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百日咳鲍特菌23S rRNA位点变异AS-PCR检测方法建立 被引量:6
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作者 张娟胜 李芳 +2 位作者 栾阳 刘莹 王增国 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期923-926,共4页
目的根据allele-specific PCR(AS-PCR)原理,建立具有良好敏感性与特异性的百日咳鲍特菌23S r RNA位点变异检测方法。方法基于百日咳鲍特菌23S r RNA A2047G位点突变与其对红霉素耐药的相关性,设计包含特异变异位点的引物进行两阶段PCR反... 目的根据allele-specific PCR(AS-PCR)原理,建立具有良好敏感性与特异性的百日咳鲍特菌23S r RNA位点变异检测方法。方法基于百日咳鲍特菌23S r RNA A2047G位点突变与其对红霉素耐药的相关性,设计包含特异变异位点的引物进行两阶段PCR反应,根据电泳有无特异大小目的片段的出现,确定百日咳鲍特菌23S r RNA A2047G位点是否有变异。结果以基因序列测定法为金标准的评价结果显示,AS-PCR法检测突变型菌株的灵敏度为96%(144/150),特异度为100%(100/100),kappa=0.95(P<0.01);检测野生型菌株的灵敏度为100%(18/18),特异度为100%(100/100),kappa=1(P<0.01)。结论 AS-PCR方法检测百日咳鲍特菌23S r RNA A2047G位点变异具有较高灵敏度和特异度,适用于普通微生物实验室开展百日咳鲍特菌对红霉素耐药性的快速检测。 展开更多
关键词 百日咳鲍特菌 allele-specific PCR(AS-PCR) 23S RRNA 红霉素耐药
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川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药性大叶肺炎患儿的疗效及细胞因子的影响 被引量:4
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作者 盛玮 田玉珍 《药物评价研究》 CAS 2018年第11期2065-2068,共4页
目的考察川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药性大叶肺炎患儿的疗效及细胞因子的影响。方法选择180例红霉素耐药大叶性肺炎患儿为研究对象,随机分为阿奇霉素组和联合组,每组90例。阿奇霉素组给予静脉滴注10 mg/kg的注射用阿奇霉素,连用3~5 d... 目的考察川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药性大叶肺炎患儿的疗效及细胞因子的影响。方法选择180例红霉素耐药大叶性肺炎患儿为研究对象,随机分为阿奇霉素组和联合组,每组90例。阿奇霉素组给予静脉滴注10 mg/kg的注射用阿奇霉素,连用3~5 d,患儿体温恢复,且外周血白细胞恢复后,给予口服10 mg/kg的阿奇霉素干混悬剂,1次/d,连续治疗10 d。联合组在此基础上给予静脉滴注40 mg的盐酸川芎嗪注射液,1次/d,连续治疗10 d。观察比较两组的疗效、免疫球蛋白水平及炎性因子水平。结果治疗后,阿基霉素组的有效率为77.78%,联合组为87.78%,两组有效率有显著差异(P<0.05)。治疗前,两组患儿CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+水平均无显著差异;治疗后,两组患儿CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著升高,CD8^+水平显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);其中联合组患儿CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著高于对照组,CD8^+水平显著低于对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患儿IL-6、IL-8、IL-10水平均无显著性差异;治疗后,两组患者IL-6、IL-8、IL-10水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);其中联合组显著低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪联合阿奇霉素对红霉素耐药大叶肺炎患儿有较好的疗效,其治疗作用的发挥与调节机体免疫环境有关,能增加免疫力,减轻炎症反应,从而促进患儿的康复。 展开更多
关键词 阿奇霉素 川芎嗪 红霉素耐药 大叶肺炎 疗效
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A report on infection dynamics of inducible clindamycin resistance of Staphylococcus aureus isolated from a teaching hospital in India 被引量:1
3
作者 Debasmita Dubey Shakti Rath +3 位作者 Mahesh C.Sahu Subhrajita Rout Nagen K.Debata Rabindra N.Padhy 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2013年第2期148-153,共6页
Objective:To investigate the infection of hospital-and community-acquired"erythromycininduced clindamycin resistant"strains or D-test positives of clinical isolates of Staphylococcus aureus(S.aureus)(with an... Objective:To investigate the infection of hospital-and community-acquired"erythromycininduced clindamycin resistant"strains or D-test positives of clinical isolates of Staphylococcus aureus(S.aureus)(with and without methicillin resistance)in a hospital.Methods:Strains of S.aureus isolated from clinical specimens were subjected to D-test and antibiotic profiling.Results:Of the total 278 isolates,140(50.35%)were D-test positives and the rest were D-test negatives.Further,of 140(100%)pesitives,87(62.14%)and 53(37.85%)strains were from males and females,respectively.Of 140(100%)pesitives,117(83.57%)were methicillin resistant S.aureus and23(16.42%)were methicillin sensitive S.aureus;of 140 strains,103(73.57%)strains front persons with and 37(26.42%)were without related infections;of 140 strains,91(65%)and 49(35%)were from hospital-and community-acquired samples,respectively.In 140 strains,118(84.28%)with comorbidities and 22(15.71%)without comorbidities cases were recorded;similarly,persons with prior antibiotic uses contributed 108(77.14%)and without 32(22.85%)positive strains.These binary data of surveillance were analyzed by a univariate analysis.It was evident that the prior antibiotic uses and comorbidities due to other ailments were the determinative factors in D-test positivity,corroborated by low P values,P=0.001 1 and 0.0024,respectively.All isolates(278)were resistant to17 antibiotics of nine groups,in varying degrees;the minimum of 28%resistance for vancomycin and the maximum of 97%resistance for gentamicin were recorded.Further,of 278 strains,only42(15.1%)strains were resistant constitutively to both antibiotics,erythromycin resistant and clindamycin resistant,while 45(16.2%)strains were constitutively sensitive to both antibiotics(erythromycin sensitive,and clindamycin sensitive).Further,of the rest 191(68.7%)strains were with erythromycin resistant and clindamycin resistant,of which only 140(50.35%)strains were D-test positives,while the rest 51(18.34%)strains were D-test negatives.Conclusions:In view o 展开更多
关键词 Antibiotics COMMUNITY-ACQUIRED D-test erythromycin resistance HOSPITAL-ACQUIRED Inducible CLINDAMYCIN resistance MRSA MSSA Staphylococcus aureus
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红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的研究 被引量:2
4
作者 张宇蔺 《中国血液流变学杂志》 CAS 2014年第2期308-310,共3页
目的:了解临床分离的红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的发生率,比较双纸片扩散法(D试验)中纸片之间距离对试验结果的影响。方法VITEK-2微生物分析系统检测为红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的葡萄球菌135株,其中金黄色葡... 目的:了解临床分离的红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的发生率,比较双纸片扩散法(D试验)中纸片之间距离对试验结果的影响。方法VITEK-2微生物分析系统检测为红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的葡萄球菌135株,其中金黄色葡萄球菌(SA)为55株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)为80株。比较红霉素纸片与克林霉素纸片边距15 mm与26 mm对结果的影响。结果 D试验阳性率为57.0%,其中SA阳性率70.9%, CNS为47.5%(P<0.01)。纸片边距15 mm组D试验阳性77株,26 mm组仅69株,漏检率10.4%(P<0.05)。结论实验室应常规开展D试验,D试验中双纸片间距以15 mm为佳。 展开更多
关键词 红霉素耐药 葡萄球菌 克林霉素 诱导性耐药 D试验
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Evolution of Erythromycin Resistance among Streptococcus pneumoniae Isolates in Malaysia from 2005 and 2010
5
作者 Revathy Arushothy Norazah Ahmad Rohani Md Yassin 《Journal of Biosciences and Medicines》 2016年第5期116-122,共7页
Objectives: This study focuses on the antibiotic susceptibility pattern and distribution of the ermB and mefA virulence genes among the Streptococcus pneumoniae due to an increase in erythromycin resistance in S. pneu... Objectives: This study focuses on the antibiotic susceptibility pattern and distribution of the ermB and mefA virulence genes among the Streptococcus pneumoniae due to an increase in erythromycin resistance in S. pneumoniae worldwide. Methodology: We investigated 255 clinical isolates collected from 2005-2010 to determine the serotype distribution and resistance to erythromycin in comparison to penicillin, clindamycin, clarithromycin, azithromycin, and trimethoprim sulfamethoxazole. Multiplex PCR was carried out to detect erythromycin resistance genes (ermB and mefA). Results: There were 146 (57.3%) isolates resistant to erythromycin. MIC<sub>90</sub> for erythromycin is at >256 mg/L and MIC<sub>50</sub> is at 16 mg/L. The ermB gene was detected in 25.3% of the erythromycin-resistant isolates and mefA gene was detected in 50.7% of the isolates. The four most common serotypes encountered are 19F, 19A, 23F and 14. The serotype distribution among the erythromycin resistant isolates was 19F (42.0%) followed by serotype 19A (11.3%), serotype 23F (9.2%) and serogroup 14 (7.0%). Conclusion: In conclusion, there is a significant rise in erythromycin resistance among the Malaysian pneumococcal isolates. The emergence of serotype 19A together with increasing prevalence of resistance to macrolide warrants for a more extensive surveillance study. 展开更多
关键词 Streptococcus pneumoniae PNEUMOCOCCAL erythromycin resistance SEROTYPE mefA ermB
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汉赛巴尔通体红霉素体外诱导耐药研究
6
作者 宋秀平 刘起勇 +1 位作者 刘云彦 栗冬梅 《实用预防医学》 CAS 2015年第6期645-647,共3页
目的体外诱导汉赛巴尔通体对红霉素的耐药菌株,初步探索其耐药的发生规律。方法选取对红霉素均敏感的汉赛巴尔通体参考株Houston-1(ATCC 49882)和6株国内猫分离株作为出发菌株。出发菌株连续培养3代后开始诱导,红霉素起始浓度为出发菌... 目的体外诱导汉赛巴尔通体对红霉素的耐药菌株,初步探索其耐药的发生规律。方法选取对红霉素均敏感的汉赛巴尔通体参考株Houston-1(ATCC 49882)和6株国内猫分离株作为出发菌株。出发菌株连续培养3代后开始诱导,红霉素起始浓度为出发菌株初始MIC的1/4,逐级倍增诱导浓度,直至菌株停止生长或诱导成高度耐药菌株。采用E-test法和琼脂稀释法测定耐药前后试验菌株对红霉素和其他10种抗生素的最低抑菌浓度(minimal inhibition concentrations,MICs)。同时测定出发菌株无药传代后菌株的MICs值。结果经过12代诱导,6株菌除获得对红霉素耐药(MIC值>256 mg/L)外,对阿奇霉素和克林霉素也产生耐药(MIC值>256 mg/L)。出发菌株自然传代30次后,有4株菌对克林霉素产生了一定的耐药,对其他抗生素耐药情况没有变化。结论通过体外浓度递增法首次成功诱导汉赛巴尔通体对红霉素耐药,并产生对同系药物阿奇霉素的耐药和林克酰胺类克林霉素的耐药,提供了苛养、包内寄生菌耐药菌株模型,为今后进一步研究巴尔通体对大环内脂类抗生素的相关耐药机制奠定了基础。 展开更多
关键词 汉赛巴尔通体 红霉素耐药 诱导 最低抑菌浓度
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百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品的研制
7
作者 夏德菊 周海卫 +1 位作者 王薇 许四宏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1449-1455,1462,共8页
目的研制百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对21份病原体培养物的复核、确证,关键抗原位点等位基因分析、红霉素耐药位点测序分析,组成百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的... 目的研制百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对21份病原体培养物的复核、确证,关键抗原位点等位基因分析、红霉素耐药位点测序分析,组成百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品由12份阴性、10份阳性、1份检出限和1份精密度样品组成。质量标准为12份阴性参考品应均检出阴性;10份阳性参考品应均检出阳性,若为百日咳杆菌红霉素耐药位点检测试剂盒,P1、P3、P6、P7和P9需检出耐药位点阳性;精密度参考品重复检测10次,要求均为百日咳杆菌阳性,且其检测值的变异系数(CV)应不大于5.0%,若为百日咳杆菌红霉素耐药位点检测试剂盒,重复检测10次,要求均为耐药位点阳性,且其检测值的CV不大于5.0%;最低检出限参考品要求对于选择IS481靶区的试剂,浓度为100cfu/mL及以上时,检测结果应为百日咳杆菌阳性;其他靶区试剂要求浓度为1×10^(4)cfu/mL及以上时,检测结果应为百日咳杆菌阳性,若为百日咳杆菌红霉素耐药位点检测试剂盒,要求浓度为1×10^(4)cfu/mL及以上时,需检出耐药位点阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论研制的百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品可用于百日咳杆菌核酸检测试剂的质量控制及评价。 展开更多
关键词 百日咳杆菌 核酸检测试剂 红霉素耐药 国家参考品
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耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌红霉素耐药erm基因检测 被引量:9
8
作者 李立 应冠一 +1 位作者 糜祖煌 秦玲 《现代实用医学》 2003年第6期345-346,共2页
目的 探讨耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)erm基因的存在状况。 方法 应用兼并引物扩增MRCNS菌的erm基因。 结果  5 5株MRCNS菌中有 4 5株检出erm基因。 结论 MRCNS菌获得erm基因的红霉素耐药率为 81.8%。
关键词 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 红霉素 耐药erm基因 检测 病原菌
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药研究 被引量:10
9
作者 宋焰桃 徐元宏 《中南药学》 CAS 2008年第2期246-248,共3页
目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重耐药情况。方法收集经头孢西丁纸片扩散试验和青霉素结合蛋白2a胶乳凝集实验分离出的51株MRSA,用β-内酰胺酶实验、D试验、Kirby-Bauer法检测MRSA产β-内酰胺酶以及对红霉素、克林... 目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重耐药情况。方法收集经头孢西丁纸片扩散试验和青霉素结合蛋白2a胶乳凝集实验分离出的51株MRSA,用β-内酰胺酶实验、D试验、Kirby-Bauer法检测MRSA产β-内酰胺酶以及对红霉素、克林霉素、4种氟喹诺酮类药物(氧氟沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、加替沙星)和万古霉素耐药性。结果51株MRSA头孢西丁纸片抑菌圈直径介于6~20mm,产β-内酰胺酶率为84.3%,对红霉素、克林霉素、氟喹诺酮类、万古霉素耐药率分别为98.0%、86.3%、88.2%、0,红霉素诱导克林霉素耐药率为50.0%(3/6)。结论MRSA呈多重耐药,轻度感染可根据药敏结果选万古霉素与氟喹诺酮类?生素联合用药。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 头孢西丁纸片扩散 PBP2a胶乳凝集 β-内酰胺酶 红霉素诱导克林霉素耐药(D试验) 氟喹诺酮类抗生素 万古霉素 多重抗药性
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红霉素及细胞因子逆转白血病细胞耐药性的研究 被引量:9
10
作者 陈同辛 林梓 +3 位作者 周昕 伍钢 沈蕾 应大明 《白血病》 1997年第4期202-207,共6页
利用亲脂性药物Ery单独或与Dox合用处理K562/VCR细胞,观察了其对细胞的增殖抑制作用,以及对细胞内Dox浓度的影响,实验结果表明:在无Ery存在下,Dox对K562/VCR细胞的增殖抑制作用较小,与Ery合用... 利用亲脂性药物Ery单独或与Dox合用处理K562/VCR细胞,观察了其对细胞的增殖抑制作用,以及对细胞内Dox浓度的影响,实验结果表明:在无Ery存在下,Dox对K562/VCR细胞的增殖抑制作用较小,与Ery合用后可明显地提高K562/VCR细胞内Dox的浓度,并可增强Dox对K562/VCR细胞的增殖抑制作用。此结果与国外的结果相一致。因而进一步提示了亲脂类药物逆转肿瘤细胞MDR的机制可能与其抗肿瘤药物竞争性地与P-Gp结合,以减少抗肿瘤药物的外排有关,但是本组实验结果还表明:Ery与Dox合用处理K562/VCR细胞对细胞膜P-Gp的表达影响较小,提示了亲脂类药物作用于P-Gp的位点可能和单克隆抗体结合抗原决定簇不同,故亲脂类药物与P-GP结合不影响单克隆抗体与P-Gp结合。 展开更多
关键词 红霉素 白血病细胞 耐药性 细胞增殖率
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耐红霉素屎肠球菌耐药基因及其水平转移研究 被引量:7
11
作者 王珊 郑波 +3 位作者 李耘 刘健 薛峰 吕媛 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期739-742,共4页
目的研究我国临床分离高水平耐红霉素的屎肠球菌中红霉素耐药基因及其水平转移情况。方法采用PCR法检测红霉素耐药基因ermB和mef,转座子Tn917相关基因tnpA。采用质粒酶切图谱分析耐药菌同源性,采用固体培养基传递法和液体培养基传递法... 目的研究我国临床分离高水平耐红霉素的屎肠球菌中红霉素耐药基因及其水平转移情况。方法采用PCR法检测红霉素耐药基因ermB和mef,转座子Tn917相关基因tnpA。采用质粒酶切图谱分析耐药菌同源性,采用固体培养基传递法和液体培养基传递法研究红霉素耐药基因水平转移情况。结果90株高水平红霉素耐药屎肠球菌中ermB基因阳性率为85.6%(77/90),mef基因均为阴性,15.6%(14/90)tnpA基因阳性的肠球菌中ermB基因均为阳性。质粒酶切图谱显示除来自同家医院的4株菌质粒酶切图谱相同外,其余菌株质粒酶切图谱差异明显。14.3%(11/77)菌株携带的ermB基因在屎肠球菌间可通过固体传递水平转移,2.6%(2/77)菌株携带的ermB基因在屎肠球菌间液体环境中水平转移。13株接合子经过PCR鉴定,ermB基因均为阳性,但tnpA基因皆为阴性。结论高水平耐红霉素的屎肠球菌ermB基因携带率较高,且该基因可在屎肠球菌间水平转移,可水平转移的ermB基因可能位于其它非Tn917转座子和/或接合性质粒上。14株屎肠球菌ermB基因可能存在于转座子Tn917内。这些菌株间大多没有同源性。 展开更多
关键词 屎肠球菌 高水平红霉素耐药 TN917 基因水平转移
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红霉素耐药粪肠球菌耐药基因erm(A)、erm(B)和erm(C)分布及耐药性分析 被引量:6
12
作者 邓向斌 李多云 +9 位作者 徐广健 白冰 姚伟明 邓名贵 程航 孙翔 郑金鑫 林志伟 邓启文 余治健 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期287-289,F0004,共4页
目的了解临床分离株红霉素耐药粪肠球菌耐药特点及耐药基因erm(A)、erm(B)和erm(C)分布特点及耐药机制。方法采用BD Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统对2010~2016年临床分离的313株粪肠球菌进行药敏试验,并用微量肉汤稀释法检测红霉... 目的了解临床分离株红霉素耐药粪肠球菌耐药特点及耐药基因erm(A)、erm(B)和erm(C)分布特点及耐药机制。方法采用BD Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统对2010~2016年临床分离的313株粪肠球菌进行药敏试验,并用微量肉汤稀释法检测红霉素的MIC值,比较红霉素耐药组和红霉素敏感组细菌的耐药性差异,使用PCR方法检测erm(A)、erm(B)和erm(C)基因并分析其分布特点。结果 313株粪肠球菌主要分离自患者的中段尿、血液、胆汁和分泌物,红霉素耐药组和红霉素敏感组细菌对万古霉素、利奈唑胺、氨苄西林、替考拉宁和呋喃妥因的敏感性高,对庆大霉素的耐药率均>90%。红霉素耐药基因erm(A)、erm(B)和erm(C)基因检出比例分别为3.51%、66.77%和0.32%;携带红霉素耐药基因erm(A)细菌利奈唑胺(LZD)耐药为81.82%。粪肠球菌对红霉素耐药率为76.04%。结论红霉素耐药株粪肠球菌主要携带erm(B)基因。红霉素耐药基因erm(A)阳性菌株LZD的MIC值偏高。 展开更多
关键词 粪肠球菌 药敏试验 红霉素耐药基因
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杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因的检测 被引量:5
13
作者 张征 孙静娜 +2 位作者 王政民 李亚威 赵建宏 《现代中西医结合杂志》 CAS 2010年第1期24-26,共3页
目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL... 目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL基因进行检测,分析PVL基因阳性MRSA的ermA/B/C检出率。结果45株MRSA中有33株检出ermA/B/C,检出率为73%(33/45);有12株检出PVL基因,检出率为27%(12/45);12株PVL基因阳性MRSA中有9株检出ermA/B/C,检出率为75%(9/12);33株PVL基因阴性MRSA中仅24株检出ermA/B/C,检出率为73%(24/33)。结论PVL基因阳性与PVL基因阴性MRSA的ermA/B/C检出率基本一致,MRSA的重要致病基因——PVL的产生可能与红霉素耐药基因ermA/B/C无关。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 红霉素耐药基因 erm基因 杀白细胞毒素基因 PVL基因
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红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定 被引量:2
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作者 孙丽萍 沈琼 +2 位作者 叶江 吴海珍 张惠展 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期20-23,共4页
将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在... 将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在含红霉素的平板上各筛选约 2 0 0个转化子 ,其中有 3个在抗性板上生长良好 ,分别命名为 p LP42、p LP1 b和 p LP44。对其中的 p LP42酶切分析表明 ,其含有约 3.0 kb的红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)染色体 DNA片段 ,它的载体部分发生了缺失。以 p UC1 8为载体 ,将 p LP42的 1 .7kb- Kpn I片断克隆、测序、经与 Genebank的erm E基因顺序比较 ,证实已克隆了 Saccharopolyspora 展开更多
关键词 鸟枪法 原生质体转化 红色糖多孢菌 红霉素抗性基因 双重抗性筛选 基因克隆 基因鉴定
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透明颤菌血红蛋白基因在淀粉酶产色链霉菌中的表达及对合成丰加霉素的影响 被引量:2
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作者 马正 刘金秀 +2 位作者 申屠旭萍 边亚琳 俞晓平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1175-1185,共11页
【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato... 【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato-chromogenes 1628中的表达以促进丰加霉素的生物合成。【方法】首先以gfp为报告基因检测红霉素抗性基因启动子Perm*在S.diastatochromogenes 1628中的转录活性,再利用PermE*实现vgb的异源表达。【结果】在荧光显微镜下,重组菌1628-GFP菌丝可发出稳定明亮的绿色荧光,表明启动子PermE*在菌株1628中可有效启动外源基因的表达;通过一氧化碳结合差光谱分析显示VHb具有生物学活性;摇瓶实验表明:与原始菌株相比,重组菌可促进丰加霉素产量的提高,在中度和高度限氧条件下促进效果尤为明显,提高幅度分别为48.9%和104.5%。PCR和发酵效价检测显示重组菌具有良好的遗传稳定性。【结论】成功实现了vgb在S.diastatochromogenes 1628中的表达,有效提高了其丰加霉素的合成水平,为丰加霉素的工业化生产提供了基础条件。 展开更多
关键词 淀粉酶产色链霉菌 丰加霉素 绿色荧光蛋白 透明颤菌血红蛋白 红霉素抗性基因启动子
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