应用单克隆抗体的免疫组织化学法研究雏鸭体内鸭瘟病毒的分布 被引量：5

1

作者 胡薛英 谷长勤 +3 位作者 程国富 周诗其 苏敬良 杨健 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期320-322,共3页

本实验应用了免疫组织化学的单克隆抗体间接酶标染色法,对人工感染鸭瘟病毒雏鸭的组织切片进行染色观察,旨在研究病毒在鸭体内分布,对其进行定位。研究结果显示,鸭的心脏、肝脏、脾、胸腺、肠、法氏囊、胰、肺、肾等组织的细胞浆内均出... 本实验应用了免疫组织化学的单克隆抗体间接酶标染色法,对人工感染鸭瘟病毒雏鸭的组织切片进行染色观察,旨在研究病毒在鸭体内分布,对其进行定位。研究结果显示,鸭的心脏、肝脏、脾、胸腺、肠、法氏囊、胰、肺、肾等组织的细胞浆内均出现了染色的特异阳性反应物。结果表明,鸭瘟病毒广泛分布于感染雏鸭的各种组织器官,并造成一定的组织病理变化。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒 单克隆抗体 间接酶标法免疫组织化学染色 病毒分布 组织病理变化

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鸭肠炎病毒UL6基因的分子特征 被引量：9

2

作者 陈淑红 韩宗玺 +2 位作者 邵昱昊 刘胜旺 孔宪刚 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期391-396,共6页

为了研究鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）UL6的特征，以DEV Clone-03株基因组DNA为模板，用靶基因步移PCR方法扩增得到UL6基因区域2534bp的DNA片段。结果发现，DEVC lone-03 UL6基因由2373个核苷酸组成，编码一条790个氨基酸... 为了研究鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）UL6的特征，以DEV Clone-03株基因组DNA为模板，用靶基因步移PCR方法扩增得到UL6基因区域2534bp的DNA片段。结果发现，DEVC lone-03 UL6基因由2373个核苷酸组成，编码一条790个氨基酸残基组成的多肽。与14株已报道的具有全UL6同源基因序列的疱疹病毒参考株进行比较，DEV Clone-03株与α疱疹病毒的核苷酸和氨基酸同源性较之与8疱疹病毒和γ疱疹病毒要高。氨基酸序列比较显示，DEV Clone-03 UL6基因具有α疱疹病毒UL6同源基因5个保守区域。UL6基因推导的氨基酸系统发育进化树分析发现，DEV Clone-03与α疱疹病毒属一个群，在α疱疹病毒中与马立克氏病病毒（Marek’s disease herpesvirus，MDV）更接近。同时，序列分析发现，在201～222和425～441等氨基酸位，α疱疹病毒参考毒株均有不同程度的缺失，而DEV Clone-03表现出独有的完整性。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 靶基因步移PCR UL6基因 分子特征

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重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展 被引量：4

3

作者 杨明珠 陈晓春 +2 位作者 宋佳诚 侯亚欣 李俊平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期338-351,共14页

重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies viru... 重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)、鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)等。对疱疹病毒基因组序列进行分析显示,其基因组大,复制非必需区域多,容纳外源基因的能力强。同时疱疹病毒具有宿主范围广泛、免疫持续期长、安全性较好及相关基因操作技术成熟等优点。笔者总结了当前构建重组动物疱疹病毒的主要方法,包括传统同源重组技术、细菌人工染色体(BAC)技术、Fosmid文库及CRISPR/Cas9基因编辑技术,简述了各个方法的基本原理及技术特点,比较了各个方法的优缺点,并分析了各个方法的最适运用条件,从而更准确地为研究工作提供理论及技术参考;对外源基因的表达方式进行分析,论证了不同启动子对外源基因表达的调控作用不同,同时对不同疱疹病毒的常用插入位点进行了研究成果的列举总结,并对当前重组病毒HVT、PRV、DEV及ILTV活载体疫苗的研究进展进行总结,对相关生物制品的注册应用信息进行了归纳,介绍了高选择率外源基因及高成功率插入位点,从而为相关生物制品的研制提供理论参考。 展开更多

关键词 重组动物疱疹病毒 活载体疫苗 火鸡疱疹病毒(HVT) 伪狂犬病病毒(PRV) 鸭瘟病毒(dev) 传染性喉气管炎病毒(ILTV)

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鸭瘟病毒疫苗株UL44.5和UL44基因间隔区作为复制非必需区的鉴定 被引量：3

4

作者 赵玉博 陈普成 +6 位作者 胡玉珍 丁蕾蕾 王波 焦晨晨 姜永萍 陈化兰 柳金雄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期795-799,共5页

为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中适合外源基因插入的复制非必需区,本研究利用本实验室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系统,结合E/T克隆技术、LR克隆技术将含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的目的片段,定向插入到含DEV基因组复制非必需区的粘... 为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中适合外源基因插入的复制非必需区,本研究利用本实验室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系统,结合E/T克隆技术、LR克隆技术将含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的目的片段,定向插入到含DEV基因组复制非必需区的粘粒中,该位点位于DEV基因组UL区的UL44.5和UL44之间,拯救获得了重组病毒(rDEV)。通过PCR和荧光显微镜鉴定该重组病毒。结果显示,经PCR扩增,r DEV可以扩增到预期目的片段,观察可见红色荧光,表明RFP基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果显示,重组病毒在CEF中的增殖效率与DEV疫苗株无显著差异。将r DEV以105 TCID50的剂量免疫SPF鸭后,DEV攻毒保护试验结果显示,r DEV和亲本株DEV活疫苗对SPF鸭的保护效率均为100%。本研究筛选到DEV基因组中的一个可供外源基因插入的位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗研制提供依据。 展开更多

关键词 重组鸭瘟病毒 复制非必需区 dev拯救系统

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鸭肠炎病毒感染鸭脾脏的转录组分析 被引量：3

5

作者 吴良涛 郑敏 +4 位作者 华敏 万润 程振涛 周碧君 文明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期425-434,共10页

为探明鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)感染鸭脾脏的转录组情况,本研究以DEV GZ株经腿部肌肉接种50d鸭,于接种后66h采集鸭脾组织样本,提取总RNA,采用Illumina HiSeq 2000TM对试验组和对照组样品进行测序,筛选DEV感染鸭脾脏组织的... 为探明鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)感染鸭脾脏的转录组情况,本研究以DEV GZ株经腿部肌肉接种50d鸭,于接种后66h采集鸭脾组织样本,提取总RNA,采用Illumina HiSeq 2000TM对试验组和对照组样品进行测序,筛选DEV感染鸭脾脏组织的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG信号通路分析。结果显示,差异表达基因共511个,其中表达上调312个,表达下调199个。GO功能分类结果显示,差异表达基因主要涉及氧运输、整合素活化、补体激活等生物学过程,胞外区、血红蛋白复合物、细胞外间隙等细胞组分,氧转运活动、氧结合、核糖体的结构成分等分子功能。KEGG分析表明这些差异表达基因参与ECM受体相互作用、核糖体、CAMs、JAK-STAT信号通路、细胞因子和细胞因子受体相互作用、PPAR信号通路、神经活性配体/受体相互作用信号通路。本研究为深入探究DEV与鸭脾脏组织互作、宿主抗病机制及相关功能基因的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒(dev) 鸭脾脏 转录组测序

原文传递

鸭肠炎病毒感染诱导鸭胚成纤维细胞γ干扰素上调表达及初步机制的研究 被引量：1

6

作者 李思琪 尹海畅 +3 位作者 赵丽丽 王怡平 金建丽 陈洪岩 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第2期86-90,共5页

目的探讨鸭肠炎病毒(DEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)中γ干扰素(IFNγ)的表达情况及初步机制。方法分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF总RNA,反转录成cDNA,使用特异性引物,运用荧光定量PCR方法 ,检测IFNγ及几个相关干扰素刺激基因... 目的探讨鸭肠炎病毒(DEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)中γ干扰素(IFNγ)的表达情况及初步机制。方法分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF总RNA,反转录成cDNA,使用特异性引物,运用荧光定量PCR方法 ,检测IFNγ及几个相关干扰素刺激基因(ISGs)mRNA水平的变化。结果感染DEV的细胞相对于未感染的细胞,IFNγ的mRNA在24 h、36 h、48 h、60 h均显著上调,且相关ISGs包括抗黏液病毒基因(Mx)、DEAD框蛋白50(DDX50,是一种ATP依赖的RNA解旋酶)、2'-5'寡腺苷酸合成酶L(OASL)等基因的mRNA表达水平也均显著上调。结论 DEV感染DEF能够诱导IFNγ产生及相关ISGs表达的上调。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒(dev) 鸭胚成纤维细胞(DEF) γ干扰素(IFNγ) 干扰素刺激基因(ISGs) 上调表达

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表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶（HN）基因重组鸭肠炎病毒的构建

7

作者 梁殊林 李慧昕 +1 位作者 陈洪岩 刘胜旺 《实验动物与比较医学》 CAS 2015年第3期195-201,共7页

目的 构建表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶（HN）基因的重组鸭肠炎病毒（DEV）.方法 利用同源重组技术,在DEV Clone-03基因组中胸苷激酶（TK）基因内部插入新城疫病毒HN基因.以本实验室已构建的rDEV TK-EGFP株为亲本病毒,将病毒基因组... 目的 构建表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶（HN）基因的重组鸭肠炎病毒（DEV）.方法 利用同源重组技术,在DEV Clone-03基因组中胸苷激酶（TK）基因内部插入新城疫病毒HN基因.以本实验室已构建的rDEV TK-EGFP株为亲本病毒,将病毒基因组与转移载体共转染及蚀斑纯化,获得表达新城疫病毒HN基因的重组鸭肠炎病毒.结果 重组病毒经基因水平和蛋白水平的鉴定,证明新城疫病毒HN基因正确插入DEV基因组内部且有效表达;复制动力学和遗传稳定性检测,证明重组病毒rDEV TK-HN滴度略有下降,但复制趋势与亲本病毒一致;在鸡胚成纤维细胞（CEF）和SPF鸡胚连续传代20代,表明HN基因随病毒传代而稳定遗传、表达.结论 利用同源重组技术,对鸭肠炎病毒基因组进行修饰,构建了TK基因缺失表达新城疫病毒HN基因的重组鸭肠炎病毒,该病毒能够携带HN基因稳定遗传和表达. 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒(dev) 新城疫病毒(NDV) 血凝素神经氨酸酶(HN)基因 重组病毒 基因修饰

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DuCV和GPV与DEV三重PCR检测方法的建立及应用

8

作者 田琴 张明华 +3 位作者 周碧君 程振涛 王开功 文明 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期225-230,共6页

根据GenBank中的序列,合成针对鸭圆环病毒(DuCV)REP基因、鹅细小病毒(GPV)NS1基因、鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的3对特异性引物,以病毒的克隆质粒作为模板,进行退火温度、引物终浓度的优化,建立一种能同时鉴别DuCV、GPV、DEV的三重PCR检测... 根据GenBank中的序列,合成针对鸭圆环病毒(DuCV)REP基因、鹅细小病毒(GPV)NS1基因、鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的3对特异性引物,以病毒的克隆质粒作为模板,进行退火温度、引物终浓度的优化,建立一种能同时鉴别DuCV、GPV、DEV的三重PCR检测方法,并检验该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:试验所建立的三重PCR检测方法的最适退火温度为58.5℃,引物DuCV REP、GPV NS1、DEV UL6的最适终浓度分别为0.9、0.6、0.7μmol/L;该方法能够同时扩增出DuCV、GPV和DEV的特异性片段,而不能扩增出NDV、RA、AIV、DHV和TUMV,表明该方法特异性强;该方法对质粒DuCV、GPV和DEV模板的最低检测量分别为1、100、10 fg,表明该方法敏感性好;运用该方法对DuCV+GPV+DEV、DuCV+GPV、GPV+DEV、DuCV+DEV、DuCV、GPV、DEV进行检测,均能扩增出与预期一致的特异性片段,表明该方法重复性好;运用该方法对42份临床样本进行检测,其检出率分别为26.19%、30.95%和19.05%,与单一PCR的检出结果一致,表明该方法能适用于临床样本的检测。试验建立的方法具有快速、简便、特异性强、敏感性好、重复性好等特点,可用于DuCV、GPV和DEV临床样本混合感染的快速诊断及鉴别诊断。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒(DuCV) 鹅细小病毒(GPV) 鸭肠炎病毒(dev) 三重PCR 退火温度 引物终浓度

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鸭肠炎病毒UL51和UL52基因的克隆及序列分析

9

作者 李阳 安瑞 +4 位作者 李慧昕 韩宗玺 邵昱昊 刘胜旺 孔宪刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期689-693,共5页

利用靶基因步行PCR方法扩增得到鸭肠炎病毒(DEV Clone-03)5352bp基因片段,并进行克隆和测序。序列分析发现,该片段包含2个ORF。Blast分析表明,这2个ORF分别与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL51和UL52基因同源,命名为DEV Clone-03UL51和UL52,... 利用靶基因步行PCR方法扩增得到鸭肠炎病毒(DEV Clone-03)5352bp基因片段,并进行克隆和测序。序列分析发现,该片段包含2个ORF。Blast分析表明,这2个ORF分别与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL51和UL52基因同源,命名为DEV Clone-03UL51和UL52,分别编码252和1124个氨基酸。DEV Clone-03UL51和UL52基因排列方式与HSV-1同源基因相一致,为"头对头"的转录方向,两个ORF间有236bp间隔序列。用DNAStar(Megalign)软件分别对这2个ORF和11株α-疱疹病毒参考毒株进行分析,发现DEV Clone-03UL51与HSV-1的氨基酸序列有相对较高同源性,DEV Clone-03UL52与EHV-4同源性相对较高。并且DEV Clone-03UL51基因在α-疱疹病毒中比较保守。与HSV-1UL52蛋白相似,DEV Clone-03UL52蛋白C末端存在锌指结构。系统发育分析表明,DEV Clone-03与α疱疹病毒亚科成员的关系比较保守,与Mardivirus属的成员具有较近的亲缘关系。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 靶基因步行PCR UL51 UL52 序列分析

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蛋白激酶C抑制剂及激活剂对鸭肠炎病毒增殖的影响 被引量：1

10

作者 贺欣薇 苟万里 +3 位作者 张明洋 周碧君 程振涛 文明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期2001-2007,共7页

为进一步探究鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)的致病机理,试验采用鸭蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的抑制剂星形孢菌素(staurosporine,SP)和激活剂佛波醇(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)研究PKC/PKCI能否对DEV的增殖产... 为进一步探究鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)的致病机理,试验采用鸭蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的抑制剂星形孢菌素(staurosporine,SP)和激活剂佛波醇(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)研究PKC/PKCI能否对DEV的增殖产生影响,为阐述DEV致病机理提供新的思路。用SP/PMA处理正常鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblast,DEF)后,实时荧光定量PCR方法检测不同时间段PKC/PKCI基因表达;用DEV病毒液感染SP/PMA处理的DEF后,收集不同时间段培养物,以Reed-Muench法计算DEV半数组织培养感染量(TCID50)值,实时荧光定量PCR方法检测分析DEV NP基因转录水平。结果显示,SP处理对宿主细胞PKC/PKCI基因表达水平无显著影响(P>0.05);而PMA处理可极显著提高宿主细胞PKC基因表达(P<0.01),但对PKCI基因表达水平无显著影响(P>0.05);SP/PMA处理对DEV复制能力影响显著(P<0.05;P<0.01),且在感染前期可显著或极显著降低DEV NP基因的转录水平(P<0.05;P<0.01)。综上所述,SP和PMA对PKC、PKCI基因表达水平的影响效果不同,且都能有效抑制DEV增殖,本试验结果可为DEV的防控及其致病机理的研究提供基础资料。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 蛋白激酶C(PKC) PKC抑制剂 PKC激活剂 增殖

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鸭肠炎病毒感染鸭肝脏组织miRNA表达谱差异分析

11

作者 曾茂芹 刘妍罕 +6 位作者 张黔东 毕文文 叶泥 王艺舟 杨颖 程振涛 文明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4170-4181,共12页

为探究鸭感染鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)后肝脏miRNA表达谱的差异,试验以DEV-GZ株经腿部肌肉接种30日龄麻鸭,于感染后66、90和114 h采集鸭肝脏组织样本,提取组织总RNA,经质检合格后,采用高通量测序技术对对照组和试验组样品... 为探究鸭感染鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)后肝脏miRNA表达谱的差异,试验以DEV-GZ株经腿部肌肉接种30日龄麻鸭,于感染后66、90和114 h采集鸭肝脏组织样本,提取组织总RNA,经质检合格后,采用高通量测序技术对对照组和试验组样品进行miRNA测序,筛选出DEV感染鸭肝脏组织的差异表达miRNA,对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG信号通路分析,并随机选取部分差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR验证。结果显示,鸭感染DEV后66、90和114 h,肝脏组织差异表达miRNAs数量分别为227、225和231个。GO功能注释显示,感染鸭肝脏差异表达miRNA在生物过程分类中主要为细胞过程、单有机体过程和代谢过程类别;在细胞成分分类中主要是细胞、细胞部分和细胞器类别;在分子功能分类中主要是绑定分子功能和催化活性功能类别。KEGG通路富集显示,差异表达miRNA主要涉及PI3K-Akt、JAK-STAT、磷脂酰肌醇信号通路系统、ECM-受体相互作用、MAPK、Wnt、Toll样受体、IL-17、脂质代谢、钙离子信号通路和cAMP等信号通路,其中感染66 h差异表达miRNA主要在生物系统及神经系统中发挥作用;感染90 h主要在内分泌系统及消化系统中发挥作用;感染114 h主要在全身生物、免疫和消化系统等中发挥作用。选取10个差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证,结果与高通量测序结果一致。表明DEV感染对鸭肝脏组织miRNA表达具有显著影响,为从宿主miRNA角度揭示DEV致病机制提供了参考依据。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒(dev) 高通量测序 MIRNA 差异表达

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鸭肠炎病毒UL18基因的转录、表达特征及原核表达蛋白的初步应用

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作者 陈希文 程安春 +5 位作者 汪铭书 常华 陈舜 孙昆峰 朱德康 贾仁勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1479-1486,共8页

为了探讨鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）UL18基因的特性和功能，本研究运用生物信息学软件对DEVUI，18基因及其编码蛋白进行了分析。构建原核表达质粒pET32a-UL18，并将其转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后获得了大小约... 为了探讨鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）UL18基因的特性和功能，本研究运用生物信息学软件对DEVUI，18基因及其编码蛋白进行了分析。构建原核表达质粒pET32a-UL18，并将其转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后获得了大小约为55000的pET32a／DEV-UL18重组蛋白。将该重组蛋白纯化后免疫家免，获得了兔抗pET32a／DEV-UL18重组蛋白高免血清。采用荧光定量RT-PCR和Westernblot对DEV感染鸭胚成纤维细胞（DEF）后uL18基因的转录和表达情况进行检测，采用间接免疫荧光对DEV感染鸭的肠道和食道进行检测。生物信息学分析结果表明，DEVUL18基因大小969bp，编码1条由322个氨基酸残基组成的多肽，含15个潜在的磷酸化位点和2个N-糖基化位点，合15个潜在的B细胞表位；系统进化树分析表明，DEVUL18属于＆一疱疹病毒的1个成员，与MeHV-1亲缘关系最近；密码子偏爱性分析结果表明，若对DEVUL18基因进行外源表达，真核表达系统可能更容易，若选择原核表达系统，则需对宿主表达菌进行选择和条件优化。荧光定量RT-PCR和westernblot结果表明，DEV感染DEF后2h，UL18基因开始转录，感染后12h开始表达，感染24h后转录和表达产物急剧上升，到36和48h后转录和表达产物分别达最大值，之后逐渐下降。间接免疫荧光结果表明，被DEV感染鸭肠道、食道等组织能检测到明显的阳性信号，表明制备的DEVUL18原核表达蛋白及其兔抗多克隆抗体可用于DEV的诊断试剂材料。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 UL18基因 分子特征 原核表达 间接免疫荧光

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