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太行山羊附睾头细胞Lcn5免疫荧光定位 被引量：1
1
作者 董复成 崔岩 +1 位作者 任有蛇 张春香 《中国草食动物科学》 CAS 2020年第6期1-5,共5页
试验旨在研究太行山羊附睾头细胞Lcn5免疫荧光定位,采用细胞免疫荧光技术通过荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察太行山羊附睾头细胞Lcn5免疫荧光情况。结果表明:①不同一抗浓度对Lcn5呈现荧光图像影响较大,浓度稀释比例越大,浓度越小,... 试验旨在研究太行山羊附睾头细胞Lcn5免疫荧光定位,采用细胞免疫荧光技术通过荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察太行山羊附睾头细胞Lcn5免疫荧光情况。结果表明:①不同一抗浓度对Lcn5呈现荧光图像影响较大,浓度稀释比例越大,浓度越小,荧光阳性信号越弱,适宜的一抗浓度稀释比为1∶50;不同二抗浓度对Lcn5阳性信号无显著影响,荧光二抗稀释比例为1∶100时荧光更清晰。②激光共聚焦显微镜扫描结果显示,Lcn5在细胞核和细胞质中均有表达;细胞培养到4 h时Lcn5在细胞核中大量表达,出现较强的阳性信号,并且在视野下发现培养液中有颗粒状的阳性信号。综上所述,推测Lcn5可能在附睾头细胞培养的过程中在细胞内合成并分泌到细胞外,对附睾微环境的构建起到了作用,同时可能参与精子的成熟过程。 展开更多
关键词 太行山羊 附睾头细胞 Lcn5 定位
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山羊β防御素124定位及过表达附睾头上皮细胞系的建立 被引量：2
2
作者 黄鑫芸 张俊梅 +3 位作者 邰苗苗 孟繁荣 任有蛇 张春香 《山西农业科学》 2022年第10期1476-1481,共6页
为研究山羊β防御素124(BD124)的生物学功能,进行附睾头上皮细胞BD124的定位研究,并建立BD124过表达附睾头上皮细胞系,应用细胞免疫荧光法对山羊附睾头上皮细胞BD124进行定位;将山羊BD124基因编码区序列连接到LV5穿梭质粒后,测序验证LV5... 为研究山羊β防御素124(BD124)的生物学功能,进行附睾头上皮细胞BD124的定位研究,并建立BD124过表达附睾头上皮细胞系,应用细胞免疫荧光法对山羊附睾头上皮细胞BD124进行定位;将山羊BD124基因编码区序列连接到LV5穿梭质粒后,测序验证LV5-BD124质粒构建情况,然后将其与包装质粒共转染293T细胞进行包装生产并重组LV5-BD124慢病毒,并采用有限稀释法测定病毒滴度;之后采用实时荧光定量PCR和Western blot检测确认LV5-BD124慢病毒侵染96、120 h后山羊附睾头上皮细胞中BD124 mRNA和蛋白的过表达情况;最后用嘌呤霉素进行2次筛选后获得BD124过表达稳转附睾头上皮细胞系。定位结果显示,BD124阳性绿色荧光信号在细胞核周围高度聚集,且在细胞质和细胞核内也有分布。测序结果显示,BD124序列插入LV5慢病毒载体后,表达的LV5-BD124慢病毒载体滴度为3.0×108 TU/mL。荧光定量PCR和Western blot结果显示,LV5-BD124附睾头上皮BD124 mRNA和蛋白表达量显著高于对照组;LV5-BD124侵染后的附睾头上皮细胞经2次嘌呤霉素筛选后,阳性细胞比例增加,传2代后细胞内荧光信号保持稳定。 展开更多
关键词 山羊 附睾头上皮细胞 β防御素124 稳转系
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1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响
3
作者 王丽 郭雅茹 +4 位作者 张俊梅 雷铭凯 王振国 张春香 任有蛇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1990-2000,共11页
旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L... 旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。 展开更多
关键词 Β防御素 1 25(OH)_(2)D_(3) 维生素D受体 基因敲除 附睾头上皮细胞
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