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乙型肝炎病毒衣壳蛋白装配调节剂研究进展 被引量：3
1
作者 杨璐 吴硕 李玉环 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1481-1487,共7页
乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒属。HBV感染可引发急性和慢性肝炎,已成为全球性的健康问题。HBV衣壳装配调节剂可以对pgRNA衣壳化以及HBV DNA的合成等HBV复制的多个阶段发挥重要作用,因而成为乙肝药物研发的新热点。... 乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒属。HBV感染可引发急性和慢性肝炎,已成为全球性的健康问题。HBV衣壳装配调节剂可以对pgRNA衣壳化以及HBV DNA的合成等HBV复制的多个阶段发挥重要作用,因而成为乙肝药物研发的新热点。该文针对HBV衣壳蛋白装配调节剂研究进展进行综述。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 衣壳组装 抗乙肝药物 衣壳装配调节剂 衣壳错配 空衣壳
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细菌内同源重组法制备FMDV聚蛋白编码基因重组腺病毒 被引量：3
2
作者 张兴旺 王勤 +2 位作者 柳纪省 殷相平 李志勇 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期223-226,共4页
采用PCR方法从重组质粒pMD18_T/PP中扩增出FMDV的聚蛋白(PP)编码基因,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成重组穿梭质粒rpAd_CMV/PP;将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体通过在大肠杆菌内质粒间同源重组获得重组腺病毒质粒rpAd/PP。将腺... 采用PCR方法从重组质粒pMD18_T/PP中扩增出FMDV的聚蛋白(PP)编码基因,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成重组穿梭质粒rpAd_CMV/PP;将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体通过在大肠杆菌内质粒间同源重组获得重组腺病毒质粒rpAd/PP。将腺病毒载体线性化后用脂质体介导转染293细胞从而获得含有口蹄疫病毒PP编码基因的重组腺病毒。通过倒置显微镜观测,可见明显的细胞病变,利用荧光显微镜可观测到报告基因绿色荧光蛋白的表达,并在电镜下观察到FMDV的空衣壳。结果证明已成功获得了含有口蹄疫病毒PP编码基因的重组腺病毒rAd/PP,并成功表达组装FMDV空衣壳,为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 FMDV 聚蛋白 编码基因 同源重组 重组腺病毒 空衣壳
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塞内卡病毒A完整病毒和空衣壳的分离及抗体应答分析
3
作者 李梅 穆素雨 +4 位作者 董虎 李硕 潘颂佳 郭慧琛 孙世琪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4562-4570,共9页
塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)在复制过程中可形成完整病毒和空衣壳,它们的分离条件和抗体应答差异目前还是未知的。本研究利用盐酸胍形成SVA空衣壳,通过优化不同的密度梯度、介质、转速、时间条件进行超速离心,获得分离SVA完整病毒... 塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)在复制过程中可形成完整病毒和空衣壳,它们的分离条件和抗体应答差异目前还是未知的。本研究利用盐酸胍形成SVA空衣壳,通过优化不同的密度梯度、介质、转速、时间条件进行超速离心,获得分离SVA完整病毒和空衣壳的最佳条件,并按SVA完整病毒12.5μg·只-1,空衣壳12.5μg·只^(-1)肌肉注射免疫BALB/c小鼠,免疫后1~7周检测特异性抗体和中和抗体。结果显示,SVA的MOI=1时感染细胞2 h加入100 mmol·L^(-1)盐酸胍可以使SVA完整病毒全部形成空衣壳;在10%~50%氯化铯,36000 r·min^(-1),离心2.5 h是区分SVA完整病毒和空衣壳的最佳条件;而且SVA完整病毒与空衣壳诱导小鼠的特异性抗体和中和抗体水平无显著差异(P=ns)。本研究为塞内卡病毒A完整病毒和空衣壳的分离纯化、重组SVA病毒样颗粒疫苗的开发提供参考。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A 完整病毒 空衣壳 分离条件优化 免疫原性
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O型口蹄疫病毒缅甸98株衣壳蛋白的表达及抗原性分析 被引量：1
4
作者 胡高维 马凯凯 +4 位作者 齐兴财 常兴妮 殷相平 李志勇 张志东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1094-1099,共6页
口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构，具有与完整病毒相似的构象和免、疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株（O／MYA98／BY／2010株）为研究对象，利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒，间接免疫荧光试... 口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构，具有与完整病毒相似的构象和免、疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株（O／MYA98／BY／2010株）为研究对象，利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒，间接免疫荧光试验检测到Sf9昆虫细胞成功表达重组衣壳蛋白。对收集的蛋白分析发现，重组衣壳存在于未被裂解的前体蛋白和中间体蛋白中。双抗夹心ELISA检测到重组衣壳蛋白相比灭活病毒有较高的抗原结合效价。蔗糖密度梯度离心纯化空衣壳，空衣壳所在梯度表现出最强抗原性。研究结果证实了重组衣壳蛋白具有良好的抗原性，可为口蹄疫病毒空衣壳疫苗的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 缅甸98株 空衣壳 抗原性
原文传递
重组腺相关病毒9型空壳率阴离子交换高效液相色谱检测方法的建立及验证
5
作者 史新昌 王凤阳 +2 位作者 刘亚辉 周勇 刘宾 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第5期519-526,共8页
目的建立检测重组腺相关病毒9型(recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9)空壳率的阴离子交换高效液相色谱(anion-exchange high-performance liquid chromatography,AEX-HPLC)法,并进行验证。方法采用基于电荷差异的AEX-HPLC... 目的建立检测重组腺相关病毒9型(recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9)空壳率的阴离子交换高效液相色谱(anion-exchange high-performance liquid chromatography,AEX-HPLC)法,并进行验证。方法采用基于电荷差异的AEX-HPLC法,通过对流动相洗脱梯度、流动相pH、色谱柱柱温、流速、样品浓度、进样体积和荧光检测器检测波长进行优化,建立检测rAAV9空壳与实心病毒比例的方法,并对方法的专属性、线性、检测限、定量限、精密度和准确度进行验证,确认方法可行性。结果利用CIMac AAV full/empty-0.1 mL分析柱,以20 mmol/L 1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷(BIS-Tris propane,BTP)为流动相A,20 mmol/L BTP+1 mol/LNaCl为流动相B进行梯度洗脱,流动相pH均为9.0,柱温20℃,流速1 mL/min,样品浓度4×10^(12)vg/mL,进样体积10μL,激发波长为280 nm,发射波长为330 nm,可实现rAAV9空壳与实心病毒的基线分离及定量检测。方法验证结果表明,制剂缓冲液无干扰,专属性较好;rAAV9在(1.6~8)×10^(12)vg/mL范围内线性关系良好,r=0.993;检测限为5×10^(10)vg/mL,定量限为1×10^(11) vg/mL;重复性和中间精密度RSD分别为2.95%和2.10%;准确率均不低于80%。结论建立了一种高灵敏度且可快速检测rAAV9空壳与实心病毒比例的AEX-HPLC法,可用于基因治疗产品空壳率的分析及质量控制。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒 基因治疗 阴离子交换高效液相色谱法 空壳病毒 实心病毒 质量控制
原文传递
通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装FMDV空衣壳结构 被引量：1
6
作者 曹轶梅 卢曾军 +3 位作者 孙甲川 孙普 郭建宏 刘在新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期1069-1077,共9页
【目的】口蹄疫病毒(FMDV)对酸很敏感,当pH值低于7时,二十面体对称的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。而昆虫细胞培养基的正常pH值在6.3左右,很难应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装天然的FMDV空衣壳结构。本研究旨在通过耐酸性改造... 【目的】口蹄疫病毒(FMDV)对酸很敏感,当pH值低于7时,二十面体对称的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。而昆虫细胞培养基的正常pH值在6.3左右,很难应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装天然的FMDV空衣壳结构。本研究旨在通过耐酸性改造,应用杆状病毒表达载体在昆虫细胞中组装产生AsiaⅠ型FMDV空衣壳结构。【方法】应用定点突变技术改变VP3上的H140和H143为亮氨酸,以提高空衣壳对酸的耐受性。将改造和未改造的P12A基因和3C基因插入带双启动子的杆状病毒转移载体pFastBacTM Dual中,通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒,转染Sf9细胞,获得两株表达FMDV全衣壳蛋白的重组杆状病毒BacmP12A3C和BacP12A3C。重组杆状病毒经增殖后感染High FiveTM细胞,进行目的蛋白的表达。【结果】通过Western blotting检测表明目的基因均获得表达,且衣壳蛋白被3C蛋白酶成功地加工裂解。双抗体夹心ELISA和免疫荧光检测结果表明表达蛋白主要集中在细胞膜上,且具有很好的抗原性。通过电镜观察到P12A基因改造的重组杆状病毒在昆虫细胞内产生了直径为25～30nm的空衣壳结构,而P12A基因未改造的重组杆状病毒观察到很多直径小得多的结构。【结论】本研究首次用电子显微镜在昆虫细胞中观察到FMDV完整的空衣壳结构,为基因工程亚单位疫苗和新型诊断试剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 FMDV 耐酸性改造 昆虫细胞 组装 空衣壳结构
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