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家蚕丝素基因pFb2.9限制性片段长度多态性研究 被引量:9
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作者 鲁成 刘连碧 +3 位作者 周泽扬 廖顺尧 冯丽春 向仲怀 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1996年第2期103-105,共3页
本研究利用丝素H链基因的结构基因pFb2.9为探针,对家蚕基因组DNA进行了限制性片段长度多态性分析,并探讨了多态性与茧丝茸毛性状的关系。
关键词 家蚕 丝素 基因 限制性 片段长度多态性
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家蚕丝蛋白基因分子标记的建立 被引量:7
2
作者 鲁成 冯丽春 +1 位作者 刘连碧 向仲怀 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1996年第2期100-102,共3页
利用已知丝素基因和丝胶基因的克隆片段(pFb_(100),pSr_(100))为探针和12个限制性内切酶,对家蚕基因组DNA进行了限制性片段长度多态性分析。结果表明,其DNA多态性可用作家蚕基因图谱的分子标记。
关键词 家蚕 丝素基因 限制性 片段长度多态性
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家蚕Bmo-miR-2739对丝素重链基因Fib-H表达的调控作用 被引量:7
3
作者 宋菲 王欣 +4 位作者 钱平 唐顺明 赵巧玲 郭锡杰 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期404-408,共5页
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码小RNAs,可通过序列互补配对的方式对靶基因mRNA的转录进行调控。丝素重链(Fib-H)是家蚕丝蛋白的重要组成成分,研究miRNAs对Fib-H基因mRNA的调控作用,有助于理解丝腺高效合成蚕丝蛋白的分子机制。... MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码小RNAs,可通过序列互补配对的方式对靶基因mRNA的转录进行调控。丝素重链(Fib-H)是家蚕丝蛋白的重要组成成分,研究miRNAs对Fib-H基因mRNA的调控作用,有助于理解丝腺高效合成蚕丝蛋白的分子机制。用靶基因预测软件RNA22和RNAhybrid对Fib-H基因的3'-UTR及已知的家蚕miRNA进行分析,发现Fib-H基因的3'-UTR有一个Bmo-miR-2739的潜在靶位点。进一步将人工合成的Bmo-miR-2739模拟物和带有Fib-H基因3'-UTR的荧光素酶报告基因载体共转染BmN细胞,48 h后检测到荧光素酶表达上调约13%。初步推测Bmo-miR-2739对Fib-H具有正调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 MICRORNA 丝素重链基因 转录调控
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YAC介导的天蚕丝素基因向家蚕的转移──天蚕丝素基因-YAC克隆在家蚕的表达 被引量:15
4
作者 李振刚 周丛照 +1 位作者 唐恒立 范久戈 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期1-6,共6页
本文为天蚕Antheraeyamamai丝素基因在家蚕Bombyxmori成功表达的首次报道。我们构建了天蚕丝素基因的YAC克隆,然后把含有该克隆的DNA溶液导入家蚕受精卵。分子杂交实验证明天蚕丝素基因已整合到家蚕基因组中。通过丝心蛋白氨基酸组分... 本文为天蚕Antheraeyamamai丝素基因在家蚕Bombyxmori成功表达的首次报道。我们构建了天蚕丝素基因的YAC克隆,然后把含有该克隆的DNA溶液导入家蚕受精卵。分子杂交实验证明天蚕丝素基因已整合到家蚕基因组中。通过丝心蛋白氨基酸组分分析以及茧丝的溶解性比较,发现有部分转基因家委表达了天蚕丝素基因。F2代的转基因家蚕蛾的染色体DNA中同时还存在YAC序列,说明YAC对丝素基因具有介导作用。天蚕丝素基因以单拷贝形式存在于转基因家蚕中。 展开更多
关键词 家蚕 天蚕 丝素基因 酵母人工染色体 基因转移
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家蚕丝素基因表达水平的定量分析 被引量:9
5
作者 孙霞 朱晨 +2 位作者 汪生鹏 沈小绢 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期30-35,共6页
采用实时定量RT-PCR方法,对丝素轻链基因(fib-L)、丝素重链基因(fib-H)、P25基因在家蚕幼虫不同组织和不同发育时期的表达进行了定量分析。结果发现3种丝素基因除主要在5龄幼虫的后部丝腺中表达外,在其它组织如脂肪体和中部丝腺中也有... 采用实时定量RT-PCR方法,对丝素轻链基因(fib-L)、丝素重链基因(fib-H)、P25基因在家蚕幼虫不同组织和不同发育时期的表达进行了定量分析。结果发现3种丝素基因除主要在5龄幼虫的后部丝腺中表达外,在其它组织如脂肪体和中部丝腺中也有一定程度的表达;在4龄眠期的后部丝腺中3种丝素基因也有一定的表达水平,其中fib-L在这一时期的表达量较高。同时发现在5龄第3天和第5天的后部丝腺中,fib-H、fib-L与P25在mR-NA水平上的摩尔比分别为9∶18∶1和19∶32∶1,推测丝素基因的表达可能具有转录后调控,此结果说明家蚕丝素基因的表达可能具有更加精细的调控机制。 展开更多
关键词 家蚕 丝素基因 表达 实时定量RT-PCR 组织 发育时期
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家蚕丝素基因研究进展 被引量:5
6
作者 陈华 朱良均 闵思佳 《科技通报》 北大核心 2003年第3期260-263,共4页
3种丝素基因的全序列已被测定,其中重链基因的中心区域由12个具有多态性的重复区和11个保守性较强的无定形区组成.丝素基因的表达主要在转录水平受到调控,已分离到了9种反式作用因子.丝素基因存在4种变异系统:Nd、Nd(2)、Nd s和Nd sD,Nd... 3种丝素基因的全序列已被测定,其中重链基因的中心区域由12个具有多态性的重复区和11个保守性较强的无定形区组成.丝素基因的表达主要在转录水平受到调控,已分离到了9种反式作用因子.丝素基因存在4种变异系统:Nd、Nd(2)、Nd s和Nd sD,Nd和Nd(2)能抑制重链基因的转录,Nd s和Nd sD为轻链基因的等位基因.利用同源重组技术,GFP等外源基因已被插入到家蚕重、轻链基因中. 展开更多
关键词 丝素基因 结构 表达调控 遗传变异 同源重组 家蚕
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柞蚕丝素基因5′端部分序列的克隆及结构分析 被引量:3
7
作者 李文利 金礼吉 +1 位作者 范琦 安利佳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期218-221,共4页
利用PCR技术从中国柞蚕品种 74 1中扩增并克隆出柞蚕丝素基因 5′端部分片段 ,它由CAAT盒、TATA盒 (Hognessbox)、primtranscript、丝素蛋白的起始密码子ATG和部分结构基因及内含子组成。通过与天蚕丝素基因的 5′端序列进行比较 ,发现 ... 利用PCR技术从中国柞蚕品种 74 1中扩增并克隆出柞蚕丝素基因 5′端部分片段 ,它由CAAT盒、TATA盒 (Hognessbox)、primtranscript、丝素蛋白的起始密码子ATG和部分结构基因及内含子组成。通过与天蚕丝素基因的 5′端序列进行比较 ,发现 12 4~ 5 0 6bp、796~ 1194bp、12 16~ 12 98bp同源性高 ,同源率分别为91.6 %、95 %、95 %。将柞蚕丝素基因 5′端的CAAT盒、TATA盒、primtranscript序列与KikuchiY所测家蚕、HuiCC所测家蚕及家蚕P2 5蛋白、天蚕丝素基因相应序列进行比较 ,发现柞蚕与天蚕相应序列的同源率远高于家蚕。从序列中可以看出 :若转录起始点第一个核苷酸标为 +1,则TATA盒位于 - 2 5处 ;CAAT盒位于 - 70处。 展开更多
关键词 柞蚕丝 丝素基因 柞蚕 序列分析 启动子 5′端序列 结构 克隆
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Study on fibroin heavy chain of the silkworm Bombyx mori by fluorescence in situ hybridization (FISH) 被引量:2
8
作者 宋方洲 张平波 +5 位作者 易发平 洪锡钧 鲁成 Yutaka Banno Hiroshi Fujii Katsumi Koga 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2002年第6期663-668,共7页
The sericulture industry plays a very important role in our national economy. Silkworm (Bombyx mori) is always regarded as a model animal and biological reactor. There have been detailed studies on the structure, expr... The sericulture industry plays a very important role in our national economy. Silkworm (Bombyx mori) is always regarded as a model animal and biological reactor. There have been detailed studies on the structure, expression and control and molecular evolution of silk genes. However, few, if any, reports are available on the localization of structural genes in silkworm by molecular cytogenetics. The present experiment has tentatively localized the Fib-H gene at the distal end of the 25th linkage group, namely at the 25-0.0 position, and verified that Fib-H has only one locus, thus providing a temporary solution to the problem about its localization. 展开更多
关键词 SILKWORM Bombyx mori fibroin gene fluorescence in SITU hybridization gene localization.
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TAIL-PCR技术分离柞蚕丝素基因3′端非编码区未知DNA序列 被引量:1
9
作者 冷春玲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期108-111,共4页
以柞蚕基因组DNA为材料,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术分离出1 998 bp的DNA序列。将该序列与Genebank上的柞蚕丝素基因DNA序列(AF083334)进行比较分析结果表明,新钓取的DNA片断中1 758 bp的DNA序列为柞蚕丝素基因3′端非编码区未知... 以柞蚕基因组DNA为材料,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术分离出1 998 bp的DNA序列。将该序列与Genebank上的柞蚕丝素基因DNA序列(AF083334)进行比较分析结果表明,新钓取的DNA片断中1 758 bp的DNA序列为柞蚕丝素基因3′端非编码区未知DNA序列。TAIL-PCR技术为柞蚕丝素基因3′端非编码区未知DNA序列的钓取提供了一种简便、高效的方法。 展开更多
关键词 TAIL-PCR 丝素基因 简并引物 侧翼序列
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家蚕丝蛋白基因在不同发育时期表达量的变化 被引量:3
10
作者 王桂花 李娟 +2 位作者 徐欣 张升祥 崔为正 《北方蚕业》 2011年第4期17-20,23,共5页
本文采用半定量RT-PCR方法,检测了家蚕4~5龄期丝腺中5个丝蛋白基因(Fib-H、Fib-L、Ser-2短片段、Ser-2长片段、Ser-3)在不同发育时期表达量的变化。结果表明,Fib-H、FIB-L及Ser-3基因的表达规律相似,总体上4龄期表达量明显低于5龄,但4... 本文采用半定量RT-PCR方法,检测了家蚕4~5龄期丝腺中5个丝蛋白基因(Fib-H、Fib-L、Ser-2短片段、Ser-2长片段、Ser-3)在不同发育时期表达量的变化。结果表明,Fib-H、FIB-L及Ser-3基因的表达规律相似,总体上4龄期表达量明显低于5龄,但4龄眠期均有明显表达,从5龄起蚕以后表达量逐渐上升,至熟蚕或熟蚕后2d达到高峰,此后迅速下降;Ser-2基因两个转录本的表达规律基本一致,与以上3个基因相比,Ser-2基因在4龄期存在相对较高的表达量,但在4龄眠期表达量明显降低,从5龄起蚕以后表达量逐渐上升,Ser-2短片段和长片段分别从5龄96h和144h之后表达量开始降低,到熟蚕期基本达到最低值。 展开更多
关键词 家蚕 丝蛋白基因 表达 发育时期
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YAC-base transfer of fibroin gene from Anthemea yamamal to domestic silkworm Bombyx mod (I)——Identification of fibroin clones from a YAC library of Antheraeu yamamai constructed from its posterior silk gland
11
作者 唐恒立 柴建华 李振刚 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1995年第5期590-595,共6页
Antheraea yamamai (Japanese oak silkworm) is a kind of silkworm of great economic value. and the process of the expression of its silkprotem genes is a perfect model for the study of molecular regulation during the de... Antheraea yamamai (Japanese oak silkworm) is a kind of silkworm of great economic value. and the process of the expression of its silkprotem genes is a perfect model for the study of molecular regulation during the development and differentiation. So studying its fibroin and allied genes is of both theoretic and practical magnitude A YAC library with an average size of 570kb is constructed from the posterior silk gland, using pYAC4 as a vector. The library was screened by means of polymerase chain reaction, and clones representing fibroin gene were isolated and characterized. 展开更多
关键词 Antheraea yamamai yeast artificial CHROMOSOME fibroin gene POLYMERASE chain reaction.
原文传递
转蚕丝芯蛋白基因获得高强纤维棉花植株 被引量:14
12
作者 张震林 陈松 +2 位作者 刘正銮 周宝良 张香桂 《江西农业学报》 CAS 2004年第1期15-19,共5页
采用花粉管通道技术,将棉纤维细胞特异表达启动子(E6)驱动的蚕丝芯蛋白基因导入陆地棉品种"泗棉3号"。共注射600朵花,收获497粒种子。通过GUS报告基因组化检测筛选,获得5株GUS阳性棉株。又经卡那霉素涂叶法鉴定,其中4株具有... 采用花粉管通道技术,将棉纤维细胞特异表达启动子(E6)驱动的蚕丝芯蛋白基因导入陆地棉品种"泗棉3号"。共注射600朵花,收获497粒种子。通过GUS报告基因组化检测筛选,获得5株GUS阳性棉株。又经卡那霉素涂叶法鉴定,其中4株具有良好的卡那霉素抗性。用依据E6启动子序列和蚕丝芯蛋白基因序列设计的两对引物,对这5株棉花进行PCR扩增,获得1株转蚕丝芯蛋白基因棉株。纤维品质测定结果表明,这株转蚕丝芯蛋白基因棉花T1代纤维比强度达到34.6cN/tex,比对照"泗棉3号"(比强度为28.6cN/tex)提高了21.0%,T2代纤维比强度比对照平均增高23.3%。 展开更多
关键词 蚕丝芯蛋白基因 转基因 高强纤维 棉花 花粉管通道技术 品质育种
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家蚕丝素蛋白H链基因启动子区域的克隆及活性分析 被引量:11
13
作者 周文林 曹锦如 +3 位作者 叶爱红 曹广力 薛仁宇 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期72-77,共6页
家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-Pol... 家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-PolyA,通过家蚕BmN细胞和丝腺进行瞬时表达。结果表明:克隆的fib-H启动子序列具有典型的丝腺特异性表达启动子的特征,并可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。 展开更多
关键词 家蚕 丝素H链基因 启动子 DsRed基因 瞬时表达
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对转蚕丝芯蛋白轻链基因棉花的分析 被引量:12
14
作者 上官小霞 王凌健 +2 位作者 李燕娥 梁运生 吴霞 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期697-702,共6页
利用根癌农杆菌介导转化法,将棉纤维特异表达启动子GAE6-3A驱动的蚕丝芯蛋白轻链基因(FBN)转入陆地棉R15中。T0代转基因再生株FBN基因PCR检测阳性率达70%。随机选取4个转基因株系T1代材料的Southern杂交显示,3个为双拷贝插入、1个为单... 利用根癌农杆菌介导转化法,将棉纤维特异表达启动子GAE6-3A驱动的蚕丝芯蛋白轻链基因(FBN)转入陆地棉R15中。T0代转基因再生株FBN基因PCR检测阳性率达70%。随机选取4个转基因株系T1代材料的Southern杂交显示,3个为双拷贝插入、1个为单拷贝插入;Northern分析结果证实FBN基因在转基因棉纤维中表达。转基因后代的纯合选育主要以田间卡那霉素检测结合实验室内GUS组织化学检测进行,其中4个株系已获得了T3代转基因材料,其他若干个转化子也获得T1代和T2代的不同材料。对6个转基因棉花株系后代纤维检测结果表明,蚕丝芯蛋白轻链基因对棉花纤维品质的影响主要体现于对纤维强度的改良。H18、H32、H34株系转基因棉花后代纤维强度较对照显著提高,其中H18纤维强度提高12.3%。 展开更多
关键词 蚕丝芯蛋白轻链基因 转基因棉花 纤维品质
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家蚕丝素重链启动子克隆片段在家蚕体内和昆虫培养细胞内的渗漏表达 被引量:10
15
作者 汪生鹏 陆长德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期491-496,共6页
为了探讨家蚕丝素重链基因的调控机制,应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,研究了丝素重链基因启动子克隆片段在家蚕丝腺的不同部位,以及脂肪体细胞和Sf9培养细胞中的表达渗漏。... 为了探讨家蚕丝素重链基因的调控机制,应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,研究了丝素重链基因启动子克隆片段在家蚕丝腺的不同部位,以及脂肪体细胞和Sf9培养细胞中的表达渗漏。结果发现,丝素重链启动子克隆片段在家蚕中部丝腺存在表达渗漏,并且在中部丝腺前部的表达活性要强于中部丝腺的中部和后部;克隆片段在脂肪体组织存在表达渗漏,通过荧光解剖显微镜可以在体表观察到绿色荧光;克隆片段在Sf9培养细胞中也存在表达渗漏。上述结果说明目前已知的有关家蚕丝素重链基因的调控元件仍不充分,家蚕基因组中可能还有其他调控丝素重链基因表达组织和时相的特异性元件存在。 展开更多
关键词 家蚕 丝素重链基因 渗漏表达 重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒
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家蚕丝素基因的研究进展 被引量:4
16
作者 翁宏飚 牛宝龙 +1 位作者 孟智启 徐孟奎 《蚕桑通报》 2002年第4期5-8,共4页
家蚕丝素蛋白基因不仅高度专一地在后部丝腺中表达,而且在家蚕胚胎发育及幼虫发育过程中,丝素蛋白基因的表达在时间和空间上受到精细的调控,因此研究丝素蛋白基因的调控方式,能使我们了解生物体如何利用遗传信息,对基因进行时间和空间... 家蚕丝素蛋白基因不仅高度专一地在后部丝腺中表达,而且在家蚕胚胎发育及幼虫发育过程中,丝素蛋白基因的表达在时间和空间上受到精细的调控,因此研究丝素蛋白基因的调控方式,能使我们了解生物体如何利用遗传信息,对基因进行时间和空间上的表达调控。调控丝素蛋白基因表达专一性的启动子/增强子结构相对较为简单,也更利于研究。本文就近年来在家蚕丝索蛋白基因研究中取得的成果进行综述。 展开更多
关键词 家蚕丝素基因 基因调控 启动子 增强子 调控子 结构
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Bmo-miR-2755*对丝素蛋白基因BmFib-L和BmP25表达的调控作用 被引量:3
17
作者 范洋洋 陈晨 +4 位作者 王欣 宋菲 唐顺明 易咏竹 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期847-853,共7页
为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因(BmFib-L)和P25蛋白基因(BmP25)有潜在调控作用的Bmo-miR-2755*。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755*及其靶基因BmFib-L、BmP2... 为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因(BmFib-L)和P25蛋白基因(BmP25)有潜在调控作用的Bmo-miR-2755*。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755*及其靶基因BmFib-L、BmP25在家蚕4~5龄期幼虫后部丝腺和5龄3 d幼虫不同组织器官中的表达水平,结果显示三者在后部丝腺组织中的表达水平都较高,呈现严格的时空特异性。以pcDNA3质粒为载体,构建Bmo-miR-2755*的重组表达载体pcDNA3[ie1-egfpprimiR-2755*-SV40];以pGL3.0-Basic质粒为载体,分别构建BmFib-L 3'UTR、BmP25 3'UTR与荧光素酶报告基因luc融合的重组报告质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3'UTR-SV40]和pGL3.0[A3-luc-P25-3'UTR-SV40]。以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,分别将构建的Bmo-miR-2755*重组表达载体和2个重组报告质粒共转染BmN细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,明确Bmo-miR-2755*可显著下调BmFib-L基因的表达,并能上调BmP25基因的表达,但上调作用未达显著水平。上述结果为研究家蚕miRNA的功能和阐明蚕丝蛋白基因表达调控分子机制提供了新的实验数据。 展开更多
关键词 miRNA 家蚕 Bmo-miR-2755* 丝素轻链基因 P25基因 表达调控
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添食不同含氮物质对家蚕产丝量及丝素蛋白基因表达的影响 被引量:3
18
作者 朱巧莹 李敏杰 +2 位作者 陈燕冰 冯启理 邓惠敏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期658-662,共5页
给家蚕5龄幼虫分别添食大豆蛋白、NH4Cl和尿素后,调查家蚕产丝量的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测蚕体丝腺组织中丝素重链基因(fib H)的表达变化,探究适合用于提高家蚕产丝量的含氮物质。5龄起蚕连续6 d按照0.45 mg/(头&#... 给家蚕5龄幼虫分别添食大豆蛋白、NH4Cl和尿素后,调查家蚕产丝量的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测蚕体丝腺组织中丝素重链基因(fib H)的表达变化,探究适合用于提高家蚕产丝量的含氮物质。5龄起蚕连续6 d按照0.45 mg/(头·d)的剂量添食尿素后,茧层率比对照组增加15.7%,且幼虫的体质量及丝腺体积都比对照组有所增加;5龄幼虫添食大豆蛋白和NH4Cl后茧层率无明显增加。qRT-PCR检测5龄起蚕按照上述剂量添食尿素120 h后,后部丝腺中fib H的表达量比对照组增加了1.5倍。上述结果再次证实了家蚕5龄幼虫添食尿素后可以增加产丝量,并且表明尿素可以促进蚕体后部丝腺中fib H基因的表达。 展开更多
关键词 家蚕 营养添食 尿素 产丝量 丝素重链基因 实时荧光定量PCR
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家蚕丝素轻链蛋白多克隆抗体的制备及应用 被引量:2
19
作者 刘春 韩宇 +4 位作者 荣海博 侯勇 陈玉琳 高志宏 夏庆友 《蚕学通讯》 2009年第1期9-14,共6页
本研究通过用回收纯化的Fib-L蛋白为抗原免疫家兔,获得多克隆抗体,通过与家蚕大造5龄5d的10个不同组织进行Western blot,结果表明,制备的Fib-L抗体能识别在后部丝腺特异合成的Fib-L蛋白,表明该抗体有较好的特异性。利用此抗体进行丝腺... 本研究通过用回收纯化的Fib-L蛋白为抗原免疫家兔,获得多克隆抗体,通过与家蚕大造5龄5d的10个不同组织进行Western blot,结果表明,制备的Fib-L抗体能识别在后部丝腺特异合成的Fib-L蛋白,表明该抗体有较好的特异性。利用此抗体进行丝腺组织的免疫组化,经抗体的一系列的梯度稀释和条件探索,发现当Fib-L一抗在1∶50和荧光二抗1∶1000的条件下得到理想的免疫组化结果,在荧光显微镜下观察到了二抗标记的绿色荧光。以上结果显示,本实验成功制得Fib-L蛋白抗体,获得丝腺组织免疫组化的一些重要参考信息,为家蚕丝腺功能基因的研究及细胞定位提供了一定的参考价值。 展开更多
关键词 丝素基因 Fib-L蛋白 多克隆抗体 WESTERN blot免疫组化
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不同截短的丝素重链基因启动子驱动报告基因在家蚕组织中的表达 被引量:1
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作者 高志宏 刘春 +3 位作者 任静波 刘品彦 魏丽婉 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期391-399,共9页
应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)为报告基因,研究不同截短的丝素重链基因启动子(-2127/+23、-925/+23和-238/+23)驱动报告基因在家蚕5龄幼虫组织中的表达情况。结果发现,通过病毒... 应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)为报告基因,研究不同截短的丝素重链基因启动子(-2127/+23、-925/+23和-238/+23)驱动报告基因在家蚕5龄幼虫组织中的表达情况。结果发现,通过病毒感染介导,3种长度丝素重链基因启动子驱动的报告基因在脂肪体和血细胞中存在异位表达,从个体体表可直接观察到明显的绿色荧光;3种长度的启动子都能在后部丝腺中高效起始EGFP的转录,产生绿色荧光;长度为0.9kb和0.2kb的启动子0.9KH、0.2KH在中部丝腺能起始EGFP转录产生绿色荧光,而2.1kb的启动子(2.1KH)能起始EGFP转录,但未能检测到绿色荧光;3种长度的启动子也能在Sf9培养细胞中起始EGFP基因表达。上述结果表明,丝素重链基因启动子没有严格的组织特异性。 展开更多
关键词 丝素重链基因 启动子 绿色荧光蛋白基因 组织特异性表达 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒
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