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fgl2凝血酶原酶多肽抗体的制备和应用 被引量：2
1
作者 韩梅芳 宁琴 +4 位作者 严伟明 习东 Laisum Fung Gary Levy 罗小平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期649-652,共4页
目的　利用人工合成多肽制备针对人源、鼠源fgl2凝血酶原酶 (hfgl2、mfgl2 )的特异性多克隆抗体 ,以期用于与fgl2表达异常密切相关的疾病的研究和诊治。方法　根据mfgl2、hfgl2基因编码的氨基酸序列合成多肽 3(Pep3)和多肽 4 (Pep4 ) ,... 目的　利用人工合成多肽制备针对人源、鼠源fgl2凝血酶原酶 (hfgl2、mfgl2 )的特异性多克隆抗体 ,以期用于与fgl2表达异常密切相关的疾病的研究和诊治。方法　根据mfgl2、hfgl2基因编码的氨基酸序列合成多肽 3(Pep3)和多肽 4 (Pep4 ) ,并用化学方法与匙孔血蓝蛋白 (KLH)连接 ,纯品Pep3 KLH和Pep4 KLH免疫动物 ,所制备的抗血清用ELISA、Westernblot和前凝血质活性 (PCA)实验鉴定 ,并采用免疫组化法应用于乙型肝炎患者肝组织中hfgl2的检测。结果　ELISA检测表明 ,所制备的抗血清可分别与Pep3和Pep4发生特异性免疫反应 ;Westernblot结果显示 ,抗血清可识别MHV 3感染BALB cJ小鼠腹腔巨噬细胞特异性条带 ,相对分子质量 (Mr)为 6 5× 10 3;PCA实验提示 ,抗血清具有中和mfgl2分子酶活性的作用。对病毒性乙型肝炎患者肝组织免疫组织化学染色发现hfgl2仅在重型乙型肝炎患者高表达 ,而在慢性乙型肝炎和肝硬化患者的肝组织中无表达。结论　所制备的fgl2的多肽抗体 (多克隆抗体 )可识别mfgl2和hfgl2分子 ,具有与抗原特异性结合、中和其酶活性的特征 ,为深入研究这一新发现的分子提供了有力的科学手段。 展开更多
关键词 fg12凝血酶原 酶多肽抗体 3型鼠肝炎病毒 纤维介素
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hfg12凝血酶原酶短干扰RNA表达质粒的构建及其效应 被引量：1
2
作者 习东 李黎 +5 位作者 高随 朱传龙 郭健文 王鸣 罗小平 宁琴 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期930-934,共5页
目的探索人fg12凝血酶原酶（hfg12）短干扰RNA（siRNA）在体外对hfg12凝血酶原酶基因表达的干预效应。方法构建产生hfg12短发夹状RNA（shRNA）的载体Phfg12shRNA，将其与hfg12-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因表达质粒pEGFPhfg12共... 目的探索人fg12凝血酶原酶（hfg12）短干扰RNA（siRNA）在体外对hfg12凝血酶原酶基因表达的干预效应。方法构建产生hfg12短发夹状RNA（shRNA）的载体Phfg12shRNA，将其与hfg12-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因表达质粒pEGFPhfg12共转染到中国仓鼠卵母细胞（CHO细胞），转染48h后，倒置荧光显微镜下观察EGFP在CHO细胞中的表达，并通过流式细胞仪检测荧光细胞阳性率。将Phfg12shRNA和hfg12表达质粒pcDNA3．1-hfg12共转染到CHO细胞，通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测hfg12基因转录和蛋白表达水平的变化。分为4组：共转染P—hfg12shRNA和pcDNA3．1-hfg12为干预组，共转染无关序列shRNA表达质粒和pcDNA3．1-hfg12为非相关干预组，仅转染pcDNA3．1-hfg12为未干预组，不转染任何质粒为空白组。结果在CHO细胞中，含Phfg12shRNA的干预组较未干预组和非相关干预组的绿色荧光强度明显减弱，荧光细胞数明显减少；荧光表达阳性细胞率：干预组α为6．5％±0．2％，未干预组α为40．1％±1．8％，两组比较，Χ^2=8．056，P〈0．01，差异有统计学意义。抑制效率达85．5％。hfg12shRNA显著抑制了hfg12mRNA和蛋白质的表达，干预组hfg12mRNA水平为0．11±0．01，未干预组为0．84±0．06，两组比较，F=10．7，P〈0．01，差异有统计学意义。结论P—hfg12shRNA可在体外高效特异地抑制hfg12基因转录和蛋白的表达，为进一步的体内干扰实验奠定了基础。 展开更多
关键词 肝功能衰竭 RNA CHO细胞 fg12凝血酶原酶
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fg12凝血酶原酶的研究进展 被引量：1
3
作者 李学军 《国外医学（输血及血液学分册）》 2002年第4期318-320,共3页
fgl2凝血酶原酶是一种可直接激活凝血酶原的促凝因子,其结构与纤维蛋白原的β、γ链有高度同源性,与人、小鼠的暴发性肝炎的发生有密切关系,也可能和人类的其它疾病有关。
关键词 研究进展 fg12凝血酶原酶 暴发性肝衰竭 自发性流产 分子生物学 促凝因子
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fgl2凝血酶原酶功能及临床意义的新认识
4
作者 苏冠华 王朝晖 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2006年第3期233-235,共3页
fgl2凝血酶原酶是新近发现的一种可直接激活凝血酶原的促凝因子,可能还具有如免疫抑制活性、细胞因子样作用等功能。目前研究表明,fgl2凝血酶原酶与人、小鼠暴发性肝炎,流产,器官移植排斥反应的发生密切相关,也可能参与了传染性非典型... fgl2凝血酶原酶是新近发现的一种可直接激活凝血酶原的促凝因子,可能还具有如免疫抑制活性、细胞因子样作用等功能。目前研究表明,fgl2凝血酶原酶与人、小鼠暴发性肝炎,流产,器官移植排斥反应的发生密切相关,也可能参与了传染性非典型肺炎的发病。对fgl2凝血酶原酶在其中的具体机制和多重角色的进一步阐明,将可能为此类疾病的诊治提供全新的思路。 展开更多
关键词 fg12凝血酶原酶 病毒性肝炎 流产 器官移植 传染性非典型肺炎
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人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域cDNA的扩增、克隆和鉴定
5
作者 李学军 宋善俊 +1 位作者 夏凌辉 魏文宁 《临床血液学杂志》 CAS 2004年第4期224-226,共3页
目的 :扩增人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域 (FRED)cDNA ,构建原核表达质粒。方法 :从外周血单核细胞 (PBMNC)中提取细胞总RNA后 ,应用RT PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,酶切后与pET2 2b(+)原核表达载体连接 ,然后经酶切... 目的 :扩增人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域 (FRED)cDNA ,构建原核表达质粒。方法 :从外周血单核细胞 (PBMNC)中提取细胞总RNA后 ,应用RT PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,酶切后与pET2 2b(+)原核表达载体连接 ,然后经酶切和测序鉴定。结果 :从PBMNC中扩增了 72 7bp长的PCR产物 ,构建的重组原核表达质粒经酶切和测序鉴定与设计的相符。结论 :成功地从PBMNC中扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,构建了FRED pET2 2b(+)原核表达质粒 ,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 基因 fg12凝血酶原酶 FRED结构域
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