金黄色葡萄球菌粘附素Fnbp A功能区基因的克隆和原核表达 被引量：4

1

作者 杨宏军 高运东 +3 位作者 王长法 杨少华 仲跻峰 赵宏坤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第1期54-58,共5页

【目的】克隆和表达奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白A(Fnbp A)的功能基因。【方法】采集奶牛急性乳腺炎乳样,分离金黄色葡萄球菌,提取其DNA作为模板,利用设计合成的特异性引物,对金黄色葡萄球菌进行FnbpA功能基因的PCR扩增。... 【目的】克隆和表达奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白A(Fnbp A)的功能基因。【方法】采集奶牛急性乳腺炎乳样,分离金黄色葡萄球菌,提取其DNA作为模板,利用设计合成的特异性引物,对金黄色葡萄球菌进行FnbpA功能基因的PCR扩增。回收目的基因并连接到T载体,鉴定后进行测序,然后将FnbpA基因连接到pET-32a(+)质粒中,经鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导后采用SDS-PAGE分析蛋白质的表达情况。【结果】PCR产物经电泳成像,仅金黄色葡萄球菌在1.7 kb处出现特异性条带,测序发现其与GenBank公布的FnbpA序列的同源性为98%;蛋白诱导表达SDS-PAGE分析发现,在80 ku处出现特异性条带。【结论】试验成功地克隆到FnbpA基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,蛋白量为33.4%,为进一步研究金黄色葡萄球菌粘附素基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 乳腺炎 粘附素 纤连蛋白连接蛋白A

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奶牛乳房炎金葡菌黏附素亚单位疫苗的基础研究 被引量：2

2

作者 丁进东 彭程 贺奋义 《畜牧兽医杂志》 2014年第3期1-4,共4页

为构建金黄色葡萄球菌黏附素基因原核表达质粒,采用PCR方法对凝集因子A(ClfA)的A区、纤连蛋白(FnBPs)A和B的D区基因进行特异性扩增,构建了克隆质粒pMD19T-ClfA、pMD19T-FnBPA和pMD19T-FnBPB,然后将克隆基因定向插入到原核表达载体pET32a... 为构建金黄色葡萄球菌黏附素基因原核表达质粒,采用PCR方法对凝集因子A(ClfA)的A区、纤连蛋白(FnBPs)A和B的D区基因进行特异性扩增,构建了克隆质粒pMD19T-ClfA、pMD19T-FnBPA和pMD19T-FnBPB,然后将克隆基因定向插入到原核表达载体pET32a(+)中,构建了表达质粒pET32-ClfA、pET32-FnBPA和pET32-FnBPB,并将其转入宿主菌BL21(DE3),经SDS-PAGE分析表明,1mmol/L IPTG诱导后,在57ku、35ku和35ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带;经western-blot分析表明,所表达的蛋白均与目的蛋白一致,说明外源基因成功表达,且表达产物具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 原核表达

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金黄色葡萄球菌纤连结合蛋白信号肽的生物信息学分析及其真核分泌表达 被引量：3

3

作者 王世民 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 2012年第3期212-216,共5页

参考GenBank中收录的金黄色葡萄球菌FnBPA(fibronectin-binding protein A)基因和牛IFN-γ序列进行了信号肽序列的分析。分析结果显示,牛IFN-γ信号肽序列相关指标优于金黄色葡萄球菌FnBPA基因自身的信号肽序列。在此基础上利用重叠延伸... 参考GenBank中收录的金黄色葡萄球菌FnBPA(fibronectin-binding protein A)基因和牛IFN-γ序列进行了信号肽序列的分析。分析结果显示,牛IFN-γ信号肽序列相关指标优于金黄色葡萄球菌FnBPA基因自身的信号肽序列。在此基础上利用重叠延伸PCR法以牛IFN-γ信号肽序列取代金黄色葡萄球菌FnBPA基因的信号肽序列,并构建分泌型真核表达载体PV-SFn。该重组表达载体转染BHK-21细胞后经ELISA及Western-blot检测证实可有效分泌表达目的蛋白。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 纤连素结合蛋白 生物信息学分析 真核分泌表达

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链球菌属纤连蛋白结合蛋白的生物信息学分析 被引量：2

4

作者 周益装 尤元海 张建中 《生物信息学》 2011年第1期60-64,共5页

对链球菌属纤连蛋白结合蛋白进行系统的分析,找出其特征,为以后的研究奠定基础。通过MUSCLE、BLASTP、PSI-BLAST、PHYLIP、Perl编程等生物信息学方法对217条候选纤连蛋白结合蛋白进行研究。发现共有31个序列纤连蛋白结合蛋白重复单元序... 对链球菌属纤连蛋白结合蛋白进行系统的分析,找出其特征,为以后的研究奠定基础。通过MUSCLE、BLASTP、PSI-BLAST、PHYLIP、Perl编程等生物信息学方法对217条候选纤连蛋白结合蛋白进行研究。发现共有31个序列纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体,绝大部分蛋白由两个或两个以上的不同模体序列构成,其保守结构域组合呈现多样性等特征。表明链球菌属纤连蛋白结合蛋白重复单元序列模体不是严格统一的,总体上具有变异性,但模体之间又有很大的相似性。 展开更多

关键词 生物信息学 纤连蛋白结合蛋白 链球菌属

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马链球菌兽疫亚种纤连蛋白结合蛋白的原核表达及其免疫原性的检测 被引量：2

5

作者 范皓天 周梦曦 +2 位作者 蒋子奇 蔺辉星 范红结 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期167-171,共5页

根据已发表的纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FNZ)基因(fnz)序列,设计并合成1对引物,以马链球菌兽疫亚种(SEZ)ATCC35246菌株基因组DNA为模板,PCR扩增fnz基因,并定向将其克隆至表达载体pET-32a(+)中。重组质粒pET-32a(+)-... 根据已发表的纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FNZ)基因(fnz)序列,设计并合成1对引物,以马链球菌兽疫亚种(SEZ)ATCC35246菌株基因组DNA为模板,PCR扩增fnz基因,并定向将其克隆至表达载体pET-32a(+)中。重组质粒pET-32a(+)-fnz经酶切及测序鉴定后,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达,表达产物经Western-blot检测后进行纯化,得到了74ku的纯化蛋白。以纯化的FNZ与ISA206佐剂以1∶1的体积比混合后免疫ICR小鼠,每只小鼠背部皮下多点注射120μL(含蛋白22.5μg),14d后以同样方法进行加强免疫。间接ELISA检测结果表明,FNZ免疫组小鼠的血清FNZ抗体效价显著高于其他3个对照组。二免后第15天小鼠腹腔注射ATCC35246菌液5.0×105 CFU(10LD50),观察注射后10d内小鼠的临床表现及存活状况;结果显示,FNZ免疫组小鼠的存活率为62.5%,显著高于阴性对照组(0)和空白对照组(0),但低于SEZ灭活疫苗免疫组(87.5%)。结果表明,FNZ可使免疫小鼠对SEZ的感染产生一定的抵抗作用。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 纤连蛋白结合蛋白 原核表达 免疫保护

原文传递

金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClFA共表达质粒的构建与原核表达 被引量：8

6

作者 范鑫 郝永清 +2 位作者 张爱荣 史冬艳 陈晓杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期173-177,共5页

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌纤黏蛋白B的D区和纤黏蛋白原凝集素A的A区基因片段进行了特异性扩增,并通过重叠延伸PCR扩增了FnBPB-ClFA串联基因,构建了克隆质粒pMD19-FnB-PB-ClFA。将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,... 采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌纤黏蛋白B的D区和纤黏蛋白原凝集素A的A区基因片段进行了特异性扩增,并通过重叠延伸PCR扩增了FnBPB-ClFA串联基因,构建了克隆质粒pMD19-FnB-PB-ClFA。将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了表达质粒pET-FnBPB-ClFA,并将其转入宿主菌BL21(DE3)。SDS-PAGE分析表明,在1mmol/L IPTG诱导下,在51ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带。Western-blot分析表明,所表达的蛋白与目的蛋白一致。上述结果表明,该融合基因在原核细胞中成功表达。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 纤维素结合蛋白B 凝集因子A 重叠延伸PCR 原核表达

原文传递

猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：3

7

作者 王花茹 王长军 +3 位作者 唐家琪 陆承平 潘秀珍 郭恒彬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期407-409,432,共4页

目的对2005年猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,S.suis2)四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白(FBPS)基因进行克隆和序列分析。方法以ZYH18的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因片段,克隆于pMD... 目的对2005年猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,S.suis2)四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白(FBPS)基因进行克隆和序列分析。方法以ZYH18的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因片段,克隆于pMD-T18载体,构建成载体pMD-T-fbps,转化到宿主菌TG1中,进行序列测定(GenBank登录号为DQ345444)。测序结果与实验室保存的其它7株猪链球菌2型临床分离菌株测序结果及GenBank提交序列AF438158进行编码区基因的同源性比对。结果成功克隆了实验室保存的分离于不同时间和地点的,包括ZYH18在内的8株S.suis2临床分离菌株的fbps基因,并对其编码区基因进行了同源性比对。结论实验室保存的8株菌的FBPS编码区基因同源性高达100%,并不因分离时间和地点的不同而不同;与GenBank提交序列AF438158同源性为99%,存在两个氨基酸的差异。 展开更多

关键词 纤连蛋白结合蛋白基因 猪链球菌 同源性比对 序列分析

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Kozak序列对金黄色葡萄球菌黏附因子FnBPA-A DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的影响 被引量：5

8

作者 苏艳 王世民 +2 位作者 邵俊高 张宝江 韦海娜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期458-465,共8页

黏附因子FnbpA(纤连蛋白结合蛋白A,Fibronectin binding protein A)是金黄色葡萄球菌表面的蛋白质成分,是该菌感染早期最重要的致病因子,可促进其对寄主组织的侵入,也是一个有潜力的免疫靶标。将牛乳源金黄色葡萄球菌中FnBPA基因的A功... 黏附因子FnbpA(纤连蛋白结合蛋白A,Fibronectin binding protein A)是金黄色葡萄球菌表面的蛋白质成分,是该菌感染早期最重要的致病因子,可促进其对寄主组织的侵入,也是一个有潜力的免疫靶标。将牛乳源金黄色葡萄球菌中FnBPA基因的A功能区克隆至真核表达载体中,分别构建含Kozak序列和不含Kozak序列的FnBPA-A基因真核表达载体,重组质粒经鉴定测序正确后,免疫C57BL/6小鼠检测其抗体水平和淋巴细胞增殖情况,并对各组小鼠进行攻毒实验。检测的结果表明Kozak修饰的重组DNA在血清抗体效价(P<0.05)和免疫保护率方面均优于不含Kozak序列的重组DNA,在刺激淋巴细胞增殖方面Kozak修饰的重组DNA的刺激效果虽然也高于不经修饰的重组DNA,但是差异不显著(P>0.05)。根据总体的免疫效果来看,Kozak序列对增强FnBPA的重组DNA疫苗诱导的免疫应答起了不容忽视的作用。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 黏附因子FnBPA KOZAK序列 重组DNA疫苗 免疫应答

原文传递

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究 被引量：1

9

作者 肖勇健 刘卓然 +2 位作者 赵飞骏 余坚 曾铁兵 《中南医学科学杂志》 CAS 2016年第3期263-266,295,共5页

目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子I... 目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了p ET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出r Tp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论r Tp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 纤连蛋白结合蛋白 Tp0136 前炎症细胞因子 核因子KAPPA B

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纤维结合蛋白基因在儿科A族β溶血性链球菌的分布及与大环内酯类抗生素耐药的关系

10

作者 冯利娟 杨永弘 +3 位作者 俞桑洁 姚开虎 袁林 沈叙庄 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2010年第1期26-30,共5页

目的研究纤维结合蛋白基因在我国儿科A族β溶血性链球菌(GAS)中的分布及与大环内酯类耐药之间的关系。方法收集3所儿童医院191株病原菌株,48株健康携带株,采用琼脂稀释法测定5种大环内酯类抗生素的MIC值,确定其药物敏感性;PCR扩增及测... 目的研究纤维结合蛋白基因在我国儿科A族β溶血性链球菌(GAS)中的分布及与大环内酯类耐药之间的关系。方法收集3所儿童医院191株病原菌株,48株健康携带株,采用琼脂稀释法测定5种大环内酯类抗生素的MIC值,确定其药物敏感性;PCR扩增及测序对菌株进行emm分型;PCR检测纤维结合蛋白基因prtF1、prtF2和大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermTR和mefA。结果分离株的ermB阳性的有186株,ermTR阳性的有11株,prtF1、prtF2及两者同为阳性的菌株携带率分别为67.36%、66.11%和59.00%,prtF1在病原菌株和健康携带株中没有差别,prtF2在健康分离株携带率高于病原菌株,prtF1、prtF2两者集中在emm12,emm22型菌株中阳性率高,而在emm1、emm4型中很少存在。prtF1和prtF2同时阳性在ermB阳性大环内酯类抗生素耐药菌株中更为常见。结论在我国儿科GAS分离株中,以共同携带prtF1/prtF2基因的emm12型菌株为主,多存在于健康儿童中,这可能是造成我国的GAS感染耐药水平高,而侵袭性不高的原因之一。 展开更多

关键词 链球菌 纤维结合蛋白基因 大环内酯类抗生素耐药

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金黄色葡萄球菌表面蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

11

作者 许桂丽 蔡冉 +8 位作者 周洁 马颖 袁敬宇 徐悦玥 张素芬 尚彦红 潘英 李素芹 李越希 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第7期890-894,共5页

目的在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin-binding protein A,FnBPA),制备其多克隆抗体。方法筛选FnBPA抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX4T-2-fnbpa和... 目的在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin-binding protein A,FnBPA),制备其多克隆抗体。方法筛选FnBPA抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa,分别转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的FnBPA-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以FnBPA-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性。结果经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa构建正确;在相对分子质量约42 000和19 000处,分别可见FnBPA-GST和FnBPA-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的30%和20%,均以可溶性形式表达,纯度均在90%以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清。结论2种标签的融合蛋白均具有较好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 纤连蛋白结合蛋白 多克隆抗体

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猪链球菌2型FBPS的纤连蛋白结合部位的初步确定 被引量：2

12

作者 孙理云 范红结 陆承平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期753-756,共4页

根据猪链球菌2型江苏分离株HA9801的fbps基因序列,设计合成不同的引物,用含全长fbps的pMD-T-FBPS质粒为模板,通过PCR技术,扩增不同片段fbps,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+),构建分别表达全长7～82、7～165和87～320氨... 根据猪链球菌2型江苏分离株HA9801的fbps基因序列,设计合成不同的引物,用含全长fbps的pMD-T-FBPS质粒为模板,通过PCR技术,扩增不同片段fbps,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+),构建分别表达全长7～82、7～165和87～320氨基酸FBPS的重组表达质粒pFBPS、pFBPS(7～82)、pFBPS(7～165)和pFBPS(87～320);将重组质粒转化大肠杆菌BL 21(DE)株,经IPTG诱导,表达rFBPS(7～82)、rFBPS(7～165)、rFBPS(87～320)和rFBPS(全长),分子量分别为29、34、42及83kD的融合蛋白.配基亲和Western blot试验表明,表达的融合蛋白除rFBPS(7～82)外,均可与人纤连蛋白(Fn)结合,由此可以推断SS2的纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(FBPS)N端87～165氨基酸区域为具有结合活性的线性部位. 展开更多

关键词 猪链球菌2型 纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白 融合表达 纤连蛋白结合部位

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金黄色葡萄球菌FnBPA D基因片段的表达 被引量：2

13

作者 赵艳 张爱荣 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期361-365,共5页

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要传染性病原菌。本实验采用分子克隆及蛋白表达技术,成功的表达了金黄色葡萄球菌纤维素结合蛋白A(FnBPA)D片段并对其免疫学活性进行了初步研究。表达产物免疫实验动物后,获得较高效价的抗体。用制... 金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要传染性病原菌。本实验采用分子克隆及蛋白表达技术,成功的表达了金黄色葡萄球菌纤维素结合蛋白A(FnBPA)D片段并对其免疫学活性进行了初步研究。表达产物免疫实验动物后,获得较高效价的抗体。用制备血清进行吞噬调理试验,抗金黄色葡萄球菌黏附等一系列试验,证明抗体对金黄色葡萄球菌具有吞噬调理作用,也有抗金黄色葡萄球菌黏附的作用,这将为制备奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌黏附素疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 纤维素结合蛋白A(FnBPA) 原核表达

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牛源金黄色葡萄球菌黏附素纤连结合蛋白A分泌型DNA疫苗诱导小鼠免疫效应的研究 被引量：1

14

作者 苏艳 王世民 +3 位作者 邵俊高 张宝江 韦海娜 李莹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第2期27-30,共4页

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌黏附素纤连结合蛋白A(FnbpA)的A区基因片段进行了特异性扩增,构建了真核表达载体pVAX-SFn,转染BHK-21细胞后经ELISA可检测出分泌表达的FnbpA蛋白。将真核重组表达质粒肌肉注射C57BL/6小鼠,免疫后检测小... 采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌黏附素纤连结合蛋白A(FnbpA)的A区基因片段进行了特异性扩增,构建了真核表达载体pVAX-SFn,转染BHK-21细胞后经ELISA可检测出分泌表达的FnbpA蛋白。将真核重组表达质粒肌肉注射C57BL/6小鼠,免疫后检测小鼠血清抗体效价、淋巴细胞增殖及对试验小鼠攻毒试验。结果表明,该重组表达载体诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过对照组。对小鼠的攻毒试验结果提示该重组DNA经肌肉注射途径接种可对小鼠产生免疫保护。本试验的结果对该DNA疫苗今后在实际中的应用奠定了良好的试验基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 黏附素纤连结合蛋白 DNA疫苗 免疫效应

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穿透支原体纤连蛋白结合蛋白的鉴定及分离纯化

15

作者 陈丽丽 吴移谋 +3 位作者 蔡恒玲 阮卫 张文波 邓仲良 《南华大学学报（医学版）》 2004年第4期426-428,435,共4页

目的 探讨穿透支原体对宿主细胞的黏附机制。方法 用去污剂Triton X-100提取穿透支原体蛋白,用配体免疫印迹试验鉴定纤连蛋白结合蛋白(FnBP);然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱,运用亲和层析技术从制备的样品中分离纯化FnBP,在非还原... 目的 探讨穿透支原体对宿主细胞的黏附机制。方法 用去污剂Triton X-100提取穿透支原体蛋白,用配体免疫印迹试验鉴定纤连蛋白结合蛋白(FnBP);然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱,运用亲和层析技术从制备的样品中分离纯化FnBP,在非还原状态下进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。结果 配体免疫印迹试验鉴定出一65kDa的蛋白条带,可特异性地结合Fn;亲和层析技术得到相应的FnBP的纯化产物。结论FnBP与穿透支原体对宿主细胞的黏附过程有关。 展开更多

关键词 穿透支原体 纤连蛋白结合蛋白 纯化

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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌FnbpB-D基因的表达及其抗血清活性 被引量：7

16

作者 史冬艳 郝永清 张爱荣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期356-359,共4页

纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组... 纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组蛋白(34.7ku),并通过动物实验对重组FnbpB-D蛋白的抗血清活性进行了初步研究。采用ELISA对抗血清进行抗粘附性检测,结果显示实验组与对照组差异极显著(p<0.01),抗血清具有较强的抑制S.aureus黏附纤维连结素的作用。此外,调理吞噬实验结果显示,免疫兔全血对S.aureus有较强的调理作用。这些实验结果将为制备奶牛乳房炎S.aureus黏附素疫苗的研制提供参考。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 纤维素结合蛋白B(FnbpB) 抗血清活性

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金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A r10-11截短体蛋白基因片段的原核表达与免疫原性 被引量：2

17

作者 杨汐静 陈晓婷 +2 位作者 刘道龙 杨阳 杨光 《华西医学》 CAS 2018年第12期1519-1525,共7页

目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基... 目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基因组序列中进行PCR扩增,对扩增产物进行纯化,连接T载体后转入大肠杆菌DH5α中进行克隆,提取重组后的质粒进行双酶切鉴定,并回收目的片段连接到pET-32a质粒中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,采用HIS蛋白纯化柱纯化截短蛋白FnBPAr10-11,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定,纯化后的FnBPAr10-11用于免疫小鼠[分为无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组、FnBPA组、FnBPAr10-11组],检测小鼠血清免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)水平、细胞因子水平、免疫保护率。结果 SDS-PAGE分析显示,表达后的蛋白相对分子质量约为33.1×103。FnBPAr10-11组与FnBPA组IgG抗体效价达1∶128 000,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FnBPAr10-11组的细胞因子水平与FnBPA组比较差异无统计学意义(P>0.05),与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。攻毒试验中FnBPAr10-11组的免疫保护作用在50%以上。结论成功构建了金黄色葡萄球菌Fn BPAr10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株,该截短蛋白免疫原性良好。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 纤连蛋白结合蛋白Ar10-11 免疫原性

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