出相似的多重耐药性,6株多重耐药株hefA基因mRNA水平显著高于敏感株(5.8466±2.9370vs2.6356±1.7245,P=0.033);成功构建了hefA基因敲除株(△HpLZ1026),△HpLZ1026对4种抗生素的敏感性明显增加;所有20株临床分离株中均检测出hefA和hefC基因,未发现hefABC基因缺失株.结论:主动外排系统hefA基因高表达导致体外人工诱导Hpylori多重耐药的产生;hefABC基因在Hpylori中普遍存在,且在Hpylori多药耐药机制中起重要作用. 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 多重耐药 外排泵 实时定量pcr 基因敲除

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用原代细胞培养和人全基因表达谱芯片筛选鼻咽癌差异表达基因 被引量：4

5

作者 李瑞平 邵建永 +4 位作者 邓玲 曾木圣 宋立兵 李满枝 吴秋良 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1156-1160,共5页

目的利用细胞的原代培养技术及人全基因表达谱芯片技术初步筛选出鼻咽癌差异表达基因,以发现与鼻咽癌发生、发展相关的新的候选基因。方法分别用1例鼻咽癌细胞株C666及5例鼻咽癌培养出的原代细胞和3例鼻咽正常上皮的原代细胞,进行基因... 目的利用细胞的原代培养技术及人全基因表达谱芯片技术初步筛选出鼻咽癌差异表达基因,以发现与鼻咽癌发生、发展相关的新的候选基因。方法分别用1例鼻咽癌细胞株C666及5例鼻咽癌培养出的原代细胞和3例鼻咽正常上皮的原代细胞,进行基因表达谱分析,并以荧光定量PCR及免疫组织化学验证芯片结果。结果原代培养的鼻咽癌细胞和鼻咽正常上皮细胞通过细胞角蛋白的免疫细胞化学染色、EBER1原位杂交和EBV-DNA荧光定量PCR证实;鼻咽癌原代细胞和鼻咽正常上皮原代细胞的基因表达谱有显著差异;4例以上共同表达的差异基因有493个,包括上调基因264个,下调基因229个。荧光定量PCR及免疫组织化学结果和芯片结果一致。结论用原代培养细胞及人类全基因组基因芯片构建基因表达谱能够准确、高效地筛选出鼻咽癌相关的差异表达基因,该基因表达谱的建立为研究鼻咽癌分子生物学机制、鼻咽癌的分子分型和分子诊断提供了重要的分子依据。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 寡核苷酸芯片 基因表达谱 原代细胞培养 荧光定量pcr

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应用实时荧光定量PCR技术分析UGT1A1基因启动子区A(TA)_nTAA多态性 被引量：4

6

作者 徐羽中 陈群蓉 +1 位作者 孙顺昌 彭运生 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第13期1806-1808,共3页

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶1A1(UGT1A1)基因启动子区A(TA)_nTAA序列多态性的方法。方法以16例Gilbert综合征患者和66例健康对照个体为研究对象,抽提基因组DNA,通过DNA测序确定UGT1A1基... 目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶1A1(UGT1A1)基因启动子区A(TA)_nTAA序列多态性的方法。方法以16例Gilbert综合征患者和66例健康对照个体为研究对象,抽提基因组DNA,通过DNA测序确定UGT1A1基因启动子区A(TA)_nTAA序列多态性。同时,设计1对引物和2条TaqMan MGB探针,2条探针的5′端分别标记FAM和VIC染料,探针的3′端则均以MGB修饰。使用实时荧光定量PCR方法扩增并检测研究对象的UGT1A1基因启动子区A(TA)_nTAA多态性序列,与测序法比较,验证实时荧光定量PCR方法的灵敏度和特异度。结果应用荧光定量PCR技术检测,16例Gilbert综合征患者的UGT1A1基因启动子区A(TA)_nTAA多态性序列均为A(TA)7TAA,46例健康对照个体A(TA)_nTAA多态性序列为A(TA)6TAA,其余20例健康对照个体A(TA)_nTAA多态性序列为A(TA)6TAA/A(TA)7TAA杂合多态性。上述结果与DNA测序结果完全一致。结论通过实时荧光定量PCR技术检测UGT1A1基因启动子区A(TA)_nTAA序列多态性的方法具有灵敏度高、特异度强及操作简单等特点,可在临床推广应用。 展开更多

关键词 UGT1A1基因 多态性 实时荧光定量pcr

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雏鸡感染鸡白痢沙门菌后禽β-防御素6和鸡Toll样受体15在肠道转录与定位研究 被引量：4

7

作者 王燕 周秀红 +3 位作者 祁克宗 涂健 刘红梅 潘孝成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1711-1717,共7页

旨在分析雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,禽β-防御素6(AvBD6)和鸡Toll样受体15(ChTLR15)在小肠内的分布及表达规律。本研究用鸡白痢沙门菌感染14日龄的雏鸡,感染后不同时间点采取雏鸡的小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),利用实时荧光定量RT-PC... 旨在分析雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,禽β-防御素6(AvBD6)和鸡Toll样受体15(ChTLR15)在小肠内的分布及表达规律。本研究用鸡白痢沙门菌感染14日龄的雏鸡,感染后不同时间点采取雏鸡的小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),利用实时荧光定量RT-PCR和原位杂交方法,检测AvBD6和ChTLR15在小肠组织内的定位和mRNA的转录水平变化。结果显示,雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,AvBD6和ChTLR15在各肠段组织中均有转录,其中在十二指肠相对转录量最高,在0~24h内呈上升趋势,24~48h相对转录量呈下降趋势,在24h的转录量极显著高于0和6h(P<0.01),且AvBD6在24h的转录量显著高于12h(P<0.05)。AvBD6和ChTLR15mRNA在小肠内均有不同程度的分布,其主要分布在肠绒毛的中央乳糜管中,在十二指肠中荧光信号最强。结果表明,雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,AvBD6和ChTLR15mRNA在鸡小肠中的分布和表达具有一定的规律性,并参与肠道免疫调节功能。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌 荧光定量RT-pcr 原位杂交 禽β-防御素6 鸡Toll样受体15

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一种基于荧光qPCR检测新型冠状病毒核酸的优化反应体系的建立及相关测试 被引量：3

8

作者 李学龙 刘军花 +3 位作者 刘茜阳 于琳 吴珊珊 尹秀山 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期732-739,共8页

为实时并快速地检出SARS-CoV-2冠状病毒RNA,对基于荧光定量聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)的反应体系进行了优化。结果表明,按照本实验提供的方法操作后,检测SARS-CoV-2冠状病毒所用的RNA样本的最小浓度稀释度可调至1/10... 为实时并快速地检出SARS-CoV-2冠状病毒RNA,对基于荧光定量聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)的反应体系进行了优化。结果表明,按照本实验提供的方法操作后,检测SARS-CoV-2冠状病毒所用的RNA样本的最小浓度稀释度可调至1/10000(初始值设为10ng/μL)。且用于检测COVID-19临床阳性样本所测得循环值(Cycle threshold,Ct)均低于35或40。其灵敏性测试结果也表明该方法的敏感性较好。同时在同等条件下,与目前市场上的COVID-19试剂盒的检测结果基本一致,并且检测循环数缩短2个单位。因此,本实验所建立的体系适用于前期临床诊断的筛查工作,为在医学上实现快速诊断提供了工具。 展开更多

关键词 新型冠状病毒感染的肺炎-2019(COVID-19) 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2) N基因 ORF1a基因 荧光实时定量pcr

原文传递

荧光实时定量PCR定量水体中日本血吸虫尾蚴方法的建立 被引量：3

9

作者 王本敬 王文波 +5 位作者 周霞 陈艳勤 张静 刘晨晨 梁幼生 诸葛洪祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1075-1081,共7页

目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核... 目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。 展开更多

关键词 日本血吸虫 尾蚴 荧光实时定量pcr 预警

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荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控效果分析 被引量：3

10

作者 崔方瑞 《中国医疗器械信息》 2021年第3期134-135,共2页

目的:探究流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法的质控效果分析。方法:于2017年3月~2018年3月,选取本院收治的流感病例576例,全部患者都借助实时荧光定量PCR法检测流感病毒核酸,并对阳性率与阳性样本类型进行检测与总结。结果:全部... 目的:探究流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法的质控效果分析。方法:于2017年3月~2018年3月,选取本院收治的流感病例576例,全部患者都借助实时荧光定量PCR法检测流感病毒核酸,并对阳性率与阳性样本类型进行检测与总结。结果:全部病例576例经流感病毒核酸检测有136例呈阳性,阳性率23.61%;所有阳性样本中,甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分别有117例、9例、10例,所占比例分别为20.31%、1.56%、1.74%。结论:流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法检测具有科学性与有效性的特点,可快速、准确地检测流感病毒核酸,对检测结果予以质量控制,可使检测结果准确性进一步提高,临床价值显著。 展开更多

关键词 流感病毒核酸 荧光实时定量pcr法 质控效果

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荧光实时定量PCR检测铜绿假单胞菌外膜蛋白oprI基因的标准品的构建 被引量：2

11

作者 钟礼立 张兵 +4 位作者 贺蓉 林小娟 张爱民 蔡瑞云 段贞 《实用预防医学》 CAS 2006年第2期265-268,共4页

目的构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprI基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量。方法以铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD 18-T Vector连接并转化到大肠杆菌中。用氨卞青霉素筛选出... 目的构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprI基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量。方法以铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD 18-T Vector连接并转化到大肠杆菌中。用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性。根据OD值确定浓度,制备FQ-PCR梯度浓度参考标准品,做出标准曲线,检测各样品菌菌量。结果铜绿假单胞菌oprI基因的目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得很好的标准曲线(相关系数0.994),成功检测了铜绿假单胞菌标准菌株、培养株的菌量,而大肠杆菌及阴性对照无扩增。结论成功构建FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprI基因的定量参考标准,荧光实时定量法可以快速检测铜绿假单胞菌。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 oprI基因 荧光实时定量pcr 标准品

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荧光实时定量PCR检测单核李斯特菌方法学建立及应用 被引量：10

12

作者 孙晞 吴建中 +2 位作者 张宁 欧仕益 唐书泽 《实用预防医学》 CAS 2005年第3期496-497,共2页

目的建立检测单核细胞增多性李斯特菌的荧光定量PCR方法,并利用此方法检测人工污染的牛奶中单增李斯特菌菌量。方法选择单增李斯特菌特异性的基因ListeriolysinO基因为靶目标设计引物,采用煮沸法抽提纯单增李斯特菌株(1/2a)DNA,建立SYBR... 目的建立检测单核细胞增多性李斯特菌的荧光定量PCR方法,并利用此方法检测人工污染的牛奶中单增李斯特菌菌量。方法选择单增李斯特菌特异性的基因ListeriolysinO基因为靶目标设计引物,采用煮沸法抽提纯单增李斯特菌株(1/2a)DNA,建立SYBRGREEN实时定量PCR检测体系。结果定量PCR对李斯特菌可产生特异扩增信号,对其他菌(大肠杆菌)无响应。标准曲线的相关系数为0.9521。最小检菌量约为100个菌落形成单位/反应体系。在人为污染牛奶检测中,与传统细菌计数方法结果相比,相关系数为0.839。结论实时定量PCR是一种快速、灵敏的定量检测单增李斯特菌的方法,可用于牛奶样品的检测。 展开更多

关键词 荧光实时定量pcr 单核细胞增多性李斯特菌

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两个育性相关基因在BNS和YS小麦温敏雄性不育系中的表达差异分析 被引量：3

13

作者 张芳凝 李桂冬 +3 位作者 范晓静 王震 张淼 马翎健 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期368-372,共5页

为研究雄性不育相关基因TA1和TA2在BNS和YS小麦温敏雄性不育系732A花粉发育时期的表达特点,探讨这2个育性相关基因与温敏雄性不育小麦育性转换的联系,本研究利用荧光实时定量PCR方法,在BNS和YS型不育系732A花药发育四分体期、单核期、... 为研究雄性不育相关基因TA1和TA2在BNS和YS小麦温敏雄性不育系732A花粉发育时期的表达特点,探讨这2个育性相关基因与温敏雄性不育小麦育性转换的联系,本研究利用荧光实时定量PCR方法,在BNS和YS型不育系732A花药发育四分体期、单核期、二核期和三核期定量检测基因TA1和TA2的mRNA表达水平。结果表明:(1)在732A和BNS花粉发育四分体时期至二核期,基因TA1相对表达量上调,在三核期相对表达量下降;(2)基因TA2相对表达量在BNS花粉发育的四分体时期至二核期逐渐下降,三核期上升;在732A花粉发育4个时期中的相对表达量变化刚好相反;(3)在BNS和732A花粉发育二核期,基因TA1和TA2均表现极值,推测二核期可能为BNS和YS型小麦温敏雄性不育系花粉发育最敏感时期;(4)在不育系BNS和732A花粉发育过程中,基因TA1的相对表达量变化幅度比TA2的高。推测TA1对不育系BNS和732A花粉败育影响程度强于TA2;(5)基因TA1和TA2相对表达量在BNS的花粉发育时期表达趋势相反,推测其对BNS花粉败育影响表现为拮抗作用,且2个基因不连锁;在732A花粉发育时期表达趋势相同,推测其对不育系732A花粉败育影响表现为协同作用。 展开更多

关键词 小麦 TA1 TA2 BNS 732A 荧光实时定量pcr

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一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立 被引量：129

14

作者 张驰宇 徐顺高 黄新祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期883-888,共6页

为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成... 为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法. 展开更多

关键词 荧光实时定量RT-pcr 相对定量 绝对定量 标准曲线 mRNA定量 斜率

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牛呼吸疾病综合征七病原联合检测多重qPCR方法的建立 被引量：2

15

作者 徐恩红 祁明普 +5 位作者 项志杰 胡长敏 陈颖钰 陈建国 陈曦 郭爱珍 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期38-47,共10页

为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率,以牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)ompH基因、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)gcp基因、牛传染性鼻气管炎病... 为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率,以牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)ompH基因、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)gcp基因、牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gB基因、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)以及牛副流感病毒(bovine parainfluenza virus type,BPIV) 3型a和c基因型(BPIV-3a,-3c)的N基因等为检测靶标,分别设计特异性引物和Taqman探针,通过优化反应条件,采用3管7联的组合方式建立了7种病原体的多联实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法仅对本试验的7种病原有特异性反应,与其他常见病原无交叉反应。对M.b、P.m、M.h、IBRV、BRSV、BPIV-3a和BPIV-3c质粒标准品的最低检测限分别为102、102、101、102、102、102和101拷贝/μL。组内变异系数小于2.5%,组间变异系数小于5.5%。平行应用该方法和常规PCR方法对临床采集的115份有呼吸道症状牛的鼻拭子进行检测,P.m阳性率36.65%,M.b阳性率27.83%,M.h阳性率25.22%,IBRV阳性率11.30%,BPIV-3c阳性率8.57%,BRSV阳性率0.95%;其中混合感染率为26.1%。共检测到11种混合感染模式,主要由M.b与其他病原体的混合感染,占72.7%(8/11);M.b/P.m混合感染的检出率最高,占60%(18/30);M.b、P.m、M.h在混合感染中出现率排前三,其占比分别为73.3%(22/30)、73.3%(22/30)和43.3%(13/30);其次为IBRV,占26.7%(8/30);BPIV-3c占13.3%(4/30)。以上结果表明,该方法具有较高的分析敏感性和特异性,可用于牛呼吸疾病综合征多病原感染的联合检测。 展开更多

关键词 多联实时荧光定量pcr方法 牛呼吸疾病综合征 混合感染 牛支原体 多杀性巴氏杆菌 牛溶血性曼氏杆菌 多病原联合检测

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