结核分枝杆菌eis基因及其编码蛋白的生物信息学分析 被引量：14

1

作者 张西燕 付玉荣 伊正君 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期140-145,151,共7页

目的获取结核分枝杆菌(H37Rv)的eis基因序列及其编码蛋白(Eis蛋白)的氨基酸序列,预测和分析该蛋白的结构和功能。方法从NCBI BenBank数据库获取eis基因及其编码蛋白序列,利用ORF Finger工具分析eis基因的开放阅读框;利用Expasy PortPara... 目的获取结核分枝杆菌(H37Rv)的eis基因序列及其编码蛋白(Eis蛋白)的氨基酸序列,预测和分析该蛋白的结构和功能。方法从NCBI BenBank数据库获取eis基因及其编码蛋白序列,利用ORF Finger工具分析eis基因的开放阅读框;利用Expasy PortParam、SignalP 4.0Server、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、BLAST、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI以及NetMHCIIpan 3.1Server等软件对Eis蛋白的生物学特性进行预测分析。结果结核分枝杆菌eis基因全长1 164bp,有7个开放阅读框,最长一个被通读,编码387个氨基酸。Eis蛋白分子式C1870H2958N550O542S11,等电点(pI)为6.46,属于不稳定、疏水性蛋白;无跨膜区,信号肽切割位点位于第21位氨基酸处;二级结构预测无规则卷曲占30.23%,含有一个保守结构域;建立同源三级模型,GMQE为0.98;预测该蛋白至少含有6个B细胞优势抗原表位和14个优势CTL表位。优势抗原表位数个。结论生物学信息学方法预测结核分枝杆菌的Eis蛋白具有优势T、B细胞抗原性表位,所含保守结构域与其功能密切相关。eis基因以及Eis蛋白与结核分枝杆菌抑制细胞自噬及其耐药机制密切相关,可作为抗结核治疗的切入点。 展开更多

关键词 eis基因 eis蛋白 结核分枝杆菌 巨噬细胞 生物信息学

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结核杆菌eis基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达 被引量：6

2

作者 何子纯 李升锦 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期20-24,共5页

目的:构建结核分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物活性。方法:采用PCR技术克隆结核分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMVe-is,经酶切和测序鉴定其正确性,用电穿孔法将重组质粒转化至耻... 目的:构建结核分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物活性。方法:采用PCR技术克隆结核分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMVe-is,经酶切和测序鉴定其正确性,用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blot检测eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达。结果:成功构建结核杆菌eis基因穿梭表达载体pMV-eis;生长曲线说明重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blot检测证实eis在耻垢分枝杆菌中可表达出相对分子量约42kDa的Eis蛋白。结论:成功构建了eis基因穿梭表达质粒pMV-eis,且该重组质粒在耻垢分枝杆菌中具有生物活性,为下一步研究表达产物Eis的功能奠定了一定基础。 展开更多

关键词 eis基因 pMV261 耻垢分枝杆菌

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结核分枝杆菌eis基因对鼠巨噬细胞Raw264.7自噬影响的研究 被引量：5

3

作者 易敏 李升锦 牟方红 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2014年第7期779-781,785,共4页

目的探讨结核分枝杆菌eis基因对巨噬细胞自噬的影响。方法将鼠巨噬细胞Raw264.7以自噬体荧光表达质粒GFP-LC3转染,将含eis基因的重组耻垢分枝杆菌MS-pmv261-eis与不含eis基因的耻垢分枝杆菌MS-pmv261分别感染宿主巨噬细胞,透射电镜下观... 目的探讨结核分枝杆菌eis基因对巨噬细胞自噬的影响。方法将鼠巨噬细胞Raw264.7以自噬体荧光表达质粒GFP-LC3转染,将含eis基因的重组耻垢分枝杆菌MS-pmv261-eis与不含eis基因的耻垢分枝杆菌MS-pmv261分别感染宿主巨噬细胞,透射电镜下观察自噬小体形成情况,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Western blot检测eis基因表达的蛋白及自噬蛋白LC3-II的表达水平。结果结核分枝杆菌eis基因可抑制感染宿主细胞自噬小体的形成,并显著抑制自噬荧光小点形成(P<0.05),显著降低了自噬蛋白LC3-II表达水平。结论结核分枝杆菌eis基因对Raw264.7细胞自噬有抑制作用。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 eis基因 巨噬细胞 细胞自噬

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流式细胞术检测胞内重组耻垢分枝杆菌的活力研究 被引量：4

4

作者 何子纯 李升锦 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第8期689-691,695,共4页

目的建立一种快速检测胞内分枝杆菌活力的方法。方法将一定量培养至对数生长期的含pMV-eis的重组耻垢分枝杆菌感染U937巨噬细胞,以含空质粒的耻垢分枝杆菌为对照,吞噬作用2 h后洗去胞外细菌,再分别培养4、12、24和48 h后收集细胞并裂解... 目的建立一种快速检测胞内分枝杆菌活力的方法。方法将一定量培养至对数生长期的含pMV-eis的重组耻垢分枝杆菌感染U937巨噬细胞,以含空质粒的耻垢分枝杆菌为对照,吞噬作用2 h后洗去胞外细菌,再分别培养4、12、24和48 h后收集细胞并裂解之。获得的胞内细菌用FDA荧光染料染色后用流式细胞仪检测死亡率,并与平板菌落计数法进行比较。结果流式细胞仪检测出感染12 h后重组耻垢分枝杆菌胞内死亡率较对照组均有显著下降(P<0.05),流式细胞仪检测法与平板菌落计数法相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术与传统的平板计数法相比具有快速、敏感、方便的特点,可用于分枝杆菌活菌快速检测。 展开更多

关键词 重组耻垢分枝杆菌 eis基因 流式细胞仪 平板菌落计数法 乙酰乙酸荧光素

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结核分枝杆菌eis基因突变与氨基糖苷耐药的研究 被引量：2

5

作者 黄芳 刘家云 +2 位作者 马越云 苏明权 郝晓柯 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第7期1213-1215,共3页

目的:探讨结核分枝杆菌eis基因突变与氨基糖苷耐药之间的相互关系。方法:以本室保存的35株已确定耐一线药物(异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素)的结核分支杆菌为研究对象,应用BECTEC960测定其二线药物(阿米卡星、卡那霉素)的耐药情况,... 目的:探讨结核分枝杆菌eis基因突变与氨基糖苷耐药之间的相互关系。方法:以本室保存的35株已确定耐一线药物(异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素)的结核分支杆菌为研究对象,应用BECTEC960测定其二线药物(阿米卡星、卡那霉素)的耐药情况,同时应用基因测序的方法测定结核分枝杆菌eis基因突变情况,分析eis基因突变与氨基糖苷耐药之间的相互关系。结果:氨基糖苷耐药的部分结核分杆杆菌中,eis基因487位碱基出现突变,相应的163位氨基酸密码子由CGT突变为CAT,即由缬氨酸变为异亮氨酸。结论:eis基因V163I突变(缬氨酸变为异亮氨酸)可能与结核分枝杆菌耐氨基糖苷类药物有关。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 耐药 氨基糖苷类药物 基因突变 eis基因

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小毛莨内酯对重组耻垢分枝杆菌eis基因表达的影响 被引量：3

6

作者 王开金 易敏 李升锦 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期14-16,共3页

目的研究小毛莨内酯(Ternatolide,Tern)对重组耻垢分枝杆菌生长增殖及其eis基因表达的影响。方法将5×105MS-eis-PMV261接种于LB培养基培养并加入200 mg/L的Tern作为实验组,MS-eis-PMV261单独培养作为对照,不同时间点测量取菌液波长... 目的研究小毛莨内酯(Ternatolide,Tern)对重组耻垢分枝杆菌生长增殖及其eis基因表达的影响。方法将5×105MS-eis-PMV261接种于LB培养基培养并加入200 mg/L的Tern作为实验组,MS-eis-PMV261单独培养作为对照,不同时间点测量取菌液波长为600 nm的A值,根据所测A值绘制增殖曲线;提取菌液DNA以RT-PCR方法检测Tern对eis基因表达的影响;免疫印迹法SDS-PAGE及Western Blot检测Tern对EIS蛋白表达的影响。结果 Tern对两组重组耻垢分枝杆菌增殖差异无统计学意义(P>0.05);Tern可抑制eis基因的表达(P<0.05);SDS-PAGE及Western Blot检测发现Tern可显著降低EIS蛋白的表达(P<0.05)。结论 Tern对重组耻垢分枝杆菌的增殖无影响,但可抑制结核分枝杆菌eis基因及其表达的蛋白。该结果对研究持留性结核分枝杆菌的药物治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 耻垢分枝杆菌 eis基因 小毛莨内酯 持留性

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结核分枝杆菌eis基因表达对人THP-1细胞细胞因子分泌的影响 被引量：3

7

作者 朱坤生 易敏 +1 位作者 周向东 李升锦 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期697-700,共4页

目的研究结核分枝杆菌eis基因表达对人单核巨噬细胞Thp-1细胞的影响,筛选出差异性表达细胞因子,探讨结核分枝杆菌eis基因在单核巨噬细胞致持留的免疫机制。方法 eis基因重组耻垢分枝杆菌MS-pmv261-eis及对照组细菌MSpmv261感染经PMA诱... 目的研究结核分枝杆菌eis基因表达对人单核巨噬细胞Thp-1细胞的影响,筛选出差异性表达细胞因子,探讨结核分枝杆菌eis基因在单核巨噬细胞致持留的免疫机制。方法 eis基因重组耻垢分枝杆菌MS-pmv261-eis及对照组细菌MSpmv261感染经PMA诱导分化的人单核巨噬细胞Thp-1细胞;细胞信号传导通路抑制剂用于分析作用机制;ELISA方法检测细胞上清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、INF-γ表达水平;筛选差异性表达的细胞因子,RT-PCR进一步确定该细胞因子的基因表达。结果结核分枝杆菌eis基因可引起IL-10表达增加(P<0.05),而对细胞因子IL-4、IL-6、IL-12、INF-γ的表达无显著影响(P>0.05),RT-PCR结果也进一步确证了IL-10基因的高表达。2-AP和U0126能明显抑制MS-pmv261-eis(MS-eis)感染引起的IL-10的释放(P<0.05)。结论结核分枝杆菌eis基因可上调Thp-1细胞IL-10在蛋白水平和基因水平的表达,可能通过MEK1/2或PKR信号通路刺激IL-10的释放来增强机体的免疫功能,其作用可能与结核分枝杆菌持留性有关。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 eis基因 单核巨噬细胞 白介素-10

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MTB对阿米卡星和卡那霉素耐药相关rrs与eis基因突变的研究 被引量：1

8

作者 李可维 赵薇 +4 位作者 刘思洁 杨修军 中莉 刘昕 齐鹏 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第10期1141-1144,共4页

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因... 本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因均发生突变，基因突变率为92．86％；6株菌存在g妇基因突变，突变率为21．43％。60株对照株未发现基因突变。吉林省MTB对Am和Kin存在较高的交叉耐药现象；rrs基因的突变可以作为两者交叉耐药的分子标志，为建立耐Am和（或）Km结核病快速检测技术提供分子基础。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 多药耐药相关蛋白质类 丁胺卡那霉素 卡那霉素 DNA突变分析 rrs基因 eis基因

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结核分枝杆菌EIS基因抑制人肺腺癌A549细胞自噬 被引量：1

9

作者 易敏 周向东 +1 位作者 李升锦 陈维贤 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第2期129-132,共4页

目的构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响。方法采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性;将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP... 目的构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响。方法采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性;将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP-LC3共转染细胞并以自噬诱导剂雷帕霉素处理,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Western blot检测EIS蛋白及自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平。结果成功构建EIS基因重组表达质粒PcDNA3.1-EIS-3flag,该质粒共转染细胞组自噬荧光小点较对照组明显减少(P<0.05),重组质粒表达42 ku看到蛋白并可抑制自噬蛋白表达水平。结论结核分枝杆菌EIS基因可抑制A549细胞自噬的形成,其抑制作用与结核分枝杆菌持留性相关。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 eis基因 自噬

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牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其生物学活性鉴定

10

作者 张通明 宋天琪 +2 位作者 鑫婷 朱鸿飞 贾红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2079-2085,共7页

试验旨在构建牛分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物学活性。采用PCR技术扩增并克隆牛分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261-Mbeis,经双酶切和测序鉴定其正确性,利用电穿孔法将重组质... 试验旨在构建牛分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物学活性。采用PCR技术扩增并克隆牛分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261-Mbeis,经双酶切和测序鉴定其正确性,利用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blotting技术检测牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达,质谱鉴定目的蛋白氨基酸序列。研究结果表明,成功构建了牛分枝杆菌eis基因穿梭表达载体pMV261-Mbeis;生长曲线表明负载重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blotting检测证实了牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中可表达出分子质量约44ku的eis蛋白;质谱检测证明了该蛋白即为牛分枝杆菌eis蛋白。本研究构建的牛分枝杆菌eis基因穿梭表达质粒pMV261-Mbeis在耻垢分枝杆菌中具有生物学活性,为下一步研究表达产物eis蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 eis基因 pMV261 耻垢分枝杆菌

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肠出血性大肠埃希菌EIS基因的克隆与植物表达载体的构建

11

作者 吴仙花 李贺 +5 位作者 施利利 罗峰 夏卜贤 陈晓木 孙守钧 裴忠有 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第5期12-15,共4页

为给利用转基因植物生产出血性大肠杆菌疫苗的研究奠定基础,应用PCR扩增技术从原核表达载体pET-28a(+)-EIS上克隆对出血性大肠杆菌具有保护性免疫的EIS基因序列,并采用T-A克隆方法克隆到pUC18上,通过酶切、连接、转化等技术构建植物表... 为给利用转基因植物生产出血性大肠杆菌疫苗的研究奠定基础,应用PCR扩增技术从原核表达载体pET-28a(+)-EIS上克隆对出血性大肠杆菌具有保护性免疫的EIS基因序列,并采用T-A克隆方法克隆到pUC18上,通过酶切、连接、转化等技术构建植物表达载体,经酶切、测序验证后将构建植物表达载体导入农杆菌中。结果:扩增到约为1 800bp的EIS基因,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1300-EIS,并导入到农杆菌EHA105中。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌 eis基因 植物表达载体 PCR 克隆 疫苗

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