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题名珠子参实时荧光定量PCR体系的建立与优化
被引量：2
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作者
张小海
罗飞
王广
张莹
左天
张绍鹏
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机构
武汉轻工大学生物与制药工程学院
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出处
《武汉轻工大学学报》
2019年第1期27-32,共6页
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基金
湖北省教育厅科学研究计划重点项目(D20181803)
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文摘
实时荧光定量PCR是一种快速用于鉴定基因表达量的方法,广泛用于微生物、植物和动物基因表达分析中。通过选取合适的内参基因β-actin构建珠子参实时荧光定量PCR体系,为珠子参及其近缘种的基因表达分析奠定基础。主要从两个最基本的要素进行体系优化,即引物浓度和模板浓度。优化先从模板浓度开始,设置模板浓度梯度分别为120 ng/μL、24 ng/μL、4. 8 ng/μL、0. 96 ng/μL、0. 192 ng/μL,基于扩增曲线和扩增效率的计算,得出扩增效率最高的一组,即为最优模板浓度。然后进行引物浓度优化,在最优模板浓度基础上设计一系列的引物浓度分别为10μmol/L、5μmol/L、2. 5μmol/L、1. 25μmol/L、0. 625μmol/L,基于扩增曲线和扩增效率,确定最佳的引物浓度。实验结果表明,当模板浓度为120 ng/μL,引物浓度为10μmol/L时PCR的扩增效率最高。在珠子参中首次建立和优化了以β-actin基因作为内参基因的实时荧光定量PCR体系。
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关键词
珠子参
实时荧光定量pcr
pcr体系优化
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Keywords
Panax japonicus var.major
eal-time fluorescence quantitative pcr
optimization of pcr condition.
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分类号
R282
[医药卫生—中药学]
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