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题名利用重叠PCR实现乙肝表面抗原CTL表位的替换
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作者
王文敬
黎诚耀
李明松
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机构
南方医科大学生物技术学院输血医学系
南方医科大学南方医院消化科
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出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期589-591,共3页
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基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)(2007CB512901)
广东省自然科学基金(06105111)
广东省科技攻关计划(0700016)~~
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文摘
目的以磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(glypican-3,GPC3)的CTL表位EYILSLEEL替换HBsAg中内源性CTL表位LLD,构建用于预防和治疗乙肝的DNA疫苗。方法以重组表面抗原基因pcHBsAg质粒为模板,应用重叠延伸PCR扩增出含EYILSLEEL表位的HBsAg基因HBsAg/GPC3,将其插入pBSSK+载体中,构建出pBSSK/GPC3载体。利用DNA重组技术将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中,将真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定,构建表达CTL表位EYILSLEEL的DNA疫苗。结果酶切和测序的结果显示序列无错配,获得了完整表达EYILSLEEL表位的真核质粒pcDNA3-HBsAg/GPC3。结论成功将EYILSLEEL表位替换HBsAg的内源性CTL表位,构建了pcDNA3-HBsAg/GPC3真核表达质粒。
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关键词
表位替换
磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白
细胞毒T淋巴细胞表位
重叠延伸PCR
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Keywords
epitope shift
glypican-3
CTL epitope
SOEing PCR
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分类号
R392-33
[医药卫生—免疫学]
R392.11
[医药卫生—基础医学]
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题名GPC-3 CTL表位表达载体构建
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作者
王文敬
黎诚耀
李明松
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机构
南方医科大学生物技术学院输血医学系
南方医科大学南方医院消化科
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出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期1548-1550,共3页
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基金
国家973计划(2007CB512901)
广东省自然科学基金(06105111)
广东省科技攻关计划(0700016)
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文摘
将重组的乙肝表面抗原(pcHBsAg)中多个CTL表位,用外源性的磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(GPC3)CTL表位序列替换,构建单拷贝和多拷贝DNA疫苗,获得不同位点的单拷贝或可同时表达多个CTL表位肽的真核表达质粒。以pcHBsAg质粒为模板,应用重叠延伸PCR扩增出含三个不同位点磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(GPC3)CTL表位EYILSLEEL(EYI)的HBsAg基因片段EYI1,及替换pcHBsAg中不同CTL表位的HBsAg基因片段EYI2、EYI3;分别将EYI1、EYI2、EYI3基因片段插入pBSSK+载体中,构建出含3拷贝EYI的pBSSK/EYI1、pBSSK/EYI2、pBSSK/EYI3载体。在此基础上,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pcDNA3.1+,构建表达EYI表位肽的DNA疫苗。真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定,结果显示:成功构建了pcDNA-EYI1/HBsAg、pcDNA-EYI2/HBsAg、pcDNA-EYI3/HBsAg真核表达质粒,为进一步测定以GPC3基因为基础的HBsAg多肽候选疫苗提供理论、实验依据。
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关键词
表面抗原
表位替换
磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白
重叠延伸PCR
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Keywords
HBsAg
epitope shift
glypican-3
CTL epitope
SOEing PCR
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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