目的:分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞;观察骨桥蛋白重组因子(recombinant rat osteopontin,rrOPN)对表皮干细胞体外增殖作用及促IL-6和IL-1β炎性因子分泌作用的影响。方法:体外分离培养大鼠表皮干细胞,用倒置显微镜及电镜观察其形态...目的:分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞;观察骨桥蛋白重组因子(recombinant rat osteopontin,rrOPN)对表皮干细胞体外增殖作用及促IL-6和IL-1β炎性因子分泌作用的影响。方法:体外分离培养大鼠表皮干细胞,用倒置显微镜及电镜观察其形态,采用β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色鉴定,并进行细胞生长曲线测定,流式细胞仪分析及细胞克隆形成率测定,以角质形成细胞作为对照。实验对不同浓度rrOPN处理的表皮干细胞采用MTT法测定细胞生长率,ELISA法测定IL-6、IL-1炎性因子分泌的变化。结果:倒置显微镜观察所得鼠表皮干细胞呈上皮样生长,电镜观察细胞胞核大,较多处于分裂象。免疫组织化学检测表皮干细胞β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色均呈阳性。细胞周期分析表皮干细胞中48.9%的细胞处于DNA合成期,细胞克隆形成率为34.7%。5～50 ng/mL的rrOPN促进角质形成细胞生长,浓度为15 ng/mL的rrOPN促进细胞生长作用最显著(P<0.05)。rrOPN引起IL-6明显升高(P<0.05),IL-1β未见明显上调。结论:成功建立大鼠表皮干细胞分离、培养方法,rrOPN促进表皮干细胞增殖,并促其炎性因子分泌,影响创口愈合。展开更多
文摘目的:分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞;观察骨桥蛋白重组因子(recombinant rat osteopontin,rrOPN)对表皮干细胞体外增殖作用及促IL-6和IL-1β炎性因子分泌作用的影响。方法:体外分离培养大鼠表皮干细胞,用倒置显微镜及电镜观察其形态,采用β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色鉴定,并进行细胞生长曲线测定,流式细胞仪分析及细胞克隆形成率测定,以角质形成细胞作为对照。实验对不同浓度rrOPN处理的表皮干细胞采用MTT法测定细胞生长率,ELISA法测定IL-6、IL-1炎性因子分泌的变化。结果:倒置显微镜观察所得鼠表皮干细胞呈上皮样生长,电镜观察细胞胞核大,较多处于分裂象。免疫组织化学检测表皮干细胞β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色均呈阳性。细胞周期分析表皮干细胞中48.9%的细胞处于DNA合成期,细胞克隆形成率为34.7%。5～50 ng/mL的rrOPN促进角质形成细胞生长,浓度为15 ng/mL的rrOPN促进细胞生长作用最显著(P<0.05)。rrOPN引起IL-6明显升高(P<0.05),IL-1β未见明显上调。结论:成功建立大鼠表皮干细胞分离、培养方法,rrOPN促进表皮干细胞增殖,并促其炎性因子分泌,影响创口愈合。
