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猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光LAMP检测方法的建立 被引量：3
1
作者 谢志勤 张民秀 +11 位作者 谢芝勋 范晴 罗思思 谢丽基 黄娇玲 王盛 曾婷婷 张艳芳 李孟 李丹 邓显文 刘加波 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1220-1228,共9页
本研究为建立一种检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的二重荧光(LAMP)技术,根据已发表的CSFV E2基因和PRRSV NSP2基因序列保守区域,分别设计并合成了2组针对CSFV和PRRSV序列的特异性引物和2条探针,在CSFV探针5′端标记... 本研究为建立一种检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的二重荧光(LAMP)技术,根据已发表的CSFV E2基因和PRRSV NSP2基因序列保守区域,分别设计并合成了2组针对CSFV和PRRSV序列的特异性引物和2条探针,在CSFV探针5′端标记FAM荧光基团,3′端标记BHQ1淬灭基团,PRRSV探针5′端标记CY5.5荧光基团,3′端标记BHQ2淬灭基团。用设计的引物、探针及反应试剂组成反应体系,建立CSFV和PRRSV二重荧光LAMP检测方法。对建立的方法进行特异性、敏感性、干扰性试验,并用临床样品进行验证。结果显示,本研究成功建立了鉴别CSFV和PRRSV的二重荧光LAMP方法,该方法只检测出CSFV(绿色)或PRRSV(红色)或CSFV和PRRSV混感(黄色),而对照毒株则无荧光颜色出现,具有较好的特异性。敏感性检测CSFV或PRRSV的含量浓度,其最低检测浓度均为100 copies/mL,敏感性较好。干扰性结果显示,高低不同的模板浓度不影响本方法的检测扩增,干扰性小。对112份采集的临床样品进行检测,结果,检出CSFV阳性样品41份,PRRSV阳性样品12份,CSFV和PRRSV同时为阳性的样品3份,该结果与荧光定量RT-PCR方法的检测结果一致。上述结果表明,本研究建立的CSFV和PRRSV二重荧光LAMP检测方法具有良好的特异性和敏感性,并具有检测临床样品中CSFV和PRRSV的潜力。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重荧光 LAMP检测方法
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二重荧光RT-LAMP方法鉴别检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒 被引量：13
2
作者 范晴 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期996-1004,共9页
口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了... 口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了2套特异性引物,在每条内引物的5′端标记荧光基团,通过扩增产物颜色判断检测结果。优化反应条件,建立了可同时检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP方法。结果显示,该方法灵敏性高,每个反应最低能够检测到100个拷贝混合模板;特异性好,能在同一个反应管里检测到两种病毒,对其他牛病原体无扩增;干扰性小,扩增效率不受模板浓度影响。本研究建立的口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒二重荧光RT-LAMP方法具有简便、快速、特异、敏感等优点,可用于FMDV和VSV的临床检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 水泡性口炎病毒 二重荧光RT-LAMP 检测
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猪瘟病毒和猪圆环病毒2型二重荧光LAMP检测方法的建立 被引量：6
3
作者 谢志勤 张民秀 +11 位作者 谢芝勋 范晴 罗思思 谢丽基 黄娇玲 王盛 曾婷婷 张艳芳 李孟 李丹 邓显文 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2021年第3期1-6,共6页
建立二重荧光LAMP方法,检测猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)。根据CSFV E2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了2组针对CSFV和PCV2序列的特异性引物和2条标记不同的荧光基团探针,在CSFV探针序列5′端标记FAM荧光基团,... 建立二重荧光LAMP方法,检测猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)。根据CSFV E2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了2组针对CSFV和PCV2序列的特异性引物和2条标记不同的荧光基团探针,在CSFV探针序列5′端标记FAM荧光基团,3′端标记BHQ1淬灭基团,PCV2探针序列5′端标记CY5.5荧光基团,3′端标记BHQ2淬灭基团。以设计合成的引物、探针以及LAMP反应试剂建立二重荧光LAMP检测方法区分CSFV和PCV2,对该方法中的反应体系进行优化,并进行特异性、敏感性和干扰性测试以及临床样品验证测试。结果表明,建立的方法可鉴别CSFV和PCV2,特异性试验显示,该方法只检测出CSFV或PCV2,且与参试的对照病毒无交叉反应,特异性好。该方法最低检测CSFV或PCV2为100拷贝/μL,敏感性好。临床样品的检测结果与荧光定量PCR检测结果一致。建立的CSFV和PCV2二重荧光LAMP检测方法具有良好的特异性和敏感性,可适用于CSFV和PCV2的鉴别检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 二重荧光LAMP 检测
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可视化牛支原体和传染性鼻气管炎二重荧光LAMP诊断方法的建立 被引量：6
4
作者 范晴 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期448-456,共9页
牛支原体(mycoplasma bovis, MB)和牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是引起牛呼吸综合症的主要病原体。本研究根据MB和IBRV的保守基因序列,设计并合成两套特异性LAMP引物,在每条内引物的5’端标记... 牛支原体(mycoplasma bovis, MB)和牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是引起牛呼吸综合症的主要病原体。本研究根据MB和IBRV的保守基因序列,设计并合成两套特异性LAMP引物,在每条内引物的5’端标记荧光基团,通过扩增产物的颜色判断检测结果,建立了用于检测MB和IBRV的二重荧光LAMP检测方法。该方法与其他牛病原体无交叉反应,检测敏感度达100拷贝/μL。应用该方法检测125份样品,MB的感染率为44.8%,IBRV的感染率为13.6%,2种病原混合感染率为1.6%;与OIE推荐的荧光定量PCR检测方法相比,此二重LAMP方法敏感性为94.4%~96.6%,特异性为100%。结果表明该方法灵敏度高,特异性好,重复性好,能同时检测大量样本,可用于MB和IBRV的临床检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 牛支原体(MB) 牛传染性鼻气管病毒(IBRV) 二重荧光LAMP
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