新型冠状病毒肺炎(COVID-19)热灭活咽拭子及热灭活后提取核酸样本在4℃保存的稳定性研究

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作者 喻晶 吴夏枫 +1 位作者 刘晓翌 纪玲 《现代检验医学杂志》 CAS 2020年第6期132-134,共3页

目的研究56℃30 min热灭活后的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)咽拭子及提取的核酸在4℃保存的稳定性。方法采用多重荧光定量PCR方法对一例COVID-19患者的咽拭子样本,56℃30 min热灭活后进行COVID-19双靶点(ORF1ab和N基因)核酸检测,把原始... 目的研究56℃30 min热灭活后的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)咽拭子及提取的核酸在4℃保存的稳定性。方法采用多重荧光定量PCR方法对一例COVID-19患者的咽拭子样本,56℃30 min热灭活后进行COVID-19双靶点(ORF1ab和N基因)核酸检测,把原始咽拭子样本及提取的核酸保存在4℃,分别于24,48,72和96h再次检测咽拭子样本及提取核酸中新冠病毒核酸的含量(Ct值),分析热灭活后咽拭子样本及提取核酸在4℃保存的稳定性。结果COVID-19患者的咽拭子样本,56℃30 min热灭活后核酸检测结果为ORF1ab和N基因双阳性,Ct值分别为31.27和30.64,咽拭子样本4℃保存24,48,72和96h后再次检测ORF1ab和N基因的结果为24h(31.41和30.68),48h(34.13和34.28),72h(34.06和34.11)和96h(36.22和40.02)。提取的核酸4℃保存24,48,72和96h后的检测结果为24h(31.64和30.06),48h(31.62和29.95),72h(31.72和29.75)和96h(31.36和30.09)。56℃30 min热灭活的咽拭子样本在4℃保存24h后,对COVID-19核酸的检测无明显影响(偏倚<1%),但4℃保存48~72h,ORF1ab基因核酸降解约7倍,N基因降解约11倍,4℃保存96h,ORF1ab和N基因核酸分别降解30.91倍和666.29倍。但是提取的核酸4℃保存24~96h后,对核酸的检测结果无明显影响(偏倚均小于3%)。结论研究结果表明56℃30 min热灭活后提取的核酸的稳定性比原始咽拭子样本好,热灭活后的咽拭子样本可在4℃保存24h。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎 热灭活 咽拭子样本 提取核酸 4℃保存

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基于微流控芯片的核酸检测技术 被引量：9

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作者 姚梦迪 吕雪飞 邓玉林 《生命科学仪器》 2017年第4期22-28,共7页

核酸检测,作为一种分子诊断技术,包括核酸提取、扩增和检测,对微生物分析、医学诊断、及时就医等起着根本性的作用。目前核酸检测存在工作量大、成本高、而且耗时长等问题,显著影响了其在诊断中的应用。微流控芯片技术以及侧向流层析试... 核酸检测,作为一种分子诊断技术,包括核酸提取、扩增和检测,对微生物分析、医学诊断、及时就医等起着根本性的作用。目前核酸检测存在工作量大、成本高、而且耗时长等问题,显著影响了其在诊断中的应用。微流控芯片技术以及侧向流层析试纸条,具有制作成本低、设备小型化、分析速度快、灵敏度高等特点,且结果可传送给最终用户,在医疗诊断中具有巨大的发展潜力。鉴于前人的相关研究成果,本文首先介绍了微流控技术在核酸检测中的意义,其次介绍了以微流控芯片为平台的核酸提取技术、扩增技术,以及核酸检测技术,在文章最后展望了将核酸的提取、扩增、检测技术集成到一个微装置中的可行性。 展开更多

关键词 核酸提取 核酸扩增 核酸检测 侧向流层析试纸条 微流控芯片

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两种病毒核酸提取方法在流行感冒诊断中的比较 被引量：9

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作者 刘亚楠 李珺 +4 位作者 华文浩 宋淑静 马小亮 董建平 宋蕊 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2017年第5期474-478,共5页

目的探讨离心柱法与Trizol法在流感病毒核酸提取中的差异,以找到提高阳性检出率的方法。方法对592例临床流行感冒(流感)疑似患者采集咽拭子标本,采用离心柱法与Trizol法分别提取病毒核酸,采用巢式PCR进行扩增,扩增产物行1%琼脂糖凝胶电... 目的探讨离心柱法与Trizol法在流感病毒核酸提取中的差异,以找到提高阳性检出率的方法。方法对592例临床流行感冒(流感)疑似患者采集咽拭子标本,采用离心柱法与Trizol法分别提取病毒核酸,采用巢式PCR进行扩增,扩增产物行1%琼脂糖凝胶电泳,以2 000 bp Marker为标准,在564 bp区域出现阳性条带者为流感阳性。结果 592例临床流感疑似患者咽拭子标本中,应用离心柱法提取核酸222例(37.5%)阳性,甲型流感患者212例,乙型流感患者10例。Trizol法提取核酸显示66例(11.1%)患者呈阳性,其中甲型和乙型流感患者分别为63例和3例。自2014年12月至2015年4月,北京地区流感病毒流行以甲型流感病毒为主,乙型流感病例较少。流感的发病与季节相关,集中暴发时期在12月份左右,高发感染人群的年龄段为21~40岁,与性别无关。在病毒提取效率上,离心柱法阳性率显著高于Trizol法,差异具有统计学意义(χ2=111.66,P<0.01)。结论北京地区流感病毒的流行以甲型流感为主。离心柱法提取核酸效率要高于Trizol法,有利于早期进行病原学诊断。 展开更多

关键词 流感病毒 离心柱法 TRIZOL法 核酸提取 提取效率

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基于微流控芯片的核酸检测技术研究进展

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作者 崔莉煊 张宁 +3 位作者 程智 李抄 杜耀华 周卫斌 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2008-2020,共13页

近年来,新冠疫情在世界范围内的大肆传播引发了生物安全危机。快速、准确地监测病原微生物感染对于疫情防控和保障人民生命健康具有重大意义。核酸检测技术在传染病追踪溯源、病原体临床诊断以及患者康复预后等领域发挥了至关重要的作... 近年来,新冠疫情在世界范围内的大肆传播引发了生物安全危机。快速、准确地监测病原微生物感染对于疫情防控和保障人民生命健康具有重大意义。核酸检测技术在传染病追踪溯源、病原体临床诊断以及患者康复预后等领域发挥了至关重要的作用。便携式、小型化的微流控芯片装置为复杂核酸检测流程的高度集成和快速应用提供了有效手段。该文基于核酸检测及微流控芯片技术的快速发展,总结分析了近年来在微流控芯片内进行核酸提取、扩增检测的最新进展以及关键突破,并分析了基于微流控芯片装置的核酸提取工艺以及核酸扩增与检测机理的重要创新、应用潜力以及可能存在的限制因素,最后分类介绍了基于微流控芯片的核酸提取检测一体化平台的流动驱动方式。该文同时探讨了微流控核酸检测技术的未来发展趋势,为核酸检测的集成化与便携式应用提供了新思路。 展开更多

关键词 微流控芯片 核酸提取 核酸检测 即时检测

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基于蔬菜核酸检测实验的探究性实验教学设计

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作者 刘金钏 严慧玲 +1 位作者 郭新波 向楠 《实验室科学》 2024年第1期58-61,65,共5页

以蔬菜中维生素C积累相关基因的检测为例,探索将操作难度相对较高的RNA相关的核酸检测实验应用于本科实验教学中。实践结果表明,学生们可顺利掌握蔬菜中核糖核酸(RNA)的提取、反转录合成互补DNA(cDNA)、PCR扩增检验目的基因表达等RNA相... 以蔬菜中维生素C积累相关基因的检测为例,探索将操作难度相对较高的RNA相关的核酸检测实验应用于本科实验教学中。实践结果表明,学生们可顺利掌握蔬菜中核糖核酸(RNA)的提取、反转录合成互补DNA(cDNA)、PCR扩增检验目的基因表达等RNA相关的实验操作技能,达到了预期的教学目标。本实验项目的实施促进了学生们对多门学科知识的融会贯通,有助于其提高发现问题和解决问题的能力并形成探索精神和创新思维。这对培养具有创新创业实践能力的复合型人才具有重要的作用。 展开更多

关键词 实验教学 RNA提取 反转录PCR 核酸检测

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核酸固相分离方法及其在病原PCR诊断中的应用综述 被引量：2

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作者 李蒙航 赵振军 李佩佩 《化学工业与工程》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期86-95,共10页

病原PCR(Polymerase Chain Reaction)诊断具有快速、灵敏、高修改灵活性等优势,在传染病控制、农业病害防治和食品安全等领域发挥着重要作用。核酸分离作为分子诊断技术的关键步骤,影响着PCR诊断的整体效率、检测灵敏度和准确性,是PCR... 病原PCR(Polymerase Chain Reaction)诊断具有快速、灵敏、高修改灵活性等优势,在传染病控制、农业病害防治和食品安全等领域发挥着重要作用。核酸分离作为分子诊断技术的关键步骤,影响着PCR诊断的整体效率、检测灵敏度和准确性,是PCR诊断局限于实验室使用的关键制约因素之一。核酸固相分离可以避免传统液相分离中相分离不完全、污染严重、样品需求量高、繁琐等弊端,一直是高通量核酸提取过程研究的热点。通过综述近年来核酸固相分离方法的研究进展,通过总结目前具有核酸结合功能的材料开发及与核酸相互作用的机制,概述磁力分离与非磁力固相分离发展现状及在病原PCR诊断应用中的进展,阐述现有核酸固相分离技术存在的局限性,进而探讨核酸固相分离今后的研究方向。 展开更多

关键词 固相分离 核酸提取 磁力分离 PCR诊断

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氧化硅-磁性Fe_3O_4复合纳米粒子的制备及应用 被引量：2

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作者 陈丽娜 舒孟军 +3 位作者 薛莲 周光明 曾献生 盛蓉生 《复合材料学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期186-191,共6页

采用溶胶-凝胶法通过正硅酸四乙酯(TEOS)碱催化水解,在Fe3O4纳米粒子表面包裹氧化硅。利用生物倒置显微镜、场发射透射电镜、X射线衍射仪、激光粒度仪、振动样品磁强计对氧化硅/Fe3O4复合粒子的外貌、粒径及粒径分布、饱和磁化强度、化... 采用溶胶-凝胶法通过正硅酸四乙酯(TEOS)碱催化水解,在Fe3O4纳米粒子表面包裹氧化硅。利用生物倒置显微镜、场发射透射电镜、X射线衍射仪、激光粒度仪、振动样品磁强计对氧化硅/Fe3O4复合粒子的外貌、粒径及粒径分布、饱和磁化强度、化学成分进行了表征。结果表明,所制得的复合粒子性能良好,粒径在15 nm左右,饱和磁化强度为10.9 emu/g。用该磁性纳米复合粒子提取质粒DNA和基因组DNA取得良好的效果,可用于食品中致病菌的分析判定和疾病的基因诊断分析。 展开更多

关键词 氧化硅-Fe3O4复合纳米粒子 TEOS水解 核酸提取 PCR扩增

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一次实验室新型冠状病毒核酸检测单基因假阳性原因分析

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作者 凡小荣 周艳 +2 位作者 王梓璇 邓凯元 高丹 《医学动物防制》 2023年第10期1018-1020,共3页

目的分析一起实验室新型冠状病毒核酸检测单基因假阳性事件产生的原因,避免此类事件再次发生,确保检测结果的准确性,为相关部门制定防治策略和开展工作提供准确的数据参考。方法对试验员、试验试剂耗材、仪器设备、环境条件等因素进行... 目的分析一起实验室新型冠状病毒核酸检测单基因假阳性事件产生的原因,避免此类事件再次发生,确保检测结果的准确性,为相关部门制定防治策略和开展工作提供准确的数据参考。方法对试验员、试验试剂耗材、仪器设备、环境条件等因素进行回顾分析,采用排除法查找本次试验出现假阳性的原因。结果导致本次实验假阳性结果的关键是新冠病毒核酸采样管使用的是样本释放剂,未进行核酸提取过程就直接进行PCR扩增。结论建议实验室应严格按照《新型冠状病毒肺炎防控方案》要求,临床标本检测前对由核酸提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性能验证,对标本特别是重点人群标本进行新冠病毒核酸检测时,采用常规病毒采样管进行样本采集,并选择磁珠法和膜吸附法对标本进行核酸提取后再进行下一步检测,避免不经过核酸提取直接进行PCR扩增。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 核酸提取 核酸检测 单基因 假阳性 分析

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山羊心肌可透析提取物对小鼠脾淋巴细胞RNA合成的影响 被引量：1

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作者 刘嘉瀛 陈萍 《第四军医大学学报》 1990年第1期46-49,共4页

山羊心肌可透析提取物能增强conA刺激的小鼠脾淋巴细胞体外RNA合成。在最适浓度下,这种作用较由同一山羊淋巴组织制备的转移因子(TF)为强(P<0.05),而与免疫所用抗原无关。由免疫与非免疫山羊心肌制备的可透析提取物的增强作用无差异... 山羊心肌可透析提取物能增强conA刺激的小鼠脾淋巴细胞体外RNA合成。在最适浓度下,这种作用较由同一山羊淋巴组织制备的转移因子(TF)为强(P<0.05),而与免疫所用抗原无关。由免疫与非免疫山羊心肌制备的可透析提取物的增强作用无差异。TF与山羊心肌可透析提取物混合使用呈现无关作用。作者认为心肌可能成为制备TF类似物新的原料来源。该提取物对特异性免疫反应的影响有待进一步研究。 展开更多

关键词 组织提取物 转移因子 淋巴细胞

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噬菌体基因组DNA快速提取方法

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作者 刘秋婷 田雨顺 +2 位作者 云龙 罗鹏 胡超群 《热带生物学报》 2017年第2期232-235,共4页

针对传统噬菌体基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,并且提取中用到酚/氯仿抽提,操作步骤繁琐,会对操作人员身体造成一定程度的损伤等不足,笔者建立了1种噬菌体基因组DNA快速提取方法。其提取的主要步骤包括宿主核酸降解、噬菌体粒子沉... 针对传统噬菌体基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,并且提取中用到酚/氯仿抽提,操作步骤繁琐,会对操作人员身体造成一定程度的损伤等不足,笔者建立了1种噬菌体基因组DNA快速提取方法。其提取的主要步骤包括宿主核酸降解、噬菌体粒子沉淀、噬菌体DNA释放、杂质去除、DNA吸附、DNA清洗和DNA洗脱等。结果表明,通过此法能快速提取以溶藻弧菌、大肠杆菌和阴沟肠杆菌为宿主菌的多种噬菌体基因组DNA,最快可以在2 h内完成,而且提取的产量和纯度均较高,DNA浓度超过100 ng·μL^(-1),OD_(260/280)达到1.8以上,提取产物不受宿主菌基因组DNA污染,可用于下游的实验分析。 展开更多

关键词 噬菌体基因组DNA 快速提取方法 核酸降解 噬菌体粒子沉淀

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基于磁珠的核酸快速提取和纯化 被引量：19

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作者 张翠真 袁小龙 +3 位作者 陈志和 毛振方 简少卿 赵大显 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期97-101,共5页

采用纳米磁珠法对细菌基因组DNA、总RNA和质粒DNA进行提取纯化,并与试剂盒法和Trizol法提取效果进行比较,以期获得核酸最佳提取方法。结果发现,与试剂盒法和Trizol法相比,磁珠法在细菌基因组DNA和RNA提取、PCR产物检测及纯化中效率更高... 采用纳米磁珠法对细菌基因组DNA、总RNA和质粒DNA进行提取纯化,并与试剂盒法和Trizol法提取效果进行比较,以期获得核酸最佳提取方法。结果发现,与试剂盒法和Trizol法相比,磁珠法在细菌基因组DNA和RNA提取、PCR产物检测及纯化中效率更高;而在PCR产物回收和质粒DNA的提取中,效率低于试剂盒法,质粒酶切效果与试剂盒法无差异。结果表明,纳米磁珠法相比试剂盒法和Trizol法在核酸提取纯化效果上更佳。 展开更多

关键词 核酸快速提取 核酸纯化 磁珠法 试剂盒法

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乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析 被引量：9

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作者 董剑 许小华 《医疗卫生装备》 CAS 2019年第6期40-43,共4页

目的:对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测的2种不同核酸提取方法,即手工法(煮沸法)和全自动核酸提取仪法(磁珠法),在使用相同的检测试剂和核酸扩增仪的条件下进行性能验证,以评价其验证结果。方法:依据《医学实验室质量和能力认可准则》《全国... 目的:对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测的2种不同核酸提取方法,即手工法(煮沸法)和全自动核酸提取仪法(磁珠法),在使用相同的检测试剂和核酸扩增仪的条件下进行性能验证,以评价其验证结果。方法:依据《医学实验室质量和能力认可准则》《全国临床检验操作规程》等相关文件,由同一操作人员应用中山达安公司生产的HBV-DNA检测试剂盒和ABI7500实时荧光核酸扩增仪,分别采用手工法和全自动核酸提取仪法提取HBV-DNA进行临床样本的批内精密度、批间精密度、正确度、线性范围性能验证实验。结果:手工法的高值血清批内精密度为2.18%,低值血清批内精密度为3.76%;高值质控品批间精密度为3.29%。全自动核酸提取仪法的高值血清批内精密度为1.78%,低值血清批内精密度为2.44%;高值质控品批间精密度为2.84%。正确度验证分别取浓度为2.0×10^3、2.0×10^4、2.0×10^5、2.0×10^6copies/ml的可溯源标准品进行验证,手工法偏倚分别为-4.88%、-2.51%、-2.46%,-2.12%,全自动核酸提取仪法偏倚分别为-2.37%、-0.95%、0.74%、-1.33%。线性范围验证中,手工法和全自动核酸提取仪法的相关系数分别为0.9660、0.9858,均能满足临床检测的需求。结论:全自动核酸提取仪法较手工法提取核酸有利于简化HBV-DNA提取流程,实现分子生物实验室自动化提取核酸。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒DNA定量检测 手工(煮沸法) 全自动核酸提取仪法(磁珠法) 性能验证 血清

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可视化核酸检测技术RPA-LFD的研究和应用进展 被引量：8

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作者 于灵芝 陶凌云 魏晓锋 《实验动物与比较医学》 CAS 2021年第6期547-553,共7页

重组酶聚合酶扩增技术(recombinase ploymeraseamplication,RPA)是一种新型恒温核酸扩增技术,与PCR相比,操作简便,反应快速,灵敏度高,特异性强,无需精密仪器,是一种可以替代PCR的核酸检测技术,被认为是目前最有潜力成为快速分子诊断的... 重组酶聚合酶扩增技术(recombinase ploymeraseamplication,RPA)是一种新型恒温核酸扩增技术,与PCR相比,操作简便,反应快速,灵敏度高,特异性强,无需精密仪器,是一种可以替代PCR的核酸检测技术,被认为是目前最有潜力成为快速分子诊断的工具。RPA与横向流动试纸条(lateral flowdipstick,LFD)结合的RPA-LFD技术,可实现扩增产物的可视化检测,在病原体现场核酸快速检测中具有良好的应用前景,这为实验动物的质量监督检验提供了一种新的方法。本文对RPA-LFD这一新型核酸检测方法的技术原理、研究现状、技术瓶颈及用于现场核酸提取的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 横向流动试纸条 现场核酸提取 动物疫病现场监测

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不同食品基质中单核细胞增生李斯特氏菌核酸提取方法的比较 被引量：8

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作者 周阳 祝长青 +4 位作者 郭云昌 郭桂萍 蒋原 刘秀梅 付瑞燕 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1205-1211,共7页

比较4类食品基质中单核细胞增生李斯特氏菌核酸提取方法的差异。以不同食品基质中的单核细胞增生李斯特氏菌作为研究对象,选取应用广泛并且原理不同的4种细菌核酸提取方法进行比较,同时结合实时荧光PCR法对各种方法进行实际评估。天根... 比较4类食品基质中单核细胞增生李斯特氏菌核酸提取方法的差异。以不同食品基质中的单核细胞增生李斯特氏菌作为研究对象,选取应用广泛并且原理不同的4种细菌核酸提取方法进行比较,同时结合实时荧光PCR法对各种方法进行实际评估。天根离心柱法核酸提取结果稳定,受不同食品基质的影响较小;Promega沉降法与磁珠法受不同食品基质影响较大,核酸提取结果差异较大;Chelex-100法快速方便,但仅适于纯菌液或菌落的核酸提取。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 食品基质 核酸提取 实时荧光PCR

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简化核酸提取过程在病原体核酸检测中的应用现状和发展趋势 被引量：6

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作者 高源 申辛欣 +1 位作者 冯志山 马学军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期445-450,共6页

简化核酸提取过程相较于经典的试剂盒法和全自动核酸提取技术,凭借其简便的操作步骤、便携易用的仪器设备和简单的人员培训等优势在病原体核酸检测中得到广泛应用,为实现病原体核酸的快速检测和现场检测(Point-of-care testing,POCT)奠... 简化核酸提取过程相较于经典的试剂盒法和全自动核酸提取技术,凭借其简便的操作步骤、便携易用的仪器设备和简单的人员培训等优势在病原体核酸检测中得到广泛应用,为实现病原体核酸的快速检测和现场检测(Point-of-care testing,POCT)奠定了良好的基础。本文比较了不同的核酸提取方法,对简化核酸提取过程的方法学进行综述,讨论其在病原体核酸检测领域中的应用现状,并展望其发展趋势。 展开更多

关键词 简化核酸提取过程 核酸检测 现场检测

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离心微流控芯片技术用于核酸等温扩增的研究进展 被引量：3

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作者 曹宁 周新丽 《工业微生物》 CAS 2020年第6期48-55,共8页

常规聚合酶链式反应对反应条件的要求很高,需要在多个温度下进行循环,而核酸等温扩增仅需在恒定温度下就能进行核酸的高效快速扩增。离心式微流控芯片技术具有微型化、集成化、高通量、自动化等优势,可实现实时、低成本生化检测分析。... 常规聚合酶链式反应对反应条件的要求很高,需要在多个温度下进行循环,而核酸等温扩增仅需在恒定温度下就能进行核酸的高效快速扩增。离心式微流控芯片技术具有微型化、集成化、高通量、自动化等优势,可实现实时、低成本生化检测分析。本文介绍了离心微流控芯片技术在核酸扩增前处理和核酸等温扩增中的应用,主要包括核酸提取、试剂预存储和核酸等温扩增等方面,并且对离心微流控芯片技术用于核酸等温扩增中存在的问题与未来的发展方向进行分析讨论。 展开更多

关键词 离心微流控 核酸提取 核酸等温扩增 实时检验

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