澳洲野生稻(Oryza australiensis)内生固氮菌的分子鉴定及发育分析 被引量：22

1

作者 原红娟 严慧 +2 位作者 杨芳 彭桂香 谭志远 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期571-577,共7页

采用两种无氮培养基经平板划线法共分离筛选到澳洲野生稻(Oryza australiensis)45株内生固氮菌.利用全细胞蛋白电泳和插入序列指纹图谱对获得的内生固氮菌进行聚类分析,将其分为8个类群.其中类群Ⅰ有10株菌,类群Ⅱ为4株菌,类群Ⅲ、Ⅳ和... 采用两种无氮培养基经平板划线法共分离筛选到澳洲野生稻(Oryza australiensis)45株内生固氮菌.利用全细胞蛋白电泳和插入序列指纹图谱对获得的内生固氮菌进行聚类分析,将其分为8个类群.其中类群Ⅰ有10株菌,类群Ⅱ为4株菌,类群Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ均为3株菌,类群Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ各有2株菌.对分离得到的内生固氮菌主要类群部分代表菌株的固氮活性进行了系统研究,结果表明,菌株在偏酸(pH值5.0)和偏碱(pH值9.0)的条件下均能保持较高的固氮酶活性,NaCl浓度在2%时达到最高固氮活性,NH4+浓度达到7.5 mmol/L时,均无固氮酶活性,不同菌株所能利用的碳源不同.16S rDNA序列测定及系统发育分析显示:类群ⅠYH39与Burkholderia cepacia ATCC 25416T相似性为97%;类群Ⅱ为克雷白氏杆菌属(Klebsiella),相似性为100%;类群Ⅲ为泛菌属(Pantoea),相似性为99%;类群Ⅴ为草螺菌属(Herbaspirillum),相似性为99%;类群Ⅶ为中华根瘤菌属(Sinorhizobium),相似性为99%.本研究表明澳洲野生稻内生固氮菌资源具有遗传多样性. 展开更多

关键词 澳洲野生稻 遗传多样性 内生固氮菌 DNA指纹图谱 系统发育分析

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具有拮抗作用的水稻内生固氮菌的分离与鉴定 被引量：15

2

作者 高玲玲 陈小龙 +2 位作者 蒋涛 姜伟娜 黄琼 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期553-557,共5页

从采自云南禄丰县水稻品种楚粳27的根、茎、叶中分离内生固氮菌,并测定其抑菌作用。用YMA无氮培养基分离获得125株具有潜在固氮作用的内生细菌,对125株内生细菌进行固氮酶基因nifH PCR检测,共有15株内生细菌扩增出固氮酶基因nifH片段,... 从采自云南禄丰县水稻品种楚粳27的根、茎、叶中分离内生固氮菌,并测定其抑菌作用。用YMA无氮培养基分离获得125株具有潜在固氮作用的内生细菌,对125株内生细菌进行固氮酶基因nifH PCR检测,共有15株内生细菌扩增出固氮酶基因nifH片段,确定其为内生固氮菌。水稻各部位的内生细菌菌群密度不同,依次为:根>叶>茎。通过对水稻白叶枯病、条斑病、稻瘟病、纹枯病和恶苗病等5种主要病害的抑菌试验,筛选出对5种病原菌都有抑制作用的内生细菌11株;其中同时具有固氮和抑菌作用的有3个菌株,分别为NR-18、NR-64和NR-79。经16SrDNA序列测定表明,NR-18和NR-79为多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa),NR-64为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),均来自水稻根部。 展开更多

关键词 水稻 内生固氮菌 拮抗作用 多粘类芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌

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一株高效甘蔗内生固氮菌NN08200的鉴定及其对甘蔗的促生长作用 被引量：12

3

作者 史国英 曾泉 +4 位作者 农泽梅 叶雪莲 岑贞陆 李杨瑞 胡春锦 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1336-1345,共10页

【背景】生产上过高的氮肥投入是我国农业可持续发展的重要限制因子之一。利用生物固氮是减少氮肥施用量最为有效的途径,植物内生固氮菌资源的挖掘和利用对我国农业可持续发展具有重要实践意义。【目的】筛选高效甘蔗内生固氮菌,并对其... 【背景】生产上过高的氮肥投入是我国农业可持续发展的重要限制因子之一。利用生物固氮是减少氮肥施用量最为有效的途径,植物内生固氮菌资源的挖掘和利用对我国农业可持续发展具有重要实践意义。【目的】筛选高效甘蔗内生固氮菌,并对其联合固氮效率及促生长功能进行评价。【方法】从广西甘蔗茎基部组织分离筛选到一株内生固氮菌株NN08200,利用乙炔还原法测定固氮酶活性,通过菌落PCR扩增nif H基因确定菌株为固氮菌;通过菌株培养性状和菌体形态观察、Biolog细菌鉴定系统和16SrRNA基因序列分析确定该菌株的分类;采用盆栽接种测定菌株对甘蔗的实际促生长作用,并利用15N同位素稀释法测定其相对固氮效率。【结果】菌株NN08200的固氮酶活性达到2445nmolC2H4/(h·m L),菌株的nif H基因长度为339bp,与甘蔗内生固氮醋酸杆菌Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5菌株的nif H相似性达99%;根据菌株培养性状和菌体形态观察、Biolog细菌鉴定系统和16SrRNA基因序列分析结果,菌株NN08200属于泛菌属(Pantoeasp.)细菌;盆栽接种菌株NN08200能显著提高甘蔗幼苗的株高和干重,15N同位素分析结果表明接种该菌株甘蔗植株的根、茎和叶从空气中获得氮素的百分率分别为7.49%、15.02%和10.79%,其联合固氮效率显著优于甘蔗内生固氮模式菌株G. diazotrophicus PAL5,利用后者接种的甘蔗根、茎和叶从空气中获得氮的百分率分别为3.53%、9.44%和4.87%。【结论】菌株Pantoea sp. NN08200是高效甘蔗内生固氮菌,其固氮促生长效果明显高于G. diazotrophicus PAL5菌株,可望研发成为优良固氮微生物肥料生产菌种,并可进一步用于甘蔗联合固氮菌作用机理的相关研究。 展开更多

关键词 甘蔗 内生固氮菌 促生长作用 菌种筛选

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植物内生固氮菌及其固氮机理研究进展 被引量：7

4

作者 王玉虎 赵明敏 郑红丽 《生物技术进展》 2022年第1期17-26,共10页

氮素是植物生长必不可少的元素,植物内生固氮菌不仅能够在植物体内产生氮素以供植物利用,而且在自然界氮素循环过程中发挥积极作用,对农业可持续发展具有重要意义。近年来,植物内生固氮菌逐渐成为研究热点。由植物内生固氮菌的发现、作... 氮素是植物生长必不可少的元素,植物内生固氮菌不仅能够在植物体内产生氮素以供植物利用,而且在自然界氮素循环过程中发挥积极作用,对农业可持续发展具有重要意义。近年来,植物内生固氮菌逐渐成为研究热点。由植物内生固氮菌的发现、作物共生、侵入途径、固氮机理、促生作用机制等方面系统地综述了植物内生固氮菌的研究进展,探讨了植物内生固氮菌新的研究思路以及一些尚未解决的问题,以期为植物内生固氮菌及生物固氮研究提供参考。 展开更多

关键词 内生固氮菌 固氮酶 固氮机理 生物固氮

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一株旱稻联合固氮菌株的分离鉴定及促生作用

5

作者 胡应平 林冬梅 +4 位作者 胡弘正 吴颖 林佳丽 林占熺 刘斌 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期780-788,共9页

[目的]旱稻是一种重要的种质资源,对成熟期旱稻根系内生固氮菌进行筛选与鉴定,以获得对旱稻有较好促生作用的菌株。[方法]采用联合固氮固体培养基培养方法,从成熟期旱稻根系中分离出内生固氮菌,通过扩增固氮酶nifH基因和16S rRNA基因进... [目的]旱稻是一种重要的种质资源,对成熟期旱稻根系内生固氮菌进行筛选与鉴定,以获得对旱稻有较好促生作用的菌株。[方法]采用联合固氮固体培养基培养方法,从成熟期旱稻根系中分离出内生固氮菌,通过扩增固氮酶nifH基因和16S rRNA基因进行分子鉴定和系统进化分析生化指标测定和形态学鉴定;采用透明圈法进行溶磷、产铁载体能力验证;以褐球固氮菌为阳性对照,利用ELISA测定试剂盒测定菌株分泌固氮酶活性、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶,采用Salkowski比色法测定生长素(IAA)含量,并研究其生长特征。将分离的固氮菌株以1%浓度(约8×10~7CFU/mL)浸泡旱稻谷种进行催芽,研究其促生效果。[结果]分离的菌株URR45为固氮菌,属于嗜温型微生物,最适生长温度为32~50℃,最适pH为6.0~6.5,不耐盐。其分泌的固氮酶含量为220.15 U/L,ACC含量为898.69 ng/mL,生长素含量为14.91 mg/L,固氮酶含量和ACC含量显著高于对照组褐球固氮菌。该菌株能够利用葡萄糖、麦芽糖等碳源,属于发酵型细菌,具有水解明胶、溶磷和产铁载体特性。该菌株经16S rRNA基因测序后通过NCBI BLAST比对,鉴定为Herbaspirillum seropedicae,隶属于Pseudomonadota门、Betaproteobacteria纲、Burkholderiale目、Oxalobacteraceae科、Herbaspirillum属,革兰氏染色呈阴性。促生试验结果表明,在主根长度、侧根长度以及测根数方面均显著高于对照组。[结论]该菌株对旱稻幼苗具有一定的促生作用,在农业上产上可作为功能性内生固氮菌开发利用。 展开更多

关键词 旱稻 联合固氮菌 菌株鉴定 固氮能力 促生作用

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禾草内生固氮菌的研究现状及应用前景 被引量：6

6

作者 孙苗苗 刁治民 王恒生 《青海草业》 2013年第1期35-41,共7页

植物内生固氮菌是一类重要的固氮微生物资源,其潜在的可开发利用价值越来越受重视。本文综述了禾草内生固氮菌的研究动态、种质资源多样性、侵染途径、定殖方式、作用机理及发展前景,以期为内生固氮菌的进一步开发探究提供参考。

关键词 禾本科牧草 内生固氮菌 生物学作用

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患根结线虫病番茄根内生固氮菌的筛选、鉴定和系统发育分析 被引量：5

7

作者 金玲月 路晶晶 +6 位作者 冯燕辉 张沁怡 吴寒 李容丹 黄薇 蓝灿华 田宝玉 《福建农业科技》 2020年第12期46-51,共6页

植物内生固氮菌能通过自身的固氮作用,把空气中的氮气转化为植物可利用的氨态氮,促进植物生长以及提高作物产量。以患根结线虫病的番茄根组织为材料,采用梯度稀释和划线法分离纯化番茄根内生菌,通过无氮固体培养基连续培养筛选固氮菌,... 植物内生固氮菌能通过自身的固氮作用,把空气中的氮气转化为植物可利用的氨态氮,促进植物生长以及提高作物产量。以患根结线虫病的番茄根组织为材料,采用梯度稀释和划线法分离纯化番茄根内生菌,通过无氮固体培养基连续培养筛选固氮菌,并扩增固氮细菌的16S rRNA基因序列进行鉴定和系统发育分析,初步了解患根结线虫病的番茄根内菌的种类和分布。结果表明,在挑选和分离纯化得到的33株番茄根内生菌中,经过在无氮培养基平板上连续的传代培养,最终得到3株具有稳定固氮能力的内生菌株。分子鉴定和序列分析表明筛选出的内生固氮菌菌株中包括8株芽孢杆菌、1株黄单胞菌和1株根瘤菌。与先前发表的番茄根内生菌优势OTU的聚类分析结果表明,根瘤菌是患根结线虫病番茄根中优势的内生固氮菌种群。 展开更多

关键词 根结线虫 番茄根 内生固氮菌 筛选 分子鉴定

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巨菌草一株内生固氮菌的分子鉴定及生物学特性 被引量：5

8

作者 叶文雨 谢序泽 +5 位作者 杨林青 邱学鸿 牛晓庆 胡红莉 余文英 鲁国东 《热带农业科学》 2018年第12期69-74,共6页

菌草(JUNCAO)是可作为栽培食用菌、药用菌的草本植物。内生固氮菌具有生物固氮的功能,可以促进植物生长,提高植物对病原菌的拮抗作用。采用无氮培养基、乙炔还原法等方法从巨菌草根中分离纯化到1株具有较强固氮酶活性的菌株,固氮酶活性... 菌草(JUNCAO)是可作为栽培食用菌、药用菌的草本植物。内生固氮菌具有生物固氮的功能,可以促进植物生长,提高植物对病原菌的拮抗作用。采用无氮培养基、乙炔还原法等方法从巨菌草根中分离纯化到1株具有较强固氮酶活性的菌株,固氮酶活性值为270.20 nmolC2H4/(mL·h)。通过16S rDNA序列分析,进一步确定该菌株属于变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)。内生固氮菌株fjg102对稻瘟病菌Guy11和Ku70的抑菌率分别为40.25%和44.30%,具有一定的抑制病原菌的作用。菌株fjg102革兰氏染色阳性,具有溶磷作用、触酶反应为阳性、明胶液化为阳性等生理生化特性。盆栽试验结果表明,接种fjg102菌株后对大麦有明显的促生作用。其中叶长增加37.26%,根长增长9.40%,根重增加66.16%,鲜重增加96.40%,干重增加80%。可见,该内生固氮菌株具有生物固氮和促生的效果,可进一步研究开发成为微生物肥料生产菌种。 展开更多

关键词 菌草 内生固氮菌 理化性质 促生

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甘薯块根内生固氮菌的分离鉴定和系统发育分析

9

作者 王崇 雷剑 +6 位作者 靳晓杰 柴沙沙 邹语嫣 孙小琼 焦春海 杨新笋 王连军 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1397-1404,共8页

【目的】对甘薯块根内生固氮菌进行分子鉴定和多样性分析,并分析其菌群结构,为深入研究甘薯内生固氮菌的应用提供理论参考。【方法】以鄂薯11和鄂薯17为试验材料,采用无氮培养基筛选获得2个甘薯品种块根的内生固氮菌,根据16S rDNA基因... 【目的】对甘薯块根内生固氮菌进行分子鉴定和多样性分析,并分析其菌群结构,为深入研究甘薯内生固氮菌的应用提供理论参考。【方法】以鄂薯11和鄂薯17为试验材料,采用无氮培养基筛选获得2个甘薯品种块根的内生固氮菌,根据16S rDNA基因序列分析对分离的内生固氮菌进行分类鉴定;进一步扩增nifH基因片段验证固氮菌;依据Shannon多样性指数、菌株相对分离率和相似性指数对甘薯块根内生固氮菌的菌群分布及多样性进行分析,并比较内生固氮菌菌群差异。【结果】从鄂薯11和鄂薯17块根中总共分离得到80株内生固氮菌,归属为1门1纲1目1科2属,包括普里斯特氏菌属(Priestia)和芽孢杆菌属(Bacillus),相对分离率分别为51.25%和48.75%;普里斯特氏菌属在鄂薯11和鄂薯17块根的相对分离率分别为51.11%和51.43%,芽孢杆菌属在鄂薯11和鄂薯17块根的相对分离率分别为48.89%和48.57%,2个甘薯品种块根中内生固氮菌的相对分离率变化差异小。2个甘薯品种块根内生固氮菌总Shannon指数为0.6929,总均匀度指数为0.4803。鄂薯11和鄂薯17间的相似性指数为1,2个甘薯品种块根中的内生固氮菌属相同。系统发育进化树显示,从鄂薯11和鄂薯17中分离得到的内生固氮菌遗传多样性较低。【结论】从鄂薯11和鄂薯17块根中分离鉴定出80株内生固氮菌,归属于普里斯特氏菌属和芽孢杆菌属,2个品种间的内生固氮菌菌群构成无明显差异。 展开更多

关键词 甘薯 NIFH基因 内生固氮菌 多样性 分离鉴定 系统发育

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一株高效甘蔗内生固氮细菌GXS16的鉴定及其对甘蔗的促生长作用 被引量：4

10

作者 农倩 林丽 +3 位作者 谢金兰 莫璋红 黄杏 李长宁 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期4710-4718,共9页

【背景】我国甘蔗生产中氮肥过量施用严重,导致生产成本居高不下,充分发挥甘蔗与内生固氮菌的联合固氮作用,减少氮肥施用量,对促进我国甘蔗产业可持续发展具有重要意义。【目的】筛选优势甘蔗内生固氮菌,对其基本特性、联合固氮效率及... 【背景】我国甘蔗生产中氮肥过量施用严重,导致生产成本居高不下,充分发挥甘蔗与内生固氮菌的联合固氮作用,减少氮肥施用量,对促进我国甘蔗产业可持续发展具有重要意义。【目的】筛选优势甘蔗内生固氮菌,对其基本特性、联合固氮效率及促生长功能进行评价。【方法】从甘蔗根系分离到一株内生固氮菌GXS16,利用乙炔还原法测定固氮酶活性,通过PCR扩增nifH基因确定菌株为固氮菌;通过形态观察、Biolog检测和16S rRNA基因序列分析等对菌株进行分类;通过接种盆栽甘蔗检测菌株的促生长作用,采用^(15)N同位素稀释法检测菌株相对固氮效率。【结果】菌株GXS16固氮酶活性为2.42μmol-C_(2)H_(4)/(h·mL),根据菌株培养性状和菌体形态观察、Biolog检测、16S rRNA、nifH、acdS基因序列分析结果,菌株GXS16属于伯克氏菌属(Burkholderia);菌株GXS16还具有1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶(1-Aminocyclopropane-1-Carboxylate Deaminase,ACC)活性及合成生长素吲哚乙酸(Indole-3-AceticAcid,IAA)、降解无机磷的功能;接种GXS16处理甘蔗植株的株高比对照增长15%以上,干重增长20%以上,^(15)N同位素测定显示甘蔗根、茎、叶从空气中获得氮的百分比分别为7.69%、15.64%和8.72%,效率显著优于模式菌株Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5。【结论】Burkholderia sp.GXS16是一株高效甘蔗内生固氮菌,具有良好应用前景。 展开更多

关键词 甘蔗 内生固氮菌 特性鉴定 促生长作用

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欧李(Cerasus humilis)内生固氮细菌筛选、鉴定及特性研究 被引量：3

11

作者 白洁 姚拓 +3 位作者 雷杨 王占军 王辛有 苑力晖 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期859-866,共8页

为探究荒漠草原灌木欧李(Cerasus humilis)根系内生细菌固氮能力和其它特性。采用无氮培养基,从欧李根内分离获得20株内生固氮菌,并结合乙炔还原法测定固氮酶活性,钼锑抗比色法测定溶磷特性,Salkowski法测定分泌植物生长素(Indole aceti... 为探究荒漠草原灌木欧李(Cerasus humilis)根系内生细菌固氮能力和其它特性。采用无氮培养基,从欧李根内分离获得20株内生固氮菌,并结合乙炔还原法测定固氮酶活性,钼锑抗比色法测定溶磷特性,Salkowski法测定分泌植物生长素(Indole acetic acid,IAA)能力,对筛选出固氮酶活性较高的菌株进行16S rDNA序列比对,确定其分类地位。结果表明,分离的内生固氮细菌均具溶磷和分泌IAA能力。所分离菌株固氮酶活性在31.45~424.81 nmol C_(2)H_(4)·h^(-1)·mL^(-1)之间(NS 25最高),解有机磷量在26.62~99.18μg·mL^(-1)之间(YNS 4最高),溶无机磷量在1.10~20.31μg·mL^(-1)之间(WNS 21最高),分泌IAA量在3.86~47.00μg·mL^(-1)之间(NS 22最高)。10株固氮酶活性较高菌株经初步鉴定NS114-1和NS114-2为Bacillus pumilus,NS 25和NS 26为Bacillus paralicheniformis,YNS 1为Brevibacterium frigoritolerans,菌株WNS 21和NNS 15为Bacillus velezensis,NS 8为Paenibacillus catalpae,YNS 6为Cytobacillus firmus,NNS 19为Bacillus sp.。研究分离的内生固氮细菌具有溶磷和分泌IAA的能力,有望通过后续研制微生物菌剂为干旱地区植被恢复与生态重建发挥积极作用。 展开更多

关键词 欧李 内生固氮菌 溶磷 IAA

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苹果砧木M9T337不同部位内生固氮菌群分析 被引量：1

12

作者 张宏雁 张俊忠 +2 位作者 张东华 闫向楠 刘丽 《山东农业科学》 北大核心 2022年第2期78-85,共8页

为了解苹果植株不同部位内生固氮菌的群落结构差异,本研究以苹果营养系砧木M9T337为材料,基于NifH基因采用Illumina Miseq测序技术,对苹果砧木M9T337根、枝、叶内生固氮菌的群落组成和多样性进行分析。结果表明,苹果砧木M9T337各组织部... 为了解苹果植株不同部位内生固氮菌的群落结构差异,本研究以苹果营养系砧木M9T337为材料,基于NifH基因采用Illumina Miseq测序技术,对苹果砧木M9T337根、枝、叶内生固氮菌的群落组成和多样性进行分析。结果表明,苹果砧木M9T337各组织部位均有丰富的内生固氮菌,不同部位内生固氮菌群的组成及丰度存在差异。苹果砧木3个部位内生固氮菌除丰富度指数外,Alpha多样性指数无显著性差异。Beta多样性分析结果表明根部与枝部内生固氮菌群落结构差异较大。在门水平上,变形菌门(Proteobacteria)是根、枝、叶部位的优势菌门。在属水平上,慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)是叶部和枝部的优势菌属,固氮螺菌属(Azospirillum)是根部的优势菌属。根部有2个特有属,枝部有2个特有属,叶部有4个特有属。此外,本研究首次发现广古菌门(Euryarchaeota)内生固氮古菌为叶部所特有。 展开更多

关键词 苹果砧木M9T337 NIFH基因 Illumina Miseq测序 群落结构 内生固氮菌

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不同产区青稞根部可培养内生固氮菌的多样性研究 被引量：2

13

作者 刘振东 岳筱 +2 位作者 王波 薛蓓 王强锋 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期565-569,共5页

为认识青稞内生固氮菌群落组成,丰富内生固氮菌资源,明确产地对青稞内生固氮菌多样性的影响,本研究利用纯培养技术分别对在拉萨、林芝、日喀则栽培的藏青2000根部内生固氮菌进行分离、纯化,并测定各菌株的固氮酶活性及高固氮酶活性菌株... 为认识青稞内生固氮菌群落组成,丰富内生固氮菌资源,明确产地对青稞内生固氮菌多样性的影响,本研究利用纯培养技术分别对在拉萨、林芝、日喀则栽培的藏青2000根部内生固氮菌进行分离、纯化,并测定各菌株的固氮酶活性及高固氮酶活性菌株的溶磷、溶钾及产IAA特性,最后,通过16SrDNA基因测序和构建系统发育树研究了高固氮酶活性菌株的分类学地位。结果显示,通过Ashby培养基分离、纯化得到内生固氮菌37株,其中,具有高固氮酶活性的11株,占总分离菌株27%,有6株菌株具有分泌IAA的能力,2株具有溶钾能力,1株具有溶磷能力。16S rDNA测序结果表明,11株高固氮酶活性的菌中,有5株菌属于Bacillus,为优势菌属,其余菌株分别属于Gemmatimonas、Sphingomonas、Devosia、Agrobacterium、Mesorhizobium和Burkholderia。 展开更多

关键词 青稞 根 内生固氮菌 多样性

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不同培养条件对内生菌A02、A08固氮酶活力的影响及培养条件优化 被引量：2

14

作者 任杰 张晓 +4 位作者 梁琼月 董蒙蒙 李立 肖未 何冰 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第11期2571-2578,共8页

【目的】解析不同培养条件对菌株A02,A08固氮酶活力的影响,以期找到菌株的培养条件最优组合,为木薯固氮菌的培养及应用提供理论依据和技术支撑。【方法】采用单因素浓度梯度法研究5个培养条件(pH、温度、KNO3、NH4Cl、O2)对2个菌株固氮... 【目的】解析不同培养条件对菌株A02,A08固氮酶活力的影响,以期找到菌株的培养条件最优组合,为木薯固氮菌的培养及应用提供理论依据和技术支撑。【方法】采用单因素浓度梯度法研究5个培养条件(pH、温度、KNO3、NH4Cl、O2)对2个菌株固氮酶活性的影响;利用正交实验确定2个菌株的培养条件优化体系。【结果】2个菌株的固氮酶活性随着pH、温度和KNO3浓度的增加呈现出先升后降的规律;菌株A02和A08固氮酶活性随着NH4Cl和O2浓度升高呈现出线性下降趋势,其中A02对NH4Cl浓度增加更敏感,而A08对O2浓度升高更敏感。通过正交试验优化菌株A02的最适培养条件组合是pH 7.5,温度25℃,KNO38 g/L,O2浓度21%,此时A02固氮酶活力达935 nmol/(mL·h),各条件的影响效应为温度>O2>pH值>NH4Cl>KNO3;菌株A08的最佳培养条件组合是pH 7.5,温度25℃,KNO36 g/L,NH4Cl 8 g/L,此时固氮酶活力为768 nmol/(mL·h),各培养条件的影响效应为温度>KNO3>pH值>O2>NH4Cl。【结论】通过正交试验获得木薯内生固氮菌A02和A08的最适培养体系,在最适条件下2个菌株的固氮酶活性得到显著提高,为2种菌株在木薯生产中的应用奠定基础。 展开更多

关键词 木薯 内生固氮菌 培养条件 优化体系

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芦竹属菌草内生固氮菌nifH基因的表达研究 被引量：1

15

作者 李曼 李巧琪 +3 位作者 廖真 林标声 鲁国东 林占熺 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第8期1776-1780,共5页

【目的】检测5种芦竹属菌草绿洲成熟期根样本内生固氮菌的丰度及nifH基因的表达,为nifH基因的快速定量检测及实时监测提供技术手段。【方法】采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)分析... 【目的】检测5种芦竹属菌草绿洲成熟期根样本内生固氮菌的丰度及nifH基因的表达,为nifH基因的快速定量检测及实时监测提供技术手段。【方法】采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)分析根样本内生固氮菌nifH基因的拷贝数及相对表达量。【结果】5种芦竹属菌草成熟期根样本内生固氮菌nifH基因表达量及拷贝数均有较大的差异。其中,绿洲2号nifH基因相对表达量最高,呈过表达水平,且绿洲2号样本差异达显著水平(P<0.05),其余各样本差异不显著;固氮基因nifH的拷贝数呈逐步递减,其中绿洲1号样本nifH基因的拷贝数最高,达8.84×10^(11)/g;绿洲5号最低,达1.54×10^(11)/g,各样本的差异均达到显著水平。【结论】基于实时荧光定量PCR对固氮基因nifH的定量及定性分析,可为nifH基因的定量检测及表达情况提供理论依据。 展开更多

关键词 芦竹属菌草 内生固氮菌 固氮基因 相对表达量 拷贝数

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氮对巨菌草内生固氮菌Klebsiella variicola GN02 nifH基因表达的影响

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作者 林标声 吕正阳 +2 位作者 罗茂春 何玉琴 林占熺 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2020年第1期103-108,共6页

采用DNA电泳、qRT-PCR及Western blot技术分析了在无氮和含氮培养条件下,巨菌草内生固氮菌Klebsiella variicola GN02菌株nifH基因序列长度、基因与蛋白表达量的差异.结果表明,GN02菌株在无氮及含氮条件下均有nifH基因表达,其克隆得到的... 采用DNA电泳、qRT-PCR及Western blot技术分析了在无氮和含氮培养条件下,巨菌草内生固氮菌Klebsiella variicola GN02菌株nifH基因序列长度、基因与蛋白表达量的差异.结果表明,GN02菌株在无氮及含氮条件下均有nifH基因表达,其克隆得到的nifH基因与同属禾本科的甘蔗的nifH基因亲缘关系较近;无氮培养条件下nifH基因和蛋白表达量明显高于含氮条件下的表达量.表明无氮条件能诱导GN02菌株nifH基因表达量的增加,而氮源抑制nifH基因的表达. 展开更多

关键词 氮 巨菌草 内生固氮菌 Klebsiella variicola NIFH基因 差异表达

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巨菌草内生固氮菌Klebsiella variicola GN02 nifH基因的克隆及生物信息学分析

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作者 林标声 张浣星 +2 位作者 何玉琴 罗茂春 林占熺 《湖北农业科学》 2020年第3期147-153,共7页

研究巨菌草(Pennisetum giganteum)内生固氮菌Klebsiella variicola GN02 nifH基因的生物学信息,对GN02菌株nifH基因进行克隆及完整性验证,并采用多种生物学在线软件对其进行生物信息学预测和分析。结果表明,GN02菌株nifH基因具有完整的... 研究巨菌草(Pennisetum giganteum)内生固氮菌Klebsiella variicola GN02 nifH基因的生物学信息,对GN02菌株nifH基因进行克隆及完整性验证,并采用多种生物学在线软件对其进行生物信息学预测和分析。结果表明,GN02菌株nifH基因具有完整的ORF,长度882 bp,编码293个氨基酸,NCBI GenBank登录号为MK131264。生物信息学分析表明,GN02菌株nifH基因具有高度保守性,与其他物种来源的nifH基因核苷酸序列及氨基酸序列同源性均达到95%以上。nifH蛋白总相对分子量为31 970.73、理论等电点pI为4.72;跨膜模型倾向N-末端向外的由内到外的跨膜、整个多肽链表现为亲水性;有2个糖基化位点但无分泌信号肽,有可能存在螺旋卷曲结构;二级结构预测表明α-螺旋和无规则卷曲是其多肽链中的主要结构元件,延伸链散布于整个蛋白质中;在数据库中能对该蛋白进行三维同源建模。 展开更多

关键词 巨菌草(Pennisetum giganteum) 内生固氮菌 KLEBSIELLA variicola NIFH基因 克隆 生物信息学

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接种内生固氮菌A01(Pantoea agglomeras)对甘蔗伸长期固氮生理特性的影响（英文） 被引量：2

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作者 韦莉萍 吴凯朝 +1 位作者 邢永秀 李杨瑞 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期18-23,共6页

【目的】探讨不同基因型甘蔗接种内生固氮菌A01的固氮生理特性表现,为内生固氮菌在甘蔗生产中的应用提供理论依据。【方法】将内生固氮菌株A01分别接种到6个不同基因型甘蔗品种（GT24、GT9、YC84/153、GT18、CP65/357和F172）中,在温室... 【目的】探讨不同基因型甘蔗接种内生固氮菌A01的固氮生理特性表现,为内生固氮菌在甘蔗生产中的应用提供理论依据。【方法】将内生固氮菌株A01分别接种到6个不同基因型甘蔗品种（GT24、GT9、YC84/153、GT18、CP65/357和F172）中,在温室无氮栽培条件下,于伸长期调查甘蔗固氮酶、硝酸还原酶活性及氮含量。【结果】接种固氮菌A01后,不同时期不同甘蔗品种的＋2叶、＋3节间和根系的固氮酶活性、硝酸还原酶活性和氮含量表现均有不同;GT24、F172、GT9和GT24等4个甘蔗品种的节间、叶片和根系固氮酶活性均明显上升,GT24、GT18和F172的＋2叶硝酸还原酶活性均明显增加,其中以GT18增加最明显,其次为F172;GT9、GT24、GT18、F172和CP65/357等5个品种的＋3节间、＋2叶和根的全氮含量分别比对照增加0.06%-0.20%、0.02%-0.22%和0.02%-0.15%（绝对值）。【结论】接种固氮菌A01对F172和GT18的固氮生理特性有显著影响,可能是F172和GT18的内部环境更适于该菌生长。 展开更多

关键词 甘蔗 基因型 内生固氮菌A01 固氮生理特性 伸长期

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