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鸭γ干扰素在体外细胞中抗鸭肠炎病毒作用的研究 被引量：4
1
作者 李思琪 尹海畅 +3 位作者 王怡平 金建丽 陈洪岩 赵丽丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1365-1373,共9页
为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ） cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体p ET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET... 为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ） cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体p ET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET-32a-IFNγ。转染PCAGG-IFNγ于DEF细胞后第24小时,接种鸭肠炎病毒（duck enteritis virus,DEV）。同时将pET-32a-IFNγ在大肠杆菌原核表达系统中进行蛋白表达,并用纯化产物处理DEF细胞,处理后第24小时接种DEV,分别采用Western-blot、TCID50测定方法和荧光定量PCR检测重组蛋白IFNγ对DEV复制的影响,并检测细胞中相关干扰素刺激因子（interferonstimulated genes,ISGs）基因包括抗黏液病毒基因（Myxovirus resistance,Mx）、泛素样2′-5′寡聚腺苷酸合成酶基因（2′-5′oligoadenylatesynthetases-like,OASL）、DEAD框蛋白50基因（DEAD-box protein 50,DDX50）的表达情况。结果发现,无论是真核表达的还是原核表达的重组IFNγ均能抑制DEV的复制,并引起ISGs基因表达的上调。本研究结果为进一步探索鸭IFNγ的抗病毒机制提供了基础数据。 展开更多
关键词 鸭γ干扰素 鸭胚成纤维细胞 鸭肠炎病毒
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基于RNA-Seq筛选新型鸭细小病毒感染鸭胚成纤维细胞的差异表达基因 被引量：1
2
作者 崔元 李晓轩 +1 位作者 孙继国 袁万哲 《现代畜牧兽医》 2018年第5期1-6,共6页
为筛选鸭细小病毒(DPV)感染鸭胚成纤维(DEF)细胞后的差异表达基因,本研究利用DPV接种DEF细胞作为试验组,对照组加入相同体积的2%DMEM,培养至72 h后提取2组样品的总RNA,利用RNA-Seq技术筛选出DEF细胞感染DPV后的差异表达基因,并对其进行... 为筛选鸭细小病毒(DPV)感染鸭胚成纤维(DEF)细胞后的差异表达基因,本研究利用DPV接种DEF细胞作为试验组,对照组加入相同体积的2%DMEM,培养至72 h后提取2组样品的总RNA,利用RNA-Seq技术筛选出DEF细胞感染DPV后的差异表达基因,并对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG分析。结果显示,差异表达水平变化倍数(fold change,FC)在2倍以上的基因共有4 073个,其中上调表达基因1 904个,下调表达2 169个。GO功能分析显示,这些基因主要涉及到炎症反应、免疫反应、蛋白结合、转运活动等功能。KEGG信号通路分析表明,这些差异表达基因参与细胞因子受体相互作用、新陈代谢、TNF、NF-κB、Jak-STAT、Toll样受体等信号通路。应用荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)验证部分差异表达基因的检测结果显示,差异基因的相对表达量与RNA-Seq技术测序结果基本一致,表明了RNA-Seq检测结果的可靠性。本研究为进一步研究DPV的致病作用及宿主抗病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭细小病毒 鸭胚成纤维细胞 转录组测序 差异表达基因
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