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eomesa功能缺失对斑马鱼雌鱼生殖的影响
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作者 张婷婷 佟广香 +4 位作者 孙志鹏 闫婷 唐国盘 周慧杰 匡友谊 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2023年第5期86-96,共11页
eomesa基因是T-box基因家族重要的转录因子,eomesa突变导致雌性斑马鱼(Danio rerio)生殖障碍,但其机制未知。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了eomesa纯合突变系(eomesa^(-/-)),对其进行了繁殖能力分析、卵巢组织学观察及采用qRT-PCR分析... eomesa基因是T-box基因家族重要的转录因子,eomesa突变导致雌性斑马鱼(Danio rerio)生殖障碍,但其机制未知。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了eomesa纯合突变系(eomesa^(-/-)),对其进行了繁殖能力分析、卵巢组织学观察及采用qRT-PCR分析了6个性腺发育相关基因在突变体12 hpf(hours post fertilization)胚胎和45 dpf(days post fertilization)、60 dpf、90 dpf 3个胚后发育阶段中的表达水平变化,以期探讨eomesa影响雌性斑马鱼生殖障碍的机制。研究结果表明,eomesa^(-/-)斑马鱼存在背鳍和臀鳍缺失的表型,雄鱼比例显著增加,可自然繁殖,而雌鱼不能自然排卵,但可通过人工按压腹部排出卵子并以人工授精方式获得正常发育的子代;eomesa^(-/-)斑马鱼卵巢和输卵管形态正常,但卵母细胞发育滞后,胚胎发育观察发现突变体原肠胚外包延迟,且胚胎畸形率显著增加。qRT-PCR结果显示,原始生殖细胞标志基因dnd1和nanos3在胚胎发育体节期(12 hpf)突变体中的表达量显著低于野生型的表达量;dnd1、vasa和nanos3在45 dpf时突变体卵巢组织中的表达量显著高于野生型的表达量;在90 dpf时突变体卵巢组织中cyp17a1和amh基因的表达量显著低于野生型的表达量;而dmrt1基因在突变体中的表达量极显著高于野生型的表达量。推测eomesa基因敲除干扰了生殖细胞的发育和分化,以及排卵机制,并影响了cyp17a1和dmrt1的表达,致使雌雄分化异常。 展开更多
关键词 eomesa 斑马鱼(Danio rerio) 卵巢发育 生殖障碍 QRT-PCR
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eomesa^(fh105)斑马鱼无背鳍表型分析及其机制的初步研究 被引量:1
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作者 霍锦倩 宋诗颖 +1 位作者 杜博博 任建峰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期514-523,共10页
从进化角度来看,鱼类的偶鳍与四足动物的四肢属于同源器官,它们的发育调控机理研究比较清楚;而鱼类的奇鳍是偶鳍的祖先,其发育调控模式与偶鳍相似,但是对奇鳍形成和发育机制的详细研究却很少。本研究对野生型和背鳍缺失突变体eomesa^(fh... 从进化角度来看,鱼类的偶鳍与四足动物的四肢属于同源器官,它们的发育调控机理研究比较清楚;而鱼类的奇鳍是偶鳍的祖先,其发育调控模式与偶鳍相似,但是对奇鳍形成和发育机制的详细研究却很少。本研究对野生型和背鳍缺失突变体eomesa^(fh105)斑马鱼(Danio rerio)背鳍的发育过程进行了比较研究,利用阿尔新兰-茜素红双染色法对野生型和突变体的背鳍骨骼形态进行分析,通过原位杂交和组织qPCR技术对eomesa基因的表达位置和模式进行了分析,最后对野生型和突变体背鳍发育3个标准体长(SL)点的转录组进行了比较研究。背鳍发育观察显示,野生型斑马鱼SL约为6.3 mm时背鳍鳍芽形成,SL约为7.5 mm时,背鳍已经基本形成;而突变体不能形成正常的鳍芽,同时鳍芽的向外生长受到影响,导致无背鳍表型。骨骼染色显示,突变体背鳍骨骼出现3种不同程度的缺陷。组织qPCR和原位杂交显示,eomesa在脑部表达,在背鳍中并无明显表达。转录组分析结果显示,3个标准体长点共有的差异基因很少,其中上调基因19个,下调基因5个。本研究表明,eomesa并不是鳍芽起始的关键基因,但影响了鳍芽的形成或向外生长,最终导致突变体出现多种类型背鳍缺失。 展开更多
关键词 斑马鱼 背鳍 鳍芽 eomesa
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斑马鱼eomesb基因突变体的构建及其功能分析
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作者 胡金萌 杜博博 +2 位作者 宋诗颖 张庆华 任建峰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期1047-1054,共8页
Eomesodermin(Eomes)是T-box转录因子基因家族的成员,在脊椎动物胚胎发育、模式形成和形态发生过程中发挥重要作用。斑马鱼(Danio rerio)eomesa基因的一个点突变导致其母源合子突变体胚胎发育延迟而大量死亡,而eomesa合子突变体可正常... Eomesodermin(Eomes)是T-box转录因子基因家族的成员,在脊椎动物胚胎发育、模式形成和形态发生过程中发挥重要作用。斑马鱼(Danio rerio)eomesa基因的一个点突变导致其母源合子突变体胚胎发育延迟而大量死亡,而eomesa合子突变体可正常发育至性成熟,但缺失背鳍。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了斑马鱼eomesa旁系同源基因eomesb的突变体,eomesb纯合突变体不仅可正常发育至性成熟,而且鳍的发育也完全正常。q-PCR和整体原位杂交实验结果显示,eomesa和eomesb在脑部组织具有重叠的表达域,eomesb在中脑的表达略高于eomesa,故推测两基因在脑部可能行使相似的功能,存在一定的功能冗余。对2,4,6 dpf(Days post fertilization)和6 dpf的WT和突变体q-PCR基因表达分析显示,eomesb突变对eomesa的表达没有明显影响。eomesa^(-/-);eomesb^(-/-)双突变体未出现背鳍缺失以外的附加表型,推测斑马鱼eomesa和eomesb在背鳍发育过程中可能不存在功能冗余,eomesb不参与背鳍的发育过程。此外,整体原位杂交实验结果显示,eomesb突变也不影响其同源基因tbr1a和tbr1b的早期表达。eomesb纯合突变体未观察到明显表型,可能与其影响的功能不引起明显表型有关,也可能与其它基因的遗传补偿效应有关。本研究结果为深入研究斑马鱼eomesb基因的功能提供了实验材料,同时对研究eomesa与eomesb基因功能分化具有参考价值。 展开更多
关键词 斑马鱼 CRISPR/Cas9 eomesa Eomesb Q-PCR
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Differences in postembryonic dorsal fin development resulted in phenotypic divergence in two goldfish strains, Red Cap Oranda and Ranchu 被引量:1
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作者 Nan Yan Jinqian Huo +7 位作者 Yu-Wen Chung-Davidson Wenyao Cui Weijie Huang Wei He Qinghua Zhang Weiming Li Yan Zhou Jianfeng Ren 《Aquaculture and Fisheries》 2022年第4期396-404,共9页
Goldfish(Carassius auratus auratus)are important ornamental fish that have experienced extreme anthropogenic selection and exhibit diverse phenotypes.Loss of the dorsal fin is a key characteristic that distinguishes t... Goldfish(Carassius auratus auratus)are important ornamental fish that have experienced extreme anthropogenic selection and exhibit diverse phenotypes.Loss of the dorsal fin is a key characteristic that distinguishes the Egg-goldfish from the Wen-goldfish.However,the mechanisms underlying the divergence in dorsal fin development are still unknown between the Egg-goldfish and the Wen-goldfish.In this study,we sought to unravel the postembryonic developmental processes of two goldfish strains,Red Cap Oranda,a representative of the Wen-goldfish,and Ranchu,a representative of the Egg-goldfish.We examined the developmental morphology of the dorsal fin in five-month-old goldfish larvae using both Alcian blue-alizarin red staining and X-ray photography.We showed that the developmental processes of the dorsal fin fold were different in Ranchu compared to Red Cap Oranda,despite similarity in their general developmental processes.We categorized the postembryonic development of Ranchu larvae into four types based on the number of the initial residual dorsal fin fold appearing at protruding-mouth stage.The number,size and position of the initial residual dorsal fin fold appeared at hatching affected and eventually determined the phenotypic variations in dorsal fin defects in Ranchu.In addition,we genotyped the eomesa gene to determine whether it would be a candidate gene responsible for the loss of the dorsal fin in Ranchu.The eomesa CDS sequence exhibited no nonsense mutation in Ranchu.In summary,the absence of the dorsal fin fold during postembryonic development eventually resulted in the loss of the dorsal fin in Ranchu.Further investigation is required to determine whether other genes and developmental pathways play important roles in the loss of the dorsal fin in Ranchu. 展开更多
关键词 Egg-goldfish Postembryonic development Fin fold Dorsal fin Rays and radials eomesa
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