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检测PRRSV及鉴别HP-PRRSV毒株的二重PCR与二重TaqMan荧光定量PCR方法
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作者 陈旭 汤德元 +6 位作者 曾智勇 王彬 袁盛林 廖正波 何松 周飘 毛茵茗 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期316-324,共9页
为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M... 为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M基因和HP-PRRSV Nsp2基因设计特异性引物和探针,优化反应条件建立二重TaqMan荧光定量PCR方法,并评估这2种方法的敏感性、特异性、重复性。敏感性试验结果显示:二重PCR方法的检测下限分别为0.058 ng/μL(PRRSV)和4.7 ng/μL(HP-PRRSV);二重TaqMan荧光PCR方法的检测下限分别为10 copies/μL(PRRSV)和100 copies/μL(HP-PRRSV)。这2种方法与其他猪病病原均不发生非特异性反应,重复性试验结果良好。经131份临床样品检测,可得到PRRSV的阳性率约12.2%(16/131)、HP-PRRSV的阳性率约17.6%(23/131)、二者的混合感染率约8.4%(11/131)。证实,本研究成功建立了二重PCR和二重TaqMan荧光定量PCR检测方法,可为临床上猪繁殖与呼吸综合征的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重pcr 二重taqman荧光定量pcr 鉴别检测
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猪PRRSV和PCV2双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:7
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作者 侯月娥 伍建敏 +1 位作者 何永龙 李中圣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期221-225,共5页
为快速及定量的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2),本研究根据GenBank中登录的PRRSV和PCV2基因组确定了其基因保守序列,分别设计其特异性探针和引物,建立了PRRSV-PCV2双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。特异性试... 为快速及定量的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2),本研究根据GenBank中登录的PRRSV和PCV2基因组确定了其基因保守序列,分别设计其特异性探针和引物,建立了PRRSV-PCV2双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。特异性试验显示该方法对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒及猪瘟病毒的检测结果均为阴性。对PRRSV和PCV2的检测灵敏度均达10拷贝/μl。重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于4%。应用该方法对60份已知临床病料进行检测,结果检出PRRSV和PCV2阳性感染率分别为30.67%和35%,混合感染率为11.67%,与已知结果的符合率为100%。该方法具有敏感、快速、特异、定量、重复性、稳定性好等优点,在用于PRRSV和PCV2感染的快速鉴别诊断的同时,在细胞培养特性以及疫苗生产检测中也具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒II型 双重Man荧光定量pcr
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牛轮状病毒和牛冠状病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 彭志豪 韩荞忆 +7 位作者 崔明江 范葶莉 刘莹 王梦佳 马玉忠 左玉柱 任玉红 范京惠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1009-1013,共5页
为建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCV)的方法,本研究根据GenBank中登录的BRV VP6基因保守序列和BCV N基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测BRV和BCV的双重TaqMan荧光定量PCR方法。... 为建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCV)的方法,本研究根据GenBank中登录的BRV VP6基因保守序列和BCV N基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测BRV和BCV的双重TaqMan荧光定量PCR方法。该方法与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、牛肠道病毒、牛传染性鼻气管炎病毒均无交叉反应,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对BRV和BCV重组质粒标准品的最低检测限分别为41.8拷贝/μL和3.55拷贝/μL,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性较好。利用建立的该方法对本实验室于2019年3月~9月在河北省内采集的72份牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示BRV的阳性率为50.0%(36/72),BCV的阳性率为75.0%(54/72),BRV和BCV共感染率为33.3%(24/72);而常规PCR的上述检测结果分别为47.2%(34/72)、70.8%(51/72),共感染率为29.1%(22/72),二者对BRV和BCV检测结果的阳性符合率分别为97.2%、96.8%,表明该方法可以用于临床样品的检测。本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对BRV和BCV的检测和流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 牛冠状病毒 双重taqman荧光定量pcr
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猪博卡病毒G1基因群和猪流行性腹泻病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 师乾凯 范慧霞 +3 位作者 顾文源 侯林杉 左玉柱 范京惠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期366-370,共5页
为建立同时快速定量检测猪博卡病毒(PBoV)G1基因群和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究参照GenBank登录的PBoV的NP1基因和PEDV的M基因保守序列,设计了引物和探针,经优化反应条件后,建立了能够同时检测PBoVG1基因群和PEDV的双重TaqMa... 为建立同时快速定量检测猪博卡病毒(PBoV)G1基因群和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究参照GenBank登录的PBoV的NP1基因和PEDV的M基因保守序列,设计了引物和探针,经优化反应条件后,建立了能够同时检测PBoVG1基因群和PEDV的双重TaqMan荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示该方法与PCV2、PRV、PDCoV、PRoV和TGEV无交叉反应,敏感性试验结果显示该方法对PBoV、PEDV的质粒标准品检测下限分别为21.8拷贝/μL和31.7拷贝/μL;且组内、组间变异系数均小于4%,重复性好。应用本实验建立的方法对2017年5月~2018年8月,河北省部分地区采集的142份仔猪腹泻样品检测结果显示,PBoVG1阳性率为18.3%(26/142),PEDV阳性率为62.7%(89/142),其中PBoVG1与PEDV共感染率为10.6%(15/142),该方法优于常规PCR方法。本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对PBoV和PEDV的准确检测、病原监测、流行病学调查等均具有重要意义。 展开更多
关键词 猪博卡病毒 猪流行性腹泻病毒 双重taqman荧光定量pcr
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幼虫芽孢杆菌和蜂房蜜蜂球菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 何晓杰 王科珂 +5 位作者 叶尔保勒 阿斯喀 张婕妤 哈森 季新成 王振宝 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第3期51-56,共6页
为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设... 为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对P.larvae和M.pluton的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中P.larvae和M.pluton的定量分析。 展开更多
关键词 美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 欧洲幼虫腐臭病 蜂房蜜蜂球菌 双重taqman荧光定量pcr
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Ⅱ型猪细环病毒及Ⅱ型猪圆环病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 刘东旭 闫满 +2 位作者 尹柏双 苗丽娟 李国江 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期43-47,共5页
为了在临床上能够同时、快速、准确的检测Ⅱ型猪细环病毒(TTSuV2)和Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2),本试验根据GenBank上公布的TTSuV2和PCV2序列中的高度保守片段设计引物,并分别合成标记羧基荧光素试剂(FAM)和六氯荧光素(HEX)报告基团的探针,建... 为了在临床上能够同时、快速、准确的检测Ⅱ型猪细环病毒(TTSuV2)和Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2),本试验根据GenBank上公布的TTSuV2和PCV2序列中的高度保守片段设计引物,并分别合成标记羧基荧光素试剂(FAM)和六氯荧光素(HEX)报告基团的探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价。结果显示,建立的双重荧光定量PCR检测方法对TTSuV2和PCV2的最低检测浓度均为1×10~2拷贝/μL,与猪源的其他病毒性病原体无交叉反应。应用建立的检测方法对采集的300份病料样品进行检测。结果显示,PCV2单独感染率为36.0%,TTSuV2单独感染率为60.0%,2种病毒混合感染率为14.8%。表明本试验建立的双重荧光定量PCR检测方法比普通PCR更加敏感,可应用于临床检测TTSuV2和PCV2,并可分析TTSuV2和PCV2的载量与相关疾病的关系。 展开更多
关键词 Ⅱ型猪细环病毒 Ⅱ型猪圆环病毒 双重荧光定量pcr
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