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绿豆环氧水解酶催化对硝基苯乙烯氧化物的对映归一性水解 被引量：9
1
作者 鞠鑫 潘江 许建和 《催化学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期696-700,共5页
利用绿豆环氧水解酶催化(R,S)-对硝基苯乙烯氧化物水解,产物(R)-对硝基苯乙二醇的产率超过常规酶促拆分的极限产率(50%),表明发生了对映体会聚.采用绿豆粉剂和粗酶制剂考察了不同条件下的生物催化反应,结果表明,添加吐温-80作为分散剂... 利用绿豆环氧水解酶催化(R,S)-对硝基苯乙烯氧化物水解,产物(R)-对硝基苯乙二醇的产率超过常规酶促拆分的极限产率(50%),表明发生了对映体会聚.采用绿豆粉剂和粗酶制剂考察了不同条件下的生物催化反应,结果表明,添加吐温-80作为分散剂对反应有促进作用.对该酶的固定化进行了初步研究,发现酶经硅藻土吸附固定化后稳定性显著增加.在克级规模制备实验中,产物的总产率达73.3%;产物经一步重结晶,得到了光学纯度大于99%的(R)-对硝基苯乙二醇. 展开更多
关键词 绿豆 环氧水解酶 对硝基苯乙烯氧化物 对映归一性水解 (R)-对硝基苯乙二醇
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环氧化物水解酶PvEH3的表达及手性邻二醇的合成 被引量：5
2
作者 王瑞 许耀辉 +1 位作者 王克伟 邬敏辰 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1933-1939,共7页
基于环氧化物水解酶(EHs)一级结构的计算机辅助分析,以菜豆(Phaseolus vulgaris)总RNA为模板,采用逆转录PCR和巢式PCR技术扩增了一种新型环氧化物水解酶(PvEH3)的编码基因pveh3。借助表达载体pET-28a(+)将pveh3导入大肠杆菌BL21(DE3)中... 基于环氧化物水解酶(EHs)一级结构的计算机辅助分析,以菜豆(Phaseolus vulgaris)总RNA为模板,采用逆转录PCR和巢式PCR技术扩增了一种新型环氧化物水解酶(PvEH3)的编码基因pveh3。借助表达载体pET-28a(+)将pveh3导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行了异源表达。一级和三级结构表明,PvEH3属于α/β水解酶超家族,其催化三联体为Asp^(101)-His^(297)-Asp^(262),两个保守质子供体为Tyr^(150)和Tyr^(232)。在20℃、pH7.0的反应条件下,PvEH3能催化环氧苯乙烷及其4种衍生物的对映会聚水解。实验结果表明,PvEH3对环氧苯乙烷及其对位取代环氧底物(93.2%、86.6%和85.1%ee_p)的对映会聚性优于其间位取代环氧底物(37.1%和53.3%ee_p);PvEH3针对5种环氧底物中的环氧苯乙烷具有最高的区域选择性,区域选择性系数α_S和β_R分别为93.9%和99.0%。PvEH3的发现增加了区域选择性高且互补的EHs数目,为单酶催化环氧化物的对映会聚水解提供了更多的选择余地。 展开更多
关键词 环氧化物水解酶 生物催化 表达 区域选择性 对映会聚水解
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绿豆环氧化物水解酶基因的克隆、分析及表达 被引量：2
3
作者 姚瑶 胡蝶 +1 位作者 邬敏辰 叶慧华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期138-145,共8页
环氧化物水解酶可催化制备高光学纯度的环氧化物及邻二醇等高价值手性药物中间体。本研究采用RT-PCR和THSO-PCR扩增侧翼未知DNA序列技术从绿豆(Vigna radiata)中克隆了一种新型环氧化物水解酶Vr EH3的基因Vreh3,Vreh3编码区DNA序列长度... 环氧化物水解酶可催化制备高光学纯度的环氧化物及邻二醇等高价值手性药物中间体。本研究采用RT-PCR和THSO-PCR扩增侧翼未知DNA序列技术从绿豆(Vigna radiata)中克隆了一种新型环氧化物水解酶Vr EH3的基因Vreh3,Vreh3编码区DNA序列长度为1 178 bp,包含2个142 bp和79 bp的内含子,以及957 bp的开放阅读框,编码318个氨基酸。Vr EH3的理论相对分子质量和等电点分别为36.2×103和5.59;保守的催化三联体为Asp101-Asp262-His297。将Vreh3与表达载体p ET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组Vr EH3。该酶可对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷((R,S)-SO)产生(R)-苯基乙二醇,得率高达79.4%,对映体过量值(e.e.值)为94.7%。 展开更多
关键词 绿豆 环氧化物水解酶 基因克隆 对映归一性水解 (R)-苯基乙二醇
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菜豆环氧水解酶归一性水解间硝基环氧苯乙烷的研究
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作者 李闯 文正 +1 位作者 刘畅 邬敏辰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期73-80,共8页
旨在研究菜豆环氧水解酶PvEH2对映归一性水解外消旋(rac-)间硝基环氧苯乙烷(mNSO)的特性,为制备光学纯(R)-间硝基苯乙二醇(mNPED)提供优良的生物催化剂。构建表达有重组PvEH2的工程菌E.coli/pveh2。以rac-mNSO为底物,借助手性色谱法分析... 旨在研究菜豆环氧水解酶PvEH2对映归一性水解外消旋(rac-)间硝基环氧苯乙烷(mNSO)的特性,为制备光学纯(R)-间硝基苯乙二醇(mNPED)提供优良的生物催化剂。构建表达有重组PvEH2的工程菌E.coli/pveh2。以rac-mNSO为底物,借助手性色谱法分析E.coli/pveh2全细胞的EH活性和区域选择性。基于有机助溶剂种类和剂量对酶活性的影响,筛选并优化缓冲液/助溶剂反应体系。结果显示,在菜豆植株中,PvEH2基因的转录水平可能受体外环境诱导因素的影响。E.coli/pveh2的EH活性为15.4 U/g,水解反应的区域选择性系数αS和βR分别为90.3%和96.4%。在经过筛选优化的含有5%(V/V)丙三醇的磷酸干细胞盐缓冲液中,最高底物浓度为40 mmol/L,是原缓冲液体系的4倍。当反应至12 h时,所得(R)-mNPED的光学纯度eep及产率分别为84.9%和90.2%。E.coli/pveh2或PvEH2在水解rac-mNSO中表现出优秀的区域选择性,在制备光学纯(R)-mNPED中具有较好的应用潜力。 展开更多
关键词 环氧水解酶 对映归一性水解 间硝基环氧苯乙烷 间硝基苯乙二醇
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