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2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查 被引量：70
1
作者 高玉龙 邵华斌 +7 位作者 罗青平 潘伟 秦立廷 孙芬芬 刘超男 高宏雷 祁小乐 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期32-35,43,共5页
为了解自2009年年初以来国内一些地区禽白血病流行情况及流行毒株的分子特征,我们从湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽8个省区39个鸡场采集疑似禽白血病病料样品178份,用ALV-A、ALV-B和ALV-J特异性引物,通过PCR方法进... 为了解自2009年年初以来国内一些地区禽白血病流行情况及流行毒株的分子特征,我们从湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽8个省区39个鸡场采集疑似禽白血病病料样品178份,用ALV-A、ALV-B和ALV-J特异性引物,通过PCR方法进行检测。结果表明,8个省的35个鸡场的124份病料中检出了ALV-J(69.7%);25份病料中检出了ALV-A(13.9%);7份病料中检出了ALV-B(3.9%)。14个分离毒株env基因氨基酸同源性为84.3%～99%;与J亚群原型毒株HPRS-103的氨基酸序列同源性为87.3%～98.2%;与其它J亚群env基因氨基酸序列同源性为83%～97.4%。遗传进化分析表明,14个ALV-J分离株分别分属于不同的分支。其中,LJL09DH02分离株与其它分离株及参考毒株的的亲缘关系最远,与HPRS-103的氨基酸同源性仅为87.3%。另外4个分离株的env基因与HPRS-103的氨基酸同源性低于93%,其余9株与HPRS-103的同源性较高(96.6%以上)。该调查结果表明,我国目前ALV的感染主要以J亚群为主,ALV-A和B同时存在。 展开更多
关键词 禽白血病 J亚群白血病 血管瘤 env基因 分子流行病学
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我国云南德宏地区HIV感染者HIV毒株膜蛋白基因的序列测定和分析 被引量：51
2
作者 邵一鸣 赵全壁 +6 位作者 王斌 陈筝 苏玲 曾毅 赵尚德 张家鹏 段一娟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期291-299,共9页
１９９０年和１９９３年，从云南瑞丽县感染ＨＩＶ的静脉注射毒品者中采血，分离白细胞，用ＰＣＲ方法扩增ＨＩＶ１膜蛋白基因（ｅｎｖ）并克隆。核苷酸序列分析由手工和ＡＢＩ公司ＤＮＡ序列分析仪进行。将云南瑞丽ＨＩＶ毒株的ｅｎｖ... １９９０年和１９９３年，从云南瑞丽县感染ＨＩＶ的静脉注射毒品者中采血，分离白细胞，用ＰＣＲ方法扩增ＨＩＶ１膜蛋白基因（ｅｎｖ）并克隆。核苷酸序列分析由手工和ＡＢＩ公司ＤＮＡ序列分析仪进行。将云南瑞丽ＨＩＶ毒株的ｅｎｖＶ３－Ｖ５区序列与国际各亚型同源序列作比较，９０年和９３年ＨＩＶ毒株与Ｂ亚型的同源性均为最高。这表明云南瑞丽流行的ＨＩＶ毒株属国际Ｂ亚型。经分析发现，在９０年的１０个毒株的序列中，有８个是典型的Ｂ亚型序列，即Ｖ３环顶端的四肽是ＧＰＧＲ，占８０％；而在９３年的毒株中，该型序列只见于２１个样品中的１２个，比例下降到５７％。与此同时，Ｖ３环顶端四肽为ＧＰＧＱ的Ｂ亚型中的泰国基因型序列，则由９０年的１０％（１／１０）上升到９３年的２９％（６／２１）。进一步分析编码ＧＰＧＲ最末一个精氨酸密码子发现，ＣＧＡ与ＡＧＡ比例由９０年的１：７上升到９３年的５：７。由于ＣＧＡ比ＡＧＡ更接近编码谷氨酰胺（Ｑ）密码子ＣＡＡ，这种以ＧＰＧＱ为特征的泰国基因型Ｂ亚型毒株，在该地区还可能进一步增高。这些数据提示，当地流行的ＨＩＶ毒株Ｖ３环顶端的四肽在过去几年中由ＧＰＧＲ向ＧＰＧＱ漂移，其原因尚不清楚。 展开更多
关键词 艾滋病毒 感染 毒株 膜蛋白基因 序列测定
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河北省HIV-1流行株的env基因序列测定和亚型分析 被引量：19
3
作者 赵翠英 邢辉 +7 位作者 赵宏儒 黄海龙 刘艳芳 马鹏飞 李保军 张玉琪 王玉 邵一鸣 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期533-535,共3页
目的了解河北省HIV-1亚型的分布特点和传播方式,推测流行时间,预测流行趋势. 方法采集HIV感染者的全血样品,分离外周血单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应(nested-PCR),扩增HIV-1的env基因的C2-V3区并进行序列测定和亚... 目的了解河北省HIV-1亚型的分布特点和传播方式,推测流行时间,预测流行趋势. 方法采集HIV感染者的全血样品,分离外周血单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应(nested-PCR),扩增HIV-1的env基因的C2-V3区并进行序列测定和亚型分析. 结果对22份HIV-1感染者的样品,扩增得到了18份HIV-1 env C2-V3基因片段,经序列测定和基因分析鉴定出3种HIV-1 M亚群基因亚型,即:B′、CRF-BC和C亚型.B′亚型的组内基因离散率为7.84%±3.14%(n＝14),基因序列与云南瑞丽株rl42(泰国B亚型)相近;2株CRF-BC亚型与广西毒株的基因离散率为4.60%.与血液途径感染有关的人员均为B′(泰国B)亚型. 结论目前,在河北省发现了3种HIV-1亚型.输供血途径中B′亚型仍是主要的流行亚型,可能来源于云南吸毒人群.HIV-1 B′亚型在河北省的流行时间大约为7～9年. 展开更多
关键词 HIV-1 基因 亚型 序列分析 HIV-1亚型 基因序列测定 env基因 亚型分析 河北省 流行株
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中国艾滋病病毒1型AE循环重组型毒株env基因的变异和进化分析 被引量：14
4
作者 梁浩 邢辉 +8 位作者 魏民 陈钊 关琪 黄海龙 全宇 陈健平 洪坤学 施侣元 邵一鸣 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期966-970,共5页
目的　研究中国艾滋病病毒 1型 (HIV 1)AE循环重组型 (CRF0 1 AE)毒株env不同基因区序列变异的特点及其与进化压力的关系。方法　应用巢式聚合酶链反应 (nested PCR)对从全国部分省收集来的HIV 1感染者血液样本中的HIV 1外膜蛋白 (env)... 目的　研究中国艾滋病病毒 1型 (HIV 1)AE循环重组型 (CRF0 1 AE)毒株env不同基因区序列变异的特点及其与进化压力的关系。方法　应用巢式聚合酶链反应 (nested PCR)对从全国部分省收集来的HIV 1感染者血液样本中的HIV 1外膜蛋白 (env)基因进行扩增和亚型鉴定后 ,选择 3 4份CRF0 1 AE重组型HIV 1毒株env基因V3～V4区及其邻近区域的序列进行系统进化树和氨基酸变异分析 ,并计算和分析氨基酸同义替换 (Ks)值和非同义替换 (Ka)值及Ks Ka比值。结果基因系统树显示中国的 3 4份样本CRF0 1 AE重组型毒株与我国代表株AE .97CNGX2F和泰国代表株AE .CM 2 40、AE .93TH2 53聚集在一起。氨基酸替换主要发生在C3和V4区 ,而V3区和V3上游区氨基酸序列相对保守 ,糖基化位点也比较保守。V 3环顶端四肽以GPGQ为主 (87.50 % )。大部分毒株的第 3 0 6和 3 2 0位点上没有出现带正电荷的氨基酸。整个V 3～V4区的Ks值显著高于Ka值(P <0 .0 0 1) ,且Ks Ka比值显著高于 1(P <0 .0 0 1) ,只有V4区Ks Ka比值显著低于 1(P <0 .0 1)。结论　目前多数流行于中国的CRF0 1 AE重组型HIV 1毒株具有较高的同源性 ,在进化上关系密切。氨基酸替换主要发生在C3和V4区 ,而不是V3区。由于大部分毒株的第 3 0 6和 3 2 0位点上没有出现带正电荷的? 展开更多
关键词 中国 艾滋病病毒1型 AE循环重组型 env基因 基因变异 巢式聚合酶链反应
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禽白血病病毒J亚群囊膜蛋白env基因的克隆和表达 被引量：9
5
作者 秦爱建 崔冶中 +1 位作者 Lucy Lee Aly Fadly 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期54-59,共6页
禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 ... 禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 7kb。将克隆出的env基因与杆状病毒pBlue Bac4表达质粒DNA连接 ,构建成转移性载体 pBac4817env ,通过与Bac N Blue杆状病毒DNA共转染 ,获得了重组病毒rBac4817env 2。该重组杆状病毒感染Sf9细胞 ,能高效表达env基因产物。免疫荧光分析结果证明 ,单克隆抗体G2或多价兔抗envgp37血清能识别Sf9细胞中重组env基因表达的特异性抗原 ;Westernblotting分析结果表明 ,表达的重组基因产物的分子量大小约为 90kD～ 94kD。用这些重组基因产物免疫鸡可以诱导鸡产生出高滴度的抗ALV J特异性抗体。这一结果提示 ,这种杆状病毒表达的重组基因产物有助于ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 env基因 克隆 表达
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A亚群禽白血病病毒QC6281株的分离与gp85基因序列分析 被引量：11
6
作者 乔彦华 王永强 +2 位作者 庞平 金铮 陈福勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第12期9-12,共4页
本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中... 本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中,扩增的env基因片段大小为1 239 bp,其中包括完整的gp 85基因,将gp 85基因亚克隆到pMD19-T-si mple载体中并测序,gp 85基因大小为1 032 bp,编码344个氨基酸。将env基因片段和推导的氨基酸序列与GenBank中9株ALV的env基因相应序列做同源性分析并制作进化树图谱。发现QC6281与已发表的A亚群禽白血病病毒株该区域核苷酸同源性在83.8%～98%,氨基酸同源性在86.9%～98.5%。其中与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)同源性最高,核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为98.5%;且与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病性研究打下基础。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 GP85基因 env基因 序列比较
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感染性马传染性贫血病毒嵌合克隆的构建 被引量：10
7
作者 何翔 邵一鸣 +4 位作者 薛飞 范秀娟 贾斌 赵全壁 沈荣显 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期128-132,共5页
在已有的全长感染性克隆pFD3的基础上,构建了新的低拷贝的全长克隆pLGFD3-8。按照疫苗制备过程中env基因的变化情况,采用基因替换和定点突变的方法,构建了一系列具有马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株env基因及其主要突变特征的嵌合克隆。... 在已有的全长感染性克隆pFD3的基础上,构建了新的低拷贝的全长克隆pLGFD3-8。按照疫苗制备过程中env基因的变化情况,采用基因替换和定点突变的方法,构建了一系列具有马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株env基因及其主要突变特征的嵌合克隆。利用这些克隆转染FDD细胞,并用逆转录酶活性检测和PCR方法确定其感染性。结果发现,在FDD细胞中传代3次后,可在细胞培养物中检测到逆转录酶活性和原病毒DNA的存在,在电镜下可以观察到典型的EIAV病毒颗粒。这一结果为进一步研究马传染性贫血病毒致病的分子机制和免疫保护机理奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 感染性马传染性贫血病毒 嵌合克隆 基因替换 定点突变 感染性克隆
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湖南省禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析 被引量：10
8
作者 吕孙良 张慧慧 +3 位作者 胡文琴 黎洁玉 宋雅婷 肖朝庭 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1936-1941,1975,共7页
为了解禽白血病病毒(ALV)在湖南省各禽类养殖场的感染情况,于2018年1月至2019年1月采集湖南省不同地区21个养殖场的156份组织与血清样品。分别设计针对ALV 5′非翻译区(5′UTR)的检测引物和env基因近全长扩增引物,通过RT-PCR首先用检测... 为了解禽白血病病毒(ALV)在湖南省各禽类养殖场的感染情况,于2018年1月至2019年1月采集湖南省不同地区21个养殖场的156份组织与血清样品。分别设计针对ALV 5′非翻译区(5′UTR)的检测引物和env基因近全长扩增引物,通过RT-PCR首先用检测引物对样品进行检测,然后扩增阳性样品ALV env基因全长并测序分析。结果显示,19个养殖场检测出E亚群ALV(ALV-E),其env基因与GenBank中ALV-E的核苷酸序列同源性为99.38%~99.90%;1个养殖场检测出ALV-J,其env基因推导的氨基酸序列与GenBank中ALV-J的氨基酸序列同源性最高为92.63%,并且在该场同一样品中同时检出ALV-E和ALV-J;1个野鸡养殖场检测出ALV-F,其env基因推导的氨基酸序列与已发表的ALV-F的氨基酸同源性为88.69%;同时检测出2株新型的ALV,其env基因推导的氨基酸序列与已发表的A、B、C、D、E、F、J和K亚群的氨基酸同源性为44.68%~58.42%。结果表明,ALV-E在湖南省禽养殖场普遍存在,并首次在我国养殖野鸡中检测出ALV-F,而且在野鸡中发现了很可能是ALV新亚群的2株病毒。本试验为ALV在湖南禽类养殖场的流行情况研究提供了依据。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 env基因 序列分析
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禽白血病病毒贵州流行株env基因克隆与序列分析 被引量：7
9
作者 何玲 杨秋明 +3 位作者 袁海文 杨源 温贵兰 程振涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2683-2690,共8页
为了解禽白血病病毒(ALV)贵州流行株的遗传变异情况及分子特征,本试验基于ALV env基因设计合成引物对禽白血病贵州临床病例进行目的基因扩增、克隆和序列分析。结果显示,从临床病例中筛选获得3份阳性样本,PCR扩增均获得大小约921 bp的... 为了解禽白血病病毒(ALV)贵州流行株的遗传变异情况及分子特征,本试验基于ALV env基因设计合成引物对禽白血病贵州临床病例进行目的基因扩增、克隆和序列分析。结果显示,从临床病例中筛选获得3份阳性样本,PCR扩增均获得大小约921 bp的目的基因片段,将其命名为:GZ-ALV-1株、GZ-ALV-2株和GZ-ALV-3株。序列分析结果显示,3株ALV贵州流行株之间核苷酸同源性在97.2%~97.6%之间,与国内外ALV-J的同源性相对较高,为93.1%~99.3%;而与A、B、C、D、E、K亚群ALV同源性仅为51.4%~53.2%。系统进化分析显示,3株ALV贵州流行株与ALV-J亚群参考株处于同一分支,表明本试验所检测的ALV毒株均为ALV-J亚群;与A、B、C、D、E、K亚群处于不同进化分支。基因变异分析显示,3株流行株37处相同核苷酸变异导致17处氨基酸发生位点变异,其中9个可变点在高变区hr1和hr2,1个可变点在低变区vr3。结果表明,3株ALV贵州流行株均为ALV-J亚群,env基因存在位点发生了变异,且可变位点位于序列高变区。本研究结果为明确贵州禽白血病流行概况及ALV的防控与净化提供基础数据。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) env基因 克隆 序列分析
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一株猫艾滋病病毒的巢式PCR检测及亚型鉴定
10
作者 吕相彤 王璐瑶 +4 位作者 陈颖皙 王俞茜 蔡亮 王玉龙 王亚君 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第17期71-74,共4页
为了进一步了解猫免疫缺陷病毒(FIV)的区域流行情况,试验采用巢式PCR方法对15份流浪猫全血样品进行FIV gag基因扩增,检测出FIV阳性样品后再通过巢式PCR扩增得到FIV env基因V3~V5高变区序列,应用DNAMAN软件对阳性样品env基因的V3~V5高变... 为了进一步了解猫免疫缺陷病毒(FIV)的区域流行情况,试验采用巢式PCR方法对15份流浪猫全血样品进行FIV gag基因扩增,检测出FIV阳性样品后再通过巢式PCR扩增得到FIV env基因V3~V5高变区序列,应用DNAMAN软件对阳性样品env基因的V3~V5高变区序列与NCBI中收录的参考毒株进行比对,使用MEGA 7.0软件构建进化树并进行遗传进化分析。结果表明:检测出1份FIV阳性样品,将FIV阳性株命名为XM07毒株,该毒株的env基因V3~V5高变区序列与NCBI中C78毒株的核苷酸序列相似性达到97.57%,与SH-2363毒株的核苷酸序列相似性达到96.83%;XM07毒株与SH-2363毒株在同一进化分支中,鉴定为A亚型。说明试验鉴定的FIV毒株未发生明显变异。 展开更多
关键词 猫免疫缺陷病毒(FIV) env基因 GAG基因 巢氏PCR 亚型鉴定
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宁波市男男同性恋人群中HIV-1感染者免疫状况和亚型分布研究 被引量：4
11
作者 张姝 许国章 +3 位作者 胡逢蛟 倪红霞 高红 焦素黎 《中国预防医学杂志》 CAS 2010年第4期354-357,共4页
目的研究宁波市男男同性恋(MSM)人群中HIV-1感染者的免疫状况和HIV毒株的亚型分布特点。方法收集宁波市13名已经被确认为HIV-1型阳性的MSM的全血样品,对CD4+T淋巴细胞进行绝对数计数,运用套式PCR方法扩增病毒膜蛋白env基因的C2-V3区并... 目的研究宁波市男男同性恋(MSM)人群中HIV-1感染者的免疫状况和HIV毒株的亚型分布特点。方法收集宁波市13名已经被确认为HIV-1型阳性的MSM的全血样品,对CD4+T淋巴细胞进行绝对数计数,运用套式PCR方法扩增病毒膜蛋白env基因的C2-V3区并进行序列测定。应用DNASTAR软件对序列和参考序列进行比对分析,确定基因亚型。结果成功获得11条env基因序列,确定1株为B亚型,4株为01_AE流行重组型,6株为07_BC流行重组型。该11例HIV-1阳性全血的CD4+T淋巴细胞绝对数最低106个/μl,最高649个/μl,平均350个/μl。结论本研究表明,宁波市MSM人群中存在多种HIV-1亚型,近半数的感染者免疫状况低下需要抗病毒治疗,流行形势严峻,应加强对该人群免疫状况和HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略。 展开更多
关键词 HIV-1 男男同性恋者 env基因 亚型 CD4+
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禽白血病病毒J亚群env基因产物的抗原性分析 被引量：4
12
作者 秦爱建 刘岳龙 +2 位作者 金文杰 Lucy Lee Aly Fadly 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期99-104,共6页
用PCR扩增方法将ALV Jenv基因不同片段进行了克隆 ,并构建了env基因片段GST融合蛋白载体。用Westernblot实验证明 ,大肠杆菌表达的不同env基因片段的GST融合蛋白能与相应的单克隆抗体产生特异性反应性 ,单克隆抗体JE9和G2识别的抗原位... 用PCR扩增方法将ALV Jenv基因不同片段进行了克隆 ,并构建了env基因片段GST融合蛋白载体。用Westernblot实验证明 ,大肠杆菌表达的不同env基因片段的GST融合蛋白能与相应的单克隆抗体产生特异性反应性 ,单克隆抗体JE9和G2识别的抗原位点位于gp85的氨基酸 6 5～ 1 5 5区域 ,而I45识别的抗原表位位于env基因的另一区域 (1 5 6～ 2 3 3位氨基酸 )。ALV J氨基酸多肽而非糖基化位点决定ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 env基因 表达 抗原分析
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云南省禽流感、新城疫与3种免疫抑制性病原共感染的检测 被引量：4
13
作者 宋建领 石凤海 +12 位作者 田建国 叶丛华 张文东 赵焕云 吕粤 岳亮 李华春 邱薇 冯子良 张思东 范泉水 张应国 张富强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期24-29,共6页
为调查云南省禽流感病毒、新城疫病毒与免疫抑制性病毒混合感染的情况,对云南省2007年1月～2009年10月期间145份禽流感阳性及30份新城疫阳性样品进行禽网状内皮增生病病毒(REV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及鸡传染性贫血病毒(CIAV)的检... 为调查云南省禽流感病毒、新城疫病毒与免疫抑制性病毒混合感染的情况,对云南省2007年1月～2009年10月期间145份禽流感阳性及30份新城疫阳性样品进行禽网状内皮增生病病毒(REV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及鸡传染性贫血病毒(CIAV)的检测。禽流感阳性样品中ALV-J的感染阳性率为15.9%,REV的感染阳性率为22.8%,CIAV的感染阳性率为26.9%;新城疫阳性样品中ALV-J的感染阳性率为13.3%,REV的感染阳性率为23.3%,CIAV的感染阳性率为26.7%;共有30份样品发生多重感染,多重感染率为17.1%。对不同区域的4份禽白血病病毒阳性样品、10份禽网状内皮增生病病毒阳性样品、10份禽传染性贫血病毒阳性样品进行了序列比对和系统发育分析。结果表明,云南ALV-J毒株gp85基因与国内外毒株核苷酸及氨基酸同源性分别介于80.4%～96.7%、85.2%～94.5%;REV毒株env基因核苷酸及氨基酸之间的同源性为98.8%～99.8%、97.7%～99.5%;CIAV毒株vp2基因核苷酸及氨基酸之间的同源性为92.4%～100.0%、93.7%～100.0%。 展开更多
关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 GP85基因 env基因 VP2基因
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1株J亚群禽白血病病毒env基因克隆及生物信息学分析 被引量：1
14
作者 陈玫婷 郑从森 +6 位作者 梁泽贤 林巧儿 常传哲 周俊 冯军 李林林 覃丽梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1785-1795,共11页
【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行... 【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行测序,利用SeqMan拼接env基因。将该env基因与国内外多个ALV亚群进行序列比对及遗传进化分析,并借助多种生物信息学软件对env蛋白进行分析,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、乙酰化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇和B细胞抗原表位预测。【结果】ALV-J毒株的env基因全长1719 bp,获得GenBank登录号为OP837418,其与J亚群ALV位于同一进化分支,相似性为89.3%~94.8%。该env蛋白有2个跨膜区,是由572个氨基酸组成的不稳定的亲水蛋白,不稳定系数预测值为43.49,总平均亲水性为―0.201;该env蛋白为非分泌蛋白,无信号肽,有17个N-糖基化修饰位点、77个O-糖基化修饰位点、42个磷酸化修饰位点、21个潜在抗原决定簇和9个连续碱基数超过10个的B细胞线性表位。该env蛋白的二级结构中无规则卷曲占比最大,为38.29%。【结论】env基因是导致ALV遗传变异的关键基因,其编码的囊膜蛋白env具有不稳定性,存在多个蛋白修饰位点和抗原表位。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) J亚群 env基因 生物信息学
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乌骨鸡J亚型禽白血病病毒的分离及其全基因组遗传进化分析
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作者 王国君 陈月 +4 位作者 赵蓉 严红亚 李珂 李文贵 信爱国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1122-1130,共9页
为了解云南地方品种盐津乌骨鸡感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从云南省盐津县某规模化盐津乌骨鸡种鸡场中分离ALV,并对1株ALV-J(YN2021株)的全基因组进行序列分析。结果显示,该场乌骨鸡的ALV感染阳性率为16.66%,以ALV-J亚型感染为主,也存... 为了解云南地方品种盐津乌骨鸡感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从云南省盐津县某规模化盐津乌骨鸡种鸡场中分离ALV,并对1株ALV-J(YN2021株)的全基因组进行序列分析。结果显示,该场乌骨鸡的ALV感染阳性率为16.66%,以ALV-J亚型感染为主,也存在ALV-B亚型单独感染和ALV-J/B亚型混合感染。测序表明YN2021株基因组全长7 618 bp,与参考毒株核苷酸同源性为65.0%~97.1%,其中env基因N端糖基化位点与参考毒株存在差异;遗传进化分析显示,YN2021株可能是由ALV广东株和广西株重组产生的。本研究首次报道了云南地方品种盐津乌骨鸡中ALV-J的全基因序列,为我国研究ALV-J遗传进化奠定了基础。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚型 遗传进化分析 env基因 5′LTR
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禽网状内皮组织增生病病毒囊膜蛋白基因的克隆及其原核表达 被引量：3
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作者 瞿晓兰 王宏俊 +1 位作者 陈小玲 章振华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期154-157,共4页
以本实验室保存的REV毒株为模板,采用RT_PCR技术扩增了REV env部分基因,长为939 bp,并进行亚克隆到pMD18_T质粒载体上,连接、转化、鉴定后得到阳性重组质粒pET_env,将目的片段进行序列分析,结果表明,该REV的env基因与已发表的SNV株、中... 以本实验室保存的REV毒株为模板,采用RT_PCR技术扩增了REV env部分基因,长为939 bp,并进行亚克隆到pMD18_T质粒载体上,连接、转化、鉴定后得到阳性重组质粒pET_env,将目的片段进行序列分析,结果表明,该REV的env基因与已发表的SNV株、中国HA9901株以及A株同源性均达94%以上,推导的氨基酸同源性为94%以上。将该基因片段与原核表达载体pET_32a重组,并将重组质粒转化至宿主菌BL21中,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS_PAGE电泳,免疫印迹和薄层凝胶扫描分析,表达产物与理论推理一致;免疫印迹结果证明,表达的env蛋白可被REV阳性血清所识别。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒 env基因 克隆 原核表达
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抗J亚群禽白血病病毒的鸡胚成纤维细胞系建立 被引量：4
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作者 叶建强 秦爱建 +3 位作者 邵红霞 刘红梅 金文杰 刘岳龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期456-460,共5页
将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-Jenv)插入pcDNA3.1真核表达载体,构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞。细胞经传30代后,冻存。13个月后复苏,置不含药物的培养基中传代培养。连续... 将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-Jenv)插入pcDNA3.1真核表达载体,构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞。细胞经传30代后,冻存。13个月后复苏,置不含药物的培养基中传代培养。连续传40代后,分别用PCR、Southern blot、间接免疫荧光(IFA)及Western blot对该细胞中的env基因进行了检测,并进行了抗病毒感染分析。研究结果表明,通过Zeocin药物筛选获得了稳定表达ALV-Jenv基因的鸡胚成纤维细胞系,命名为pcDNA-env-DF-1细胞。该细胞在体外抗ALV-J感染试验中,能抵抗1×104个TCID50病毒感染量,提示所构建的细胞系具有良好的抗病毒作用。这一细胞系的构建为研究ALV-J Env蛋白与宿主细胞表面受体相互作用分子机理提供了很好的工具。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 env基因 表达 细胞系 抗病毒感染
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贵州地区威宁鸡禽白血病病毒分离鉴定及env基因遗传进化分析
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作者 李婷 徐景峨 +7 位作者 余波 杨莉 韩雪 吴仙 赵滨 蒲龄 潘永 王璇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期76-80,137,共6页
为了对贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡进行禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的分离鉴定及env基因遗传进化分析,试验对送检的病死鸡进行临床症状和剖检病变观察,以及采集发病鸡肝脏进行细菌分离、ALV分离、ALV p27抗原的ELIS... 为了对贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡进行禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的分离鉴定及env基因遗传进化分析,试验对送检的病死鸡进行临床症状和剖检病变观察,以及采集发病鸡肝脏进行细菌分离、ALV分离、ALV p27抗原的ELISA检测和病毒PCR鉴定,进一步对分离株的env基因进行克隆、测序,与GenBank收录的其他ALV参考株进行序列比对分析,并构建遗传进化树。结果表明:剖检可见病死鸡腹腔中及肝脏上有肿瘤结节;取病死鸡的肝脏、心脏接种于含5%新生牛血清的TSA培养基和麦康凯琼脂培养基培养24 h,未见有细菌生长;取病死鸡肝脏组织,处理后接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)细胞,用ALV ELISA抗原检测试剂盒检测发现ALV p27抗原呈阳性;用ALV-J亚群env基因引物进行PCR检测,结果呈阳性,PCR产物大小约为924 bp;将分离毒株命名为ALV-GZ株,该毒株与国内外分离的ALV-J亚群的核苷酸相似性为97.0%~99.4%,与国内外分离的其他亚群的核苷酸相似性为50.8%~53.0%,与AHFX/16916株(GenBank登录号为MF614031.1)处于同一遗传进化分支,亲缘关系最近。说明贵州省纳雍县某养殖场发病威宁鸡种鸡感染了ALV-J亚群,且ALV-J亚群毒株在缓慢的变异演化中向地方品系鸡蔓延传播。 展开更多
关键词 贵州地区 威宁鸡 禽白血病病毒 J亚型 env基因 遗传进化分析
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哈尔滨市男男同性恋HIV-1感染者env基因V3环序列分析 被引量：4
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作者 刘婷 邵冰 +6 位作者 李文静 崔文秀 李航 杜鑫 王永革 王滨有 王福祥 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2013年第4期80-82,共3页
目的了解哈尔滨市感染HIV的男男同性恋者(MSM)HIV-1亚型分布状况,以及env基因V3环序列变异情况。方法采用巢氏PCR扩增HIV-1 env基因V3～V4区并对扩增产物进行测序,利用MEGA、BioEdit软件进行基因序列整理和分析。结果哈尔滨市28例MSM人... 目的了解哈尔滨市感染HIV的男男同性恋者(MSM)HIV-1亚型分布状况,以及env基因V3环序列变异情况。方法采用巢氏PCR扩增HIV-1 env基因V3～V4区并对扩增产物进行测序,利用MEGA、BioEdit软件进行基因序列整理和分析。结果哈尔滨市28例MSM人群HIV-1感染者基因型分布为CRF01-AE 18例(64.29%),CRF07-BC 3例(10.71%),B亚型5例(17.86%)和B’(Thailand B)2例(7.14%),V3环顶端4肽以GPGQ为主14例(50.00%),GPGR 5例(17.86%),GWGR 3例(10.71%)。27例被预测为使用CCR5作为辅助受体,1例不可预测使用何种受体,没有被预测为使用CXCR4作为辅助受体的感染者。结论哈尔滨市MSM感染HIV-1以CRF01-AE为主,V3环顶端的4肽呈现多态性但以GPGQ为主。HIV-1主要为以CCR5作为辅助受体的巨细胞嗜性毒株。 展开更多
关键词 男男同性恋 env基因 V3环
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牛泡沫病毒内部启动子的克隆及功能分析 被引量：4
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作者 张莉 王世珍 +3 位作者 刘佳建 刘淑红 陈启民 耿运琪 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期227-231,共5页
以该实验室分离并鉴定的牛泡沫病毒 (BFV)中国毒株 (BFV3 0 2 6)为材料 ,用PCR方法首次克隆了位于 env 基因 3′端的内部启动子 ,经序列分析后 ,引入luc基因作瞬时表达分析。结果表明 ,该内部启动子不但基础活性高于LTR ,而且转录活性在... 以该实验室分离并鉴定的牛泡沫病毒 (BFV)中国毒株 (BFV3 0 2 6)为材料 ,用PCR方法首次克隆了位于 env 基因 3′端的内部启动子 ,经序列分析后 ,引入luc基因作瞬时表达分析。结果表明 ,该内部启动子不但基础活性高于LTR ,而且转录活性在Tas参与下被大大激活 ,其激活活性也远远高于LTR。同源分析表明 ,非灵长类泡沫病毒内部启动子之间的同源性高于其与灵长类泡沫病毒内部启动子之间的同源性。 展开更多
关键词 牛泡沫病毒 env基因 内部启动子 LTR
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