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结缔组织生长因子促进半月板无血管区损伤愈合 被引量:9
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作者 何蔚 刘明 +3 位作者 青祖宏 高巍 刘玉杰 黄潇楠 《中国骨伤》 CAS 2013年第8期681-688,共8页
目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)对纤维软骨细胞外基质分泌、VEGF表达及促进半月板无血管区的损伤修复中的作用。方法:将新西兰大白兔半月板白区,经胶原酶消化、离心分离后,提取半月板纤维软骨细胞,培养至第2代。用流式细胞仪鉴定该细... 目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)对纤维软骨细胞外基质分泌、VEGF表达及促进半月板无血管区的损伤修复中的作用。方法:将新西兰大白兔半月板白区,经胶原酶消化、离心分离后,提取半月板纤维软骨细胞,培养至第2代。用流式细胞仪鉴定该细胞表面CD31,CD44,CD45和CD105标志物,并用Ⅱ型胶原抗体做免疫细胞化学鉴定,以证明所培养、传代的细胞是纤维软骨细胞。分别将细胞培养在浓度100ng/ml的CTGF培养基中3、14d后,通过实时定量聚合酶链反应,检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和VEGF基因的表达变化情况。造模,在兔半月板中央区,制作长3mm的纵行撕裂。将45只大白兔随机分为3组,处理方式为:半月板单纯缝合术,缝合术加填充PBS-纤维蛋白胶,缝合术加填充1.5μgCTGF-纤维蛋白胶。术后第1、4、10周用荧光免疫组织化学分析法显示Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF在损伤处的表达与分布情况,直观撕裂处的愈合情况。结果:体外实验第14天,定量RT-PCR结果显示,100ng/mlCTGF组中的Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGFmRNA表达比PBS对照组,明显增加。体内实验的荧光免疫组织化学结果显示,在术后第10周,CTGF治疗组中的Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF已完全填充撕裂损伤处。PBS-蛋白胶组中,损伤处仍有明显裂隙。结论:CTGF可促进半月板无血管区重要的细胞外基质(Ⅰ型、Ⅱ型胶原)的合成,同时损伤处VEGF的表达活性明显增强,有利于促进无血管区半月板撕裂损伤的愈合。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 纤维软骨细胞 半月板 血管内皮生长因子类 胶原Ⅰ型 胶原Ⅱ型
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转化生长因子β诱导骨髓间充质干细胞分化为半月板纤维软骨细胞 被引量:3
2
作者 杨均 李澎 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第15期2412-2419,共8页
背景:骨髓间充质干细胞可被诱导分化为纤维软骨细胞作为组织工程中的种子细胞,而细胞因子转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β1)和TGF-β3在诱导分化中的作用,目前仍是研究热点。目的:综述TGF-β1和TGF-β3诱导骨髓... 背景:骨髓间充质干细胞可被诱导分化为纤维软骨细胞作为组织工程中的种子细胞,而细胞因子转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β1)和TGF-β3在诱导分化中的作用,目前仍是研究热点。目的:综述TGF-β1和TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的相关文献,为进一步指导TGF-β诱导骨髓间充质干细胞分化为纤维软骨细胞提供理论依据,同时为今后的临床上半月板损伤和退化的治疗提供新策略。方法:计算机检索PubMed、中国知网和万方医学网数据库1990年1月至2022年3月收录的文献。英文数据库检索词:“Transforming Growth Factor beta 1,Transforming Growth Factor beta 3,Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,meniscus,fibrochondrocyte”,中文数据库检索词:“TGF-β1,TGF-β3、骨髓间充质干细胞、半月板、纤维软骨细胞”,根据筛选标准,最终纳入78篇文献进行综述。结果与结论:①TGF-β主要分为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3共3种亚型,其中研究较多的细胞因子是TGF-β1和TGF-β3。②TGF-β主要通过TGF-β/Smad信号通路激活细胞核内的SOX9转录因子进而诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。③TGF-β1可诱导骨髓间充质干细胞向透明软骨细胞分化,伴随培养时间的延长,透明软骨细胞可发生去分化变成纤维软骨细胞;④TGF-β3主要诱导骨髓间充质干细胞向纤维软骨细胞分化,同时促进Ⅰ型胶原和蛋白聚糖合成分泌。⑤目前,关于半月板损伤和退化的治疗,临床上采用的治疗方案均不理想,组织工程的出现为其治疗提供了新的策略,具体方法是将诱导因子和骨髓间充质干细胞植入到半月板损伤部位,可以起到恢复半月板功能及再生纤维软骨组织的作用,但是目前实验尚处于体外和动物模型阶段,其在临床上用于半月板受损的治疗和可用性仍需要后续大量的临床研究去研究探索。 展开更多
关键词 半月板 纤维软骨细胞 骨髓间充质干细胞 转化生长因子Β TGF-Β1 TGF-Β3 透明软骨细胞 细胞分化 组织工程 机制 综述
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Enhancement of meniscal repair in the avascular zone using connective tissue growth factor in a rabbit model 被引量:4
3
作者 HE Wei LIU Yu-jie WANG Zhi-gang GUO Zi-kuan WANG Ming-xin WANG Ning 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2011年第23期3968-3975,共8页
Background Connective tissue growth factor (CTGF) is a secreted protein containing several domains that mediate interactions with growth factors, integrins and extracellular matrix components. CTGF plays an importan... Background Connective tissue growth factor (CTGF) is a secreted protein containing several domains that mediate interactions with growth factors, integrins and extracellular matrix components. CTGF plays an important role in extracellular matrix production by its ability to mediate collagen deposition during wound healing. CTGF also induces neovascularization in vitro, suggesting a role in angiogenesis in vivo. We herein evaluated whether CTGF was required for extracellular matrix synthesis of meniscal fibrochondrocytes and/or angiogenesis during the repair of meniscal tears. Methods Meniscal fibrochondrocytes were isolated from the inner-I/2 of rabbit meniscus by trypsin collagenase treatment and further treated with 100 ng/ml CTGF in vitro. Characterization of fibrochondrocytes was identified by flow cytometry analyzing CD31, CD44, CD45 and CD105, and was further tested by type II collagen immunocytochemistry. Changes in gene expression of meniscal fibrochondrocytes were monitored by quantitative real-time polymerase chain reaction. Histological sections prepared from a 3-mm portion of a longitudinal tearing defect in the middle of the rabbit meniscus were subjected to fluorescence-immunohistochemistry analysis at 1, 4 and 10 weeks following surgical treatment with 1.5 IJg of CTGF/fibrin-glue composites. Results Quantitative RT-PCR assay showed that types I and II collagen and vascular endothelial growth factor mRNA expression in the 100 ng/ml CTGF group were remarkably enhanced as compared to levels in the no-dose group at 14 days ((2.38±0.63) fold, (2.96±0.87) fold, (2.14±0.56) fold, respectively). Likewise, fluorescence-immunohistochemical analysis revealed that in the group implanted with CTGF-fibrin glue, types Ⅰand Ⅱcollagen, as well as the capillaries, completely filled the defect by 10 weeks, postoperatively. In contrast, only soft tissue repair occurred when PBS-fibrin glue was implanted. Conclusions These findings suggest that CTGF can significantly promote extracellular mat 展开更多
关键词 connective tissue growth factor fibrochondrocyte MENISCUS vascular endothelial growth factor type I collagen
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人半月板纤维软骨细胞在纤维蛋白胶中体外培养 被引量:4
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作者 祝云利 付捷 +3 位作者 缪志和 荆鑫 吴海山 周维江 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2001年第8期795-796,共2页
目的 :研究纤维软骨细胞的分离培养及在纤维蛋白胶中三维培养时的表现。方法 :( 1)分离培养人半月板纤维软骨细胞 ;( 2 )制备纤维蛋白胶 ;( 3)在纤维蛋白中培养细胞 ,观察其表现并测定生长曲线、倍增时间 ;( 4 )通过透射电镜、AB -PAS... 目的 :研究纤维软骨细胞的分离培养及在纤维蛋白胶中三维培养时的表现。方法 :( 1)分离培养人半月板纤维软骨细胞 ;( 2 )制备纤维蛋白胶 ;( 3)在纤维蛋白中培养细胞 ,观察其表现并测定生长曲线、倍增时间 ;( 4 )通过透射电镜、AB -PAS染色、Ⅱ型胶原免疫组化检查等 ,了解细胞生长及软骨基质的分泌情况。结果 :( 1)原代培养细胞呈线形 ,能在纤维蛋白中保持 ;( 2 )细胞在纤维蛋白中倍增时间为第 1~ 4d :7.0d ,第 5~ 7d :2 .3d ;( 3)AB -PAS染色 ( +)、Ⅱ型胶原免疫组化检查 ( +)。结论 :人半月板纤维软骨细胞能在纤维蛋白胶中增殖 。 展开更多
关键词 纤维软骨 细胞培养 纤维蛋白胶 培养
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超声表面冲击对Ti6Al4V生物相容性的影响 被引量:5
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作者 曹小建 王宠 王清远 《工程科学与技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期196-202,共7页
钛合金植入物与人骨弹性模量相差较大,易产生应力遮挡而导致假体松动和骨质变化,临床上虽然在钛合金假体表面镀生物活性膜,但膜厚度仅数微米,有必要研究能同时提高植入物组织相容性和生物力学性能,又降低应力遮挡效应的方法。在静荷载2... 钛合金植入物与人骨弹性模量相差较大,易产生应力遮挡而导致假体松动和骨质变化,临床上虽然在钛合金假体表面镀生物活性膜,但膜厚度仅数微米,有必要研究能同时提高植入物组织相容性和生物力学性能,又降低应力遮挡效应的方法。在静荷载25 N、振幅30μm、冲击数36 000次/mm2下对Ti6Al4V钛合金进行超声表面冲击强化(UNSM)处理,对UNSM处理后的表面形貌、强塑性变形层(表面纳米层)、模拟体液中的极化曲线、腐蚀形貌、表面沉积物、预腐蚀两周后的疲劳行为、纤维软骨细胞的黏附等进行分析,并与复合表面(UNSM+TiN镀膜)处理试样进行对比。结果表明:超声冲击后表层获得约40μm深的纳米晶层;尽管冲击后Ti6Al4V表面的腐蚀电流密度和点腐蚀增强了,但模拟体液预浸泡两周后Ti6Al4V钛合金108周次的疲劳强度仍被显著提升;内部裂纹均萌生于100~250μm深的粗晶变形层内,因为该粗晶变形层内残余压应力迅速减小,塑性和韧性较表面纳米层低;经模拟体液浸泡后,纳米表面形成的钙磷沉积物结节显著增多;表面积的增加和合适的表面粗糙度促进了软骨纤维细胞的早期黏附;UNSM处理后再覆盖Ti N膜能进一步提升Ti6Al4V的生物相容性。纳米晶弹性模量的减小和晶粒尺寸的梯度变化有助于对抗应力遮挡,复合表面纳米化技术对金属植入物的发展有积极的意义。 展开更多
关键词 超声表面冲击 极化曲线 模拟体液 腐蚀疲劳 纤维软骨细胞
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兔颞下颌关节盘纤维软骨细胞分离培养的实验研究 被引量:4
6
作者 匡世军 张志光 +3 位作者 何一青 廖明庭 苏凯 张娟 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期318-321,共4页
目的探讨颞下颌关节盘纤维软骨细胞的分离及体外扩增的条件,观察关节盘纤维软骨细胞体外培养的生物学特性。方法在无菌条件下,切取2周龄新西兰白兔颞下颌关节盘,剪至1.0m3的碎块,0.5g/mL胰酶消化30min、胶原酶消化4h,200目筛网过滤,获... 目的探讨颞下颌关节盘纤维软骨细胞的分离及体外扩增的条件,观察关节盘纤维软骨细胞体外培养的生物学特性。方法在无菌条件下,切取2周龄新西兰白兔颞下颌关节盘,剪至1.0m3的碎块,0.5g/mL胰酶消化30min、胶原酶消化4h,200目筛网过滤,获得关节盘纤维软骨细胞。在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化及贴壁率,甲苯胺蓝染色、、胶原免疫组化染色鉴定,测定其生长曲线。透射电镜观察细胞超微结构。结果原代培养的关节盘纤维软骨细胞12h可观察到贴壁细胞,48h贴壁细胞逐渐增多,大部分细胞为短梭形,小部分为多角形,第4天可见多个细胞克隆形成,第8天时细胞彼此相连,铺满平底,细胞以梭形为主,部分多角形。传代后12h贴壁率达90%,大部分为多角形,4~5d即可张满瓶底。甲苯胺蓝染色可见异染颗粒,、胶原免疫组化染色胞浆内可见棕黄色颗粒。细胞内线粒体、内质网发达、高尔基体发达。结论体外分离培养的兔颞下颌关节盘纤维软骨细胞具有较强的增殖能力。 展开更多
关键词 纤维软骨 细胞培养 组织工程 关节盘
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超声表面冲击及喷丸强化后TC4钛合金的生物相容性 被引量:1
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作者 赵雅君 曹小建 +1 位作者 金江 丁华建 《南通大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第2期31-35,共5页
分别在静荷载25 N、振幅30μm、冲击数36 000次/mm2的条件下对TC4钛合金进行超声表面冲击强化(UNSM)处理、采用传统喷丸技术(硬度45~50 HRC且直径1 mm的钢丸,阿尔门强度0.10~0.15 mm A,覆盖率100%)对TC4进行喷丸处理,然后对比研究两种... 分别在静荷载25 N、振幅30μm、冲击数36 000次/mm2的条件下对TC4钛合金进行超声表面冲击强化(UNSM)处理、采用传统喷丸技术(硬度45~50 HRC且直径1 mm的钢丸,阿尔门强度0.10~0.15 mm A,覆盖率100%)对TC4进行喷丸处理,然后对比研究两种工艺对TC4生物相容性的影响,包括体液腐蚀行为、表面钙磷的矿化沉积及纤维软骨细胞早期黏附行为,并对处理后TC4钛合金的表面形貌、极化曲线、腐蚀形貌、细胞黏附等进行分析.结果表明:超声冲击可让TC4维持较好的平整度,而喷丸使材料表面粗糙度明显增加;UNSM处理和喷丸处理均在TC4表面产生点腐蚀坑,UNSM处理后的表面点腐蚀坑最多,而喷丸处理后TC4的耐体液腐蚀性能最差;两种表面处理均可增强TC4表面钙磷元素的沉积,且两种表面处理均可增进纤维软骨细胞的早期黏附,UNSM作用更佳. 展开更多
关键词 超声冲击 喷丸 TC4钛合金 生物相容性 钙磷沉积 纤维软骨细胞
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碱性成纤维细胞生长因子转染对半月板纤维软骨细胞增殖、细胞周期及胶原合成影响的研究 被引量:6
8
作者 张经纬 曾炳芳 赵金忠 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1253-1256,共4页
目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板... 目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板纤维软骨细胞分为实验组(A组)、对照组(B组)和空白组(C组),3组细胞分别以2×104个/孔接种于24孔培养板。细胞生长至60%融合时,A组与克隆有bFGF基因的重组慢病毒载体悬液共培养,B组与不携带任何基因的慢病毒悬液共培养,C组未接受外加处理。共培养48 h后检测3组的细胞周期、胶原合成能力、培养液中bFGF的表达及不同时间各组细胞的细胞增殖能力的变化。结果共培养48 h后在A组测出bFGF浓度为870±60 pg/m l,而B、C组培养液中未能检测出bFGF的表达;共培养6 d后,M TT法检测,A组吸光度(A)值0.427±0.037与B组0.320±0.042和C组0.308±0.034比较差异有统计学意义(P<0.01)。A组细胞周期较B、C组缩短,A组细胞G1期,S期和G2/M期的时间分别为16.28、12.60和11.04 h;而B、C组分别为23.61、16.90和21.33 h及21.56、19.80和21.41 h;A组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组细胞每分衰变数(7 281.69±805.50)高于B组(5 916.40±698.11)和C组(5 883.57±922.63),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论借助慢病毒载体能有效实现bFGF基因在半月板纤维软骨细胞的转染;bFGF基因转染能促进半月板纤维软骨细胞的增殖和胶原合成能力。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 半月板纤维软骨细胞 基因转染
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丝素—胶原复合物半月板支架负载纤维软骨细胞的实验观察 被引量:8
9
作者 刘和风 王俊飞 +3 位作者 黄际河 秦泗通 徐华 蒋青 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第15期27-28,共2页
目的探讨蚕丝蛋白纤维(丝素)—胶原复合半月板支架作为兔纤维软骨细胞组织工程支架的可行性。方法构建丝素—胶原复合物半月板支架,将体外培养扩增的兔半月板纤维软骨细胞接种于该支架上,加入转化生长因子(TGF)-β1三维立体培养,倒置相... 目的探讨蚕丝蛋白纤维(丝素)—胶原复合半月板支架作为兔纤维软骨细胞组织工程支架的可行性。方法构建丝素—胶原复合物半月板支架,将体外培养扩增的兔半月板纤维软骨细胞接种于该支架上,加入转化生长因子(TGF)-β1三维立体培养,倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态。结果丝素—胶原复合物能制成理想形状和大小的三维立体多孔半月板支架,纤维软骨细胞能良好地贴附于支架孔壁上。结论丝素—胶原复合物半月板支架细胞相容性良好,是半月板组织工程支架的可选材料。 展开更多
关键词 半月板 蚕丝 胶原 纤维软骨细胞 组织工程
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半月板纤维软骨细胞与壳聚糖/聚磷酸钙体外复合培养的实验研究 被引量:6
10
作者 付维力 王践云 +4 位作者 李箭 万昌秀 叶京兵 罗大辉 李棋 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期53-58,共6页
目的:观察半月板纤维软骨细胞在不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(chitosan/calciumpolyphosphate,CS/CPP)支架材料上的生长状况,优选最佳配比CS/CPP生物材料作为组织工程半月板支架材料。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔... 目的:观察半月板纤维软骨细胞在不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(chitosan/calciumpolyphosphate,CS/CPP)支架材料上的生长状况,优选最佳配比CS/CPP生物材料作为组织工程半月板支架材料。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第3代,并对其进行表型鉴定。采用共混-化学交联固化-冷冻干燥法将CS、醛基化海藻酸钠(aldehyde alginate,ADA)、CPP有机地结合起来,制备4种不同配比的新型组织工程半月板复合支架材料。将体外分离培养的第3代半月板细胞,通过二次沉淀接种法将其种植于不同配比的CS/CPP支架上,体外培养7天,采用相差倒置显微镜、SEM、HE染色观察细胞在支架上的形态、黏附、生长情况。结果:体外分离培养的第3代半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型。相差倒置显微镜下可见,细胞在支架上黏附良好;扫描电镜下可见,细胞在支架上均匀分布,细胞多数呈多角形,并有基质分泌;HE染色结果显示,有细胞长入到三维支架材料内部。其中,半月板细胞在3:7的CS/CPP支架材料上单位面积内数目最多,生长最旺盛,细胞外基质分泌最多。结论:三维多孔的CS/CPP复合材料能促进半月板纤维软骨细胞的黏附、生长和增殖,其中3:7的CS/CPP支架材料细胞相容性和生物活性最好,最适于半月板纤维软骨细胞粘附和生长,并且能促进半月板细胞增殖和维持其表型,有望成为组织工程半月板良好的支架载体。 展开更多
关键词 半月板纤维软骨细胞 壳聚糖/聚磷酸钙 复合支架材料 组织工程半月板
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同步辐射X线相衬成像技术在兔髌骨-髌腱连接点纤维软骨细胞的三维可视化应用研究 被引量:5
11
作者 陈华斌 胡建中 +6 位作者 周京泳 郑成 王占稳 陈灿 曹勇 殷宪振 吕红斌 《核技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1-8,共8页
利用同步辐射X射线相衬成像技术(Synchrotron Radiation-based X-ray Phase-contrast Computed Tomography,SR-XPCT)对兔髌骨-髌腱连接点(Patella-Patellar Tendon Junction,PPTJ)移行区的纤维软骨细胞进行三维可视化及量化表征。正常... 利用同步辐射X射线相衬成像技术(Synchrotron Radiation-based X-ray Phase-contrast Computed Tomography,SR-XPCT)对兔髌骨-髌腱连接点(Patella-Patellar Tendon Junction,PPTJ)移行区的纤维软骨细胞进行三维可视化及量化表征。正常骨成熟的新西兰PPTJ经多聚甲醛固定、梯度酒精脱水后,于上海光源X射线成像与生物医学应用光束线站进行扫描;采集的原始图像经数字减影、相位恢复、切片重构、位数转换后进行三维重构分析;标本扫描后进行传统组织学验证。SR-XPCT能成功获取PPTJ及其移行区纤维软骨细胞的三维高清图像,并对移行区纤维软骨细胞进行了量化表征:平均直径为(10.139±1.265)?m;平均体积为(291.187±87.283)μm3,体积分布在200-400μm3之间的占75.4%;平均球形度为0.711±0.079,球形度在0.605-0.805之间的纤维软骨细胞约占84.9%。SR-XPCT作为一种先进的、直观准确的可视化骨腱连接点的三维微观形态结构研究方法,为骨腱连接点损伤修复的三维形态学研究提供了新方法、新思路。 展开更多
关键词 同步辐射 相位衬度成像 骨腱连接点 纤维软骨细胞 三维
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兔半月板纤维软骨细胞在纤维蛋白凝胶中体外培养的生物学特性 被引量:4
12
作者 刘晓阳 汤继文 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2003年第18期1271-1273,共3页
目的:研究兔半月板纤维软骨细胞的分离、培养及在纤维蛋白凝胶中三维培养时的生物学特性。方法:(1)分离、培养兔半月板纤维软骨细胞;(2)制备纤维软骨细胞与纤维蛋白凝胶复合物,在纤维蛋白中培养细胞;(3)通过倒置相差显微镜,HE染色、电... 目的:研究兔半月板纤维软骨细胞的分离、培养及在纤维蛋白凝胶中三维培养时的生物学特性。方法:(1)分离、培养兔半月板纤维软骨细胞;(2)制备纤维软骨细胞与纤维蛋白凝胶复合物,在纤维蛋白中培养细胞;(3)通过倒置相差显微镜,HE染色、电镜检查作形态学观察;(4)通过测定生长曲线及AB-PAS染色、Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化检查,了解细胞生长特性及软骨基质的分泌情况。结果:(1)单层培养的纤维软骨细胞呈线形,部分呈多角形,在纤维蛋白中的纤维软骨细胞为圆形,表面细胞呈多角形;(2)细胞在纤维蛋白中培养时,对数生长期明显延长;(3)AB-PAS染色(+),Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化检查(+)。结论:兔半月板纤维软骨细胞在纤维蛋白凝胶中能够增殖,保持其表型和分泌胞外基质。 展开更多
关键词 纤维软骨 细胞培养 纤维蛋白胶
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CPPf/PLLA支架负载人半月板纤维软骨细胞的体外实验研究 被引量:3
13
作者 林炎水 杨柳 +2 位作者 戴刚 李忠 陈光兴 《四川医学》 CAS 2005年第8期812-813,共2页
目的探讨聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸(CPPf/PLLA)支架负载人半月板纤维软骨细胞的有效性和可行性。方法将人半月板纤维软骨细胞接种CPPf/PLLA支架并在体外培养,应用倒置相差显微镜和扫描电镜观察纤维软骨细胞的粘附、生长和增殖情况,培养1... 目的探讨聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸(CPPf/PLLA)支架负载人半月板纤维软骨细胞的有效性和可行性。方法将人半月板纤维软骨细胞接种CPPf/PLLA支架并在体外培养,应用倒置相差显微镜和扫描电镜观察纤维软骨细胞的粘附、生长和增殖情况,培养14d,行HE、TB(甲苯胺蓝)及Ⅰ型胶原免疫组化染色观察纤维软骨组织形成情况。结果纤维软骨细胞在支架上粘附、生长和增殖良好,体外培养14d能形成较成熟的纤维软骨组织。结论CPPf/PLLA支架具有良好的细胞相容性,可作为负载人纤维软骨细胞的载体。 展开更多
关键词 组织工程 半月板 纤维软骨细胞 支架
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大鼠半月板纤维软骨细胞的体外培养和生物学特征鉴定 被引量:3
14
作者 杜国庆 桑晓文 +5 位作者 王楠 石瑛 熊轶喆 杨光月 陈元川 詹红生 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第15期2829-2833,共5页
目的:体外分离、培养和鉴定大鼠半月板纤维软骨细胞,为研究大鼠半月板纤维软骨细胞的损伤修复提供简单、可行的细胞培养方法。方法:机械分离大鼠膝关节内外侧半月板,0.1%Ⅱ型胶原酶消化配合机械吹打,10%FBS的培养基行原代和传代培养,倒... 目的:体外分离、培养和鉴定大鼠半月板纤维软骨细胞,为研究大鼠半月板纤维软骨细胞的损伤修复提供简单、可行的细胞培养方法。方法:机械分离大鼠膝关节内外侧半月板,0.1%Ⅱ型胶原酶消化配合机械吹打,10%FBS的培养基行原代和传代培养,倒置显微镜动态观察不同时间点半月板纤维软骨细胞的形态及生长情况,鉴定采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法。CCK-8法检测大鼠纤维软骨细胞增殖。结果:在不同时间点,细胞表现出不同的生理形态,由多角形或短梭形变为梭形,最终呈现出三角形或椭圆形,并随着时间延长,细胞增殖能力逐渐增加。细胞培养48 h和72 h的OD值分别明显高于培养24 h的OD值(P<0.05),差异具有统计学意义。细胞培养48 h和72 h的OD值相比较,72 h的OD值虽有增加,但并无统计学差异(P>0.05)。经甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性。结论:该方法培养的细胞形态稳定,增殖能力强,具有体内纤维软骨细胞的生物学基本特性,可为后续实验提供简单、可靠的原代大鼠半月板纤维软骨细胞培养方法。 展开更多
关键词 半月板 纤维软骨细胞 体外培养 生物学鉴定
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软骨形态发生蛋白1诱导犬真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的实验研究 被引量:3
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作者 赵贵庆 崔磊 曹谊林 《组织工程与重建外科杂志》 2011年第3期139-142,150,共5页
目的探讨软骨形态发生蛋白1(Cartilage-derived morphogenetic protein-1,CDMP1)诱导体外培养的犬真皮成纤维细胞(Dermal fibroblasts,DFs)向软骨细胞表型分化的可行性。方法应用CDMP1细胞诱导液对体外扩增至第4代的犬DFs进行诱导培养,... 目的探讨软骨形态发生蛋白1(Cartilage-derived morphogenetic protein-1,CDMP1)诱导体外培养的犬真皮成纤维细胞(Dermal fibroblasts,DFs)向软骨细胞表型分化的可行性。方法应用CDMP1细胞诱导液对体外扩增至第4代的犬DFs进行诱导培养,观察细胞的形态变化,以免疫荧光染色和RT-PCR检测细胞中软骨特异蛋白的表达情况。结果诱导培养6 d后,实验组部分DFs呈星形或多角形,免疫组化染色显示有软骨特异的II型胶原分泌,RT-PCR检测也表明有Ⅱ型胶原、aggrecan和SOX9表达。但是诱导培养10 d后,均转为阴性。结论 CDMP1可以诱导犬DFs向软骨细胞表型分化,有可能成为组织工程化纤维软骨的种子细胞。 展开更多
关键词 真皮成纤维细胞 纤维软骨细胞 软骨形态发生蛋白-1 组织工程
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大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、培养与鉴定 被引量:2
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作者 杨军英 林金艳 韩菲 《西北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第5期68-72,共5页
探讨体外大鼠半月板纤维软骨细胞分离培养与鉴定的实验方法,观察不同代次间细胞的形态学特征.手术分离大鼠双膝内外侧半月板,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶消化法提取细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定细胞,低糖DMEM完全培养液常规培养... 探讨体外大鼠半月板纤维软骨细胞分离培养与鉴定的实验方法,观察不同代次间细胞的形态学特征.手术分离大鼠双膝内外侧半月板,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶消化法提取细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定细胞,低糖DMEM完全培养液常规培养.结果表明,原代半月板细胞形态呈多角形,轮廓清晰,8~10d可铺满瓶底;传代后的1~3代细胞,其贴壁及增殖能力加强,生长状态良好;传至4~5代尤其是第5代之后,细胞表型不稳定,密度稀疏,形态以长梭形为主且不规则,清晰度下降,传代周期延长;细胞鉴定结果呈阳性.双酶消化和低糖DMEM完全培养液常规培养可以获得具有良好生物学特性的半月板细胞,第4代之前的半月板细胞可以为运动损伤的组织工程学研究提供种子细胞. 展开更多
关键词 半月板 纤维软骨细胞 体外培养 鉴定
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脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响 被引量:1
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作者 郭维民 刘舒云 +6 位作者 高钺 黄靖香 彭江 汪爱媛 王玉 卢世璧 郭全义 《中国医药生物技术》 2015年第3期218-222,共5页
目的探讨脱细胞半月板细胞外基质(dMECM)对传代半月板细胞增殖、细胞活性以及细胞表型的影响。方法用CCK-8法检测dMECM对半月板细胞增殖的影响;将P3代的内侧半月板纤维软骨细胞种植在d MECM修饰盖玻片上,以未修饰盖玻片为对照,体外培养7... 目的探讨脱细胞半月板细胞外基质(dMECM)对传代半月板细胞增殖、细胞活性以及细胞表型的影响。方法用CCK-8法检测dMECM对半月板细胞增殖的影响;将P3代的内侧半月板纤维软骨细胞种植在d MECM修饰盖玻片上,以未修饰盖玻片为对照,体外培养7、14d后进行细胞活性检测,糖胺多糖、胶原分泌含量测定并用RT-PCR检测半月板细胞特异性基因mRNA表达变化。结果 CCK-8结果证实,与对照组比较,生长在dMECM修饰盖玻片上的P3代兔半月板纤维软骨细胞具有更好的细胞增殖特性(P<0.05);细胞死/活染色结果证实dMECM组可维持更好的细胞活性;糖胺多糖和胶原定量检测结果证实dMECM组在第7、14天时,比对照组分泌更多的糖胺多糖和胶原(P<0.05)。RT-PCR的检测结果证实体外培养7、14 d时,dMECM组II型胶原mRNA表达显著上调(P<0.05)。结论 dMECM可以很好地促进半月板纤维软骨细胞的增殖、分化以及细胞活性的维持,可能是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料之一。 展开更多
关键词 细胞外基质 关节半月板 组织工程 生物相容性材料 脱细胞 纤维软骨细胞
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Ihh和PTHrP信号分子在猪跟腱止点的表达及意义
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作者 韩雪松 庄颜峰 +2 位作者 张志宏 王万明 郭林 《中国骨与关节损伤杂志》 2017年第8期823-826,共4页
目的观察猪跟腱止点各层组织结构特点及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、Ⅹ型胶原(ColⅩ)、纤维软骨层细胞外基质以及印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)在跟腱止点中的表达分布和定位情况。方法根据跟腱止点的组织结... 目的观察猪跟腱止点各层组织结构特点及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、Ⅹ型胶原(ColⅩ)、纤维软骨层细胞外基质以及印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)在跟腱止点中的表达分布和定位情况。方法根据跟腱止点的组织结构层次的不同,利用HE染色、番红O/固绿染色、天狼猩红染色以及免疫组织化学技术,分别观察跟腱止点各层组织结构特点,通过免疫组织化学染色观察ColⅠ、ColⅡ、ColⅩ、纤维软骨层细胞外基质以及Ihh和PTHr P在跟腱止点中的表达分布和定位情况。结果显微镜下可清晰观察到猪跟腱止点解剖层次,主要分为4个层次,波浪状的腱纤维、纤维软骨层(也称非钙化软骨层)、钙化软骨层和骨。跟腱止点组织Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色证实纤维软骨层细胞外基质主要由ColⅠ、ColⅡ构成。跟腱止点组织中Ihh和PTHrP免疫组织化学染色呈阳性表现,Ihh和PTHrP阳性区域主要集中在跟腱止点的纤维软骨层和钙化层。同时可以观察到在肥大软骨细胞细胞浆中出现浓聚现象。结论跟腱止点纤维软骨层由纤维软骨细胞构成,是跟腱止点的重要结构,Ihh和PTHrP在跟腱止点纤维软骨层和钙化层的定位表达,提示两者在跟腱止点的形成过程发挥重要的调节作用。 展开更多
关键词 跟腱止点 纤维软骨细胞 印度豪猪蛋白 甲状旁腺激素相关蛋白 免疫组织化学染色
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猪跟腱止点纤维软骨细胞的分离、体外培养及鉴定
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作者 韩雪松 王万明 +2 位作者 庄颜峰 张志宏 陈庆泉 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期1685-1690,共6页
[目的]探讨猪跟腱止点纤维软骨层细胞的分离、培养及鉴定方法,观察纤维软骨细胞的生物学特性。[方法]体视显微镜下切取贵州迷你小香猪跟腱止点纤维软骨层组织并剪碎,经过胰蛋白酶和II型胶原酶两步酶消法,后在含10%FBS的DMEM进行培养和传... [目的]探讨猪跟腱止点纤维软骨层细胞的分离、培养及鉴定方法,观察纤维软骨细胞的生物学特性。[方法]体视显微镜下切取贵州迷你小香猪跟腱止点纤维软骨层组织并剪碎,经过胰蛋白酶和II型胶原酶两步酶消法,后在含10%FBS的DMEM进行培养和传代,使用HE、阿利新蓝、Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定。[结果]成功分离获得纤维软骨细胞。鉴定证实实验细胞具有纤维软骨细胞共同生物学特性。HE染色:细胞浆蛋白多糖成分被染成深浅不同的粉红色;阿利新蓝染色:纤维软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒,细胞核深染,细胞周围有少量异染颗粒出现。Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色:纤维软骨细胞胞质被染成棕黄色。[结论]成功分离和培养了猪跟腱止点纤维软骨层细胞,针对纤维软骨细胞特性,通过不同染色方法进行了联合鉴定。本实验建立的腱止点纤维软骨细胞分离、培养方法是一种简便可靠的方法。 展开更多
关键词 腱止点 纤维软骨细胞 培养 鉴定 免疫组织化学染色
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力学刺激通过整合素α5β1介导半月板纤维软骨细胞的凋亡 被引量:2
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作者 杨化群 付岳松 王法正 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第8期1134-1139,共6页
目的研究力学刺激对半月板纤维软骨细胞(meniscal fibrochondrocytes,MFs)凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法通过酶消化法从大鼠半月板组织中分离MFs,实验首先分为两组:对照组(无力学刺激)和力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d),... 目的研究力学刺激对半月板纤维软骨细胞(meniscal fibrochondrocytes,MFs)凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法通过酶消化法从大鼠半月板组织中分离MFs,实验首先分为两组:对照组(无力学刺激)和力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d),通过力学刺激仪器诱导MFs损伤细胞模型,CCK-8法和流式细胞术分别检测力学刺激对MFs活力和凋亡的影响。然后将实验分为四组:对照组(无力学刺激)、力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d)、对照siRNA(NC-siRNA)力学刺激组和干扰α5β1(α5β1 siRNA)力学刺激组,其中α5β1 siRNA和NC-siRNA力学刺激组细胞通过lipofectamine 2000将α5β1 siRNA和对照siRNA转染到MFs,然后进行力学刺激;CCK-8法和流式细胞术分别检测α5β1 siRNA和力学刺激对MFs活力和凋亡的影响;Western blot检测力学刺激和α5β1 siRNA对MFs Bcl2和cleaved caspase3蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示,与对照组细胞活力比较,力学刺激组MFs细胞活力显著降低;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞活力显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式检测结果显示,与对照组比较,力学刺激组MFs细胞凋亡率明显升高;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞凋亡率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示,与对照组比较,力学刺激组MFs细胞Bcl2表达显著降低,α5β1和cleaved caspase3表达明显升高;而与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞Bcl2表达显著升高,α5β1和cleaved caspase3表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论力学刺激可能通过促进整合素α5β1表达,抑制Bcl2表达,促进cleaved caspase3表达,激活线粒体凋亡通路,促进MFs凋亡。 展开更多
关键词 力学刺激 半月板纤维软骨细胞 整合素Α5Β1 细胞凋亡
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