甲型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)是造成雏鸭死亡率高的主要原因之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失。而其主要衣壳蛋白VP1由于具有多种优势抗原表位,能够刺激机体产生中和抗体,被广泛认为是DHAV遗传变异的重要依据。本文...甲型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)是造成雏鸭死亡率高的主要原因之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失。而其主要衣壳蛋白VP1由于具有多种优势抗原表位,能够刺激机体产生中和抗体,被广泛认为是DHAV遗传变异的重要依据。本文主要介绍了VP1常见的突变位点及其对病毒特性的影响、VP1的改造和VP1的遗传演化,为进一步了解DHAV的遗传进化,疫苗开发与选择提供参考。展开更多
采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠法制备磷酸化绞股蓝皂苷（pGP），然后运用体外细胞培养法比较研究绞股蓝皂苷（GP）和pGP抗DHAV感染鸭胚肝细胞（DEH）的作用。通过MTT法测定了GP和pGP在DEH上的安全质量浓度，并采用先加药物后接种病毒、先...采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠法制备磷酸化绞股蓝皂苷（pGP），然后运用体外细胞培养法比较研究绞股蓝皂苷（GP）和pGP抗DHAV感染鸭胚肝细胞（DEH）的作用。通过MTT法测定了GP和pGP在DEH上的安全质量浓度，并采用先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物和药物与病毒同时感作3种加药方式观察了GP和pGP对DHAV（duck hepatitis A virus）感染DEH的影响。为了进一步验证药物的抗病毒效果，采用实时荧光定量PCR方法比较分析了最有效药物浓度的GP和pGP对DHAV在DEH上的吸附、复制和释放的影响。结果显示：GP和pGP在一定质量浓度下均能促进DEH的生长；GP和pOP都具有较好的体外抗DHAV的作用，且在先加药后加毒和先加毒后加药作用方式下，pGP的抗DHAV的作用效果优于GP；在先加药后加病毒作用方式时，GP和pGP均能有效抑制DHAV的吸附；在先加病毒后加药作用方式时，GP和pGP对病毒吸附鸭胚肝细胞没有明显的作用，但能有效抑制DHAV的复制和释放，且pGP的抑制效果优于GP。结果表明：磷酸化修饰显著提高了GP的抗DHAV作用，pGP有希望被开发成一种新型抗DHAV药物。展开更多
根据鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)的基因序列,设计了2对特异性引物,分别建立检测鸭甲型肝炎病毒血清1型(DHAV-1)和鸭甲型肝炎病毒血清3型(DHAV-3)的RT-PCR方法。通过对PCR扩增条件优化建立了鉴别血清1型和血清3型DHAV...根据鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)的基因序列,设计了2对特异性引物,分别建立检测鸭甲型肝炎病毒血清1型(DHAV-1)和鸭甲型肝炎病毒血清3型(DHAV-3)的RT-PCR方法。通过对PCR扩增条件优化建立了鉴别血清1型和血清3型DHAV的二重RT-PCR检测方法,DHAV-1和DHAV-3目的片段大小分别为751bp和448bp,而且对其他禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验表明该检测方法最低检测量为10 pg的DHAV-1和8 pg的DHAV-3模板。因此,本研究建立的二重RT-PCR检测方法可用于DHAV-1和DHAV-3感染的临床样品的快速鉴别诊断。展开更多
为了解1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鸭胚传代中的变异规律,本研究将LY0801株DHAV-1在鸭胚体内传代至30代,分别对1~5、10、15、20、25、30代病毒进行VP1基因的克隆测序。各代次病毒分别以108copies/胚接种9...为了解1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鸭胚传代中的变异规律,本研究将LY0801株DHAV-1在鸭胚体内传代至30代,分别对1~5、10、15、20、25、30代病毒进行VP1基因的克隆测序。各代次病毒分别以108copies/胚接种9日龄健康鸭胚,测定各组鸭胚的平均死亡时间和病毒在鸭胚尿囊液中的增殖拷贝数。结果表明：DHAV-1在鸭胚传代过程中,不同代次之间出现12个氨基酸的反复变异和同步变异,分别为R43M（K）、T48A、T101S、L169F、T180I、S181L、R183Q、E184A（K）、G187D、D193N、M213R、H219Y;在传代过程中,病毒致死鸭胚的时间逐渐延迟,但病毒在鸭胚内的增殖拷贝数未呈现稳定增长的趋势。展开更多
文摘甲型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)是造成雏鸭死亡率高的主要原因之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失。而其主要衣壳蛋白VP1由于具有多种优势抗原表位,能够刺激机体产生中和抗体,被广泛认为是DHAV遗传变异的重要依据。本文主要介绍了VP1常见的突变位点及其对病毒特性的影响、VP1的改造和VP1的遗传演化,为进一步了解DHAV的遗传进化,疫苗开发与选择提供参考。
文摘采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠法制备磷酸化绞股蓝皂苷（pGP），然后运用体外细胞培养法比较研究绞股蓝皂苷（GP）和pGP抗DHAV感染鸭胚肝细胞（DEH）的作用。通过MTT法测定了GP和pGP在DEH上的安全质量浓度，并采用先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物和药物与病毒同时感作3种加药方式观察了GP和pGP对DHAV（duck hepatitis A virus）感染DEH的影响。为了进一步验证药物的抗病毒效果，采用实时荧光定量PCR方法比较分析了最有效药物浓度的GP和pGP对DHAV在DEH上的吸附、复制和释放的影响。结果显示：GP和pGP在一定质量浓度下均能促进DEH的生长；GP和pOP都具有较好的体外抗DHAV的作用，且在先加药后加毒和先加毒后加药作用方式下，pGP的抗DHAV的作用效果优于GP；在先加药后加病毒作用方式时，GP和pGP均能有效抑制DHAV的吸附；在先加病毒后加药作用方式时，GP和pGP对病毒吸附鸭胚肝细胞没有明显的作用，但能有效抑制DHAV的复制和释放，且pGP的抑制效果优于GP。结果表明：磷酸化修饰显著提高了GP的抗DHAV作用，pGP有希望被开发成一种新型抗DHAV药物。
文摘为了解1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鸭胚传代中的变异规律,本研究将LY0801株DHAV-1在鸭胚体内传代至30代,分别对1~5、10、15、20、25、30代病毒进行VP1基因的克隆测序。各代次病毒分别以108copies/胚接种9日龄健康鸭胚,测定各组鸭胚的平均死亡时间和病毒在鸭胚尿囊液中的增殖拷贝数。结果表明：DHAV-1在鸭胚传代过程中,不同代次之间出现12个氨基酸的反复变异和同步变异,分别为R43M（K）、T48A、T101S、L169F、T180I、S181L、R183Q、E184A（K）、G187D、D193N、M213R、H219Y;在传代过程中,病毒致死鸭胚的时间逐渐延迟,但病毒在鸭胚内的增殖拷贝数未呈现稳定增长的趋势。
