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基于磁性层状双氢氧化物和核酸外切酶Ⅰ的新型大肠杆菌荧光传感器构建
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作者 何佳璘 吴源益 +4 位作者 刘天 肖玉梅 何苗 王开勇 杨懿 《西南医科大学学报》 2024年第5期384-388,共5页
目的基于磁性层状双氢氧化物(magnetic layered double hydroxide,MLDH)对修饰在单链和双链DNA上的羧基荧光素(6-car-boxyfluorescein,FAM)的高效淬灭,以及核酸外切酶Ⅰ(exonucleaseⅠ,ExoⅠ)对单链DNA的选择性降解作用,建立测定大肠杆... 目的基于磁性层状双氢氧化物(magnetic layered double hydroxide,MLDH)对修饰在单链和双链DNA上的羧基荧光素(6-car-boxyfluorescein,FAM)的高效淬灭,以及核酸外切酶Ⅰ(exonucleaseⅠ,ExoⅠ)对单链DNA的选择性降解作用,建立测定大肠杆菌的荧光传感器。方法将不同浓度的大肠杆菌特征DNA与FAM标记的互补DNA探针杂交,形成FAM-双链DNA,加入Exo I选择性降解剩余探针,再加入MLDH吸附并淬灭FAM-双链DNA。通过磁铁分离上清液与MLDH,测量上清液的荧光强度。结果在最优实验条件下,本法检测大肠杆菌特征DNA的线性范围为0.05~30nmol/L,相关系数(R^(2))为0.997,检测限(3σ)为0.025nmol/L,对江水、自来水和茶饮料中大肠杆菌DNA的回收率为85.4%~118%,相对标准偏差小于5%。结论利用MLDH的荧光淬灭能力和Exo I对单链DNA的选择性水解能力成功构建了测定大肠杆菌的新型荧光传感器,与传统大肠杆菌检测法相比,所建新型传感器灵敏度高、选择性好、准确度高,能实现对大肠杆菌的快速检测。 展开更多
关键词 磁性层状双氢氧化物 核酸外切酶 荧光传感器 大肠杆菌 DNA检测
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基于三重信号放大的电化学传感器检测黄体酮 被引量:4
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作者 蔡杰 杨雅妮 +3 位作者 罗大娟 高荣 陆发英 刘冰倩 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1019-1023,共5页
基于DNA串联体(DNA concatamers)-G四聚体(G-quar DNA)-核酸外切酶Ⅰ (Exo Ⅰ)三重信号放大策略,以电沉积金的玻碳电极(dep Au/GCE)为反应平台,示差脉冲伏安法(DPV)为检测手段,构建简便灵敏的黄体酮(Pro)检测方法。基于碱基互补配对,富... 基于DNA串联体(DNA concatamers)-G四聚体(G-quar DNA)-核酸外切酶Ⅰ (Exo Ⅰ)三重信号放大策略,以电沉积金的玻碳电极(dep Au/GCE)为反应平台,示差脉冲伏安法(DPV)为检测手段,构建简便灵敏的黄体酮(Pro)检测方法。基于碱基互补配对,富含鸟嘌呤(G)的辅助链1(H1)和辅助链2(H2)顺次与修饰在dep Au/GCE表面的目标DNA (t DNA)杂交形成DNA concatamers。氯化血红素(Hemin)与H1和H2未配对部分结合形成G-quar DNA分布于DNA concatamers四周。亚甲蓝(MB)稳定嵌入DNA concatamers和G-quar DNA中,增大电信号。当Pro存在时,Pro与t DNA特异性结合触发G-quar DNA/DNA concatamers从电极表面脱落。Exo Ⅰ特异性剪切Pro/t DNA结构,释放出的Pro进入下一轮循环,从而实现级联信号放大作用。电信号强度与Pro浓度呈负相关。峰电流与Pro质量浓度在1~40 ng/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为0.1 ng/mL。 展开更多
关键词 黄体酮 核酸外切酶 DNA串联体 G四聚体 信号放大
原文传递
聚集诱导发光分子/适配体/外切酶Ⅰ体系对可卡因的检测 被引量:2
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作者 杜宪超 郝红霞 +1 位作者 秦安军 唐本忠 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第3期411-416,共6页
目前非法药物的滥用已经成为全球性的公共安全卫生问题之一[1~3].其中可卡因作为一种全球禁用的非法药物,长期滥用会对人体造成许多不良的影响,如精神疾病、失眠、抑郁和暴力倾向等,甚至威胁生命,同时,吸食可卡因还会导致出现各种社会问... 目前非法药物的滥用已经成为全球性的公共安全卫生问题之一[1~3].其中可卡因作为一种全球禁用的非法药物,长期滥用会对人体造成许多不良的影响,如精神疾病、失眠、抑郁和暴力倾向等,甚至威胁生命,同时,吸食可卡因还会导致出现各种社会问题[4,5].因此实现对可卡因的快速检测成为打击毒品犯罪、维护社会稳定的关键.目前对于可卡因的检测主要采用气相色谱/质谱(GC/MS)和液相色谱/质谱(LC/MS)等大型仪器.虽然能够实现对可卡因检测,但大多需要专业人员操作且耗时较长,因此开发一种简便、高效且可靠的可卡因检测方法成为研究的热点[6~8].其中,基于荧光探针的检测手段由于具有高效、灵敏及便捷等优势而备受关注,但传统的荧光探针面临聚集导致发光猝灭(ACQ)的难题[9,10],即这类分子在溶液中发光非常强,一旦聚集或在固体中发光显著减弱,非常不利于实际应用. 展开更多
关键词 聚集诱导发光 可卡因 适配体 外切酶
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单链DNA稳定的金纳米簇合成及其检测核酸外切酶Ⅰ活性研究
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作者 宋佳宜 熊华玉 +2 位作者 文为 张修华 王升富 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 2019年第1期10-14,共5页
核酸外切酶Ⅰ在基因组活动和稳定性中起着重要作用,因此,快速检测核酸外切酶Ⅰ的活性对疾病诊断和药物开发具有深远的意义.设计一个高效的DNA模板合成荧光金纳米团簇(Au NCs),以其作为荧光探针,用于简单、灵敏和无标记的方式检测核酸外... 核酸外切酶Ⅰ在基因组活动和稳定性中起着重要作用,因此,快速检测核酸外切酶Ⅰ的活性对疾病诊断和药物开发具有深远的意义.设计一个高效的DNA模板合成荧光金纳米团簇(Au NCs),以其作为荧光探针,用于简单、灵敏和无标记的方式检测核酸外切酶Ⅰ(ExoⅠ)的活性.试验结果表明:随着核酸外切酶Ⅰ的加入,单链DNA将从3'端至5'端被消化,金纳米团簇失去了单链DNA模板的保护出现团聚,导致其荧光强度下降,可用于核酸外切酶Ⅰ活性测定.该方法不需要任何基团的修饰和特殊DNA序列的设计,提高了核酸外切酶I活性测定效率. 展开更多
关键词 核酸外切酶 金纳米簇 荧光探针 DNA
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测序反应中PCR产物纯化方法的比较 被引量:6
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作者 张华 府伟灵 +1 位作者 黄庆 郭颖 《华南国防医学杂志》 CAS 2006年第3期1-3,共3页
目的寻找最佳的PCR产物纯化方法,建立稳定的重亚硫酸盐直接测序技术平台。方法应用过柱、乙醇/醋酸钠及SAP-Exon Ⅰ 3种纯化方法,对10例PCR产物进行纯化。结果经配对资料t检验,乙醇/醋酸钠和过柱纯化与SAP-Exon Ⅰ纯化法比较,纯化后PC... 目的寻找最佳的PCR产物纯化方法,建立稳定的重亚硫酸盐直接测序技术平台。方法应用过柱、乙醇/醋酸钠及SAP-Exon Ⅰ 3种纯化方法,对10例PCR产物进行纯化。结果经配对资料t检验,乙醇/醋酸钠和过柱纯化与SAP-Exon Ⅰ纯化法比较,纯化后PCR产物损失量均有极显著性差异(P<0.01),测序结果也有显著性差异(P<0.05)。结论应用SAP- Exon Ⅰ纯化法,PCR产物损失量低,测序结果明显优于另外两种方法。 展开更多
关键词 脱氧测序法 虾碱性磷酸酶 核酸外切酶I 测序图谱
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