鸭胚成纤维细胞培养、传代及保存方法的研究 被引量：8

1

作者 许静 李进军 +3 位作者 熊胜 陈黎 杨倩 卢立志 《中国家禽》 北大核心 2012年第13期9-13,共5页

本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂... 本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂对F1代鸭胚成纤维细胞进行冷冻保存,检测复苏后细胞的生长情况。利用此方法可以获得高活性的鸭胚成纤维细胞,并可成功传至第三代。其中F1代与F2代细胞活力最好,达到90%以上。3种冷冻剂保存的细胞复苏后均与F1代细胞的活力存在明显差异,均小于80%,其中用DMSO冷冻保存的细胞复苏后活力最强,生长密度保持较好。 展开更多

关键词 鸭胚成纤维细胞 体外培养 冷冻保存 细胞活力

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鸭疫里默氏杆菌培养滤液对鸭胚成纤维细胞形态的影响 被引量：6

2

作者 李继祥 唐妤 +4 位作者 黄承洪 赵洁 高继业 丁孟建 汪敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期370-373,共4页

为探索鸭疫里默氏杆菌的致病机制,研究了鸭疫里默氏杆菌培养滤液对鸭胚成纤维细胞形态的影响。结果显示,鸭疫里默氏杆菌AF株的培养滤液能使鸭胚成纤维细胞形态发生变化,表现为细胞膜和细胞质逐渐丢失、核浓缩等;90%(27/30)的鸭疫里默氏... 为探索鸭疫里默氏杆菌的致病机制,研究了鸭疫里默氏杆菌培养滤液对鸭胚成纤维细胞形态的影响。结果显示,鸭疫里默氏杆菌AF株的培养滤液能使鸭胚成纤维细胞形态发生变化,表现为细胞膜和细胞质逐渐丢失、核浓缩等;90%(27/30)的鸭疫里默氏杆菌临床分离菌株能液化明胶,具有致病性,培养滤液具有改变鸭胚成纤维细胞形态的生物学活性;10%(3/30)的菌株不液化明胶,无致病性,培养滤液无改变鸭胚成纤维细胞形态的生物学活性;经硫酸铵盐析、阴离子交换、疏水和凝胶过滤层析,从AF株培养滤液中分离获得分子质量约为55 ku、能水解明胶及改变细胞形态的活性蛋白质。证实,降解明胶的蛋白水解酶是鸭疫里默氏杆菌培养滤液影响鸭胚成纤维细胞形态的活性物质,可能是细菌的毒力因子之一。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 培养滤液 形态学 鸭胚成纤维细胞 致病性

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龙岩山麻鸭胚胎成纤维细胞的培养和鉴定

3

作者 吴恺琪 吴琼 +3 位作者 王蕾 向仕玺 林明昕 吴忠亮 《特产研究》 2024年第3期56-59,共4页

为培养龙岩山麻鸭鸭胚成纤维细胞。本研究选择龙岩山麻鸭10日龄鸭胚组织,采用组织块法和酶消化法进行成纤维细胞培养,利用免疫荧光法对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果表明,培养的鸭胚成纤维细胞12h后呈典型的长梭形,48h后,细胞轮廓清晰... 为培养龙岩山麻鸭鸭胚成纤维细胞。本研究选择龙岩山麻鸭10日龄鸭胚组织,采用组织块法和酶消化法进行成纤维细胞培养,利用免疫荧光法对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果表明,培养的鸭胚成纤维细胞12h后呈典型的长梭形,48h后,细胞轮廓清晰,核仁明显,传至第3代的成纤维细胞经DAPI和绿色荧光标记染色后均呈阳性,具有成纤维细胞的特征。本研究成功从龙岩山麻鸭鸭胚组织中分离培养出成纤维细胞,为后期龙岩山麻鸭开展分子生物学和细胞生物学等研究提供良好的基础。 展开更多

关键词 龙岩山麻鸭 鸭胚成纤维细胞 细胞培养 免疫荧光

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雏鹅新型病毒性肠炎病毒对鸭胚成纤维细胞的适应性及增殖特性 被引量：3

4

作者 陈舜 程安春 +1 位作者 汪铭书 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期885-889,共5页

为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒（NGVEV）体外培养的细胞系，开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞（DEF）适应性和增殖特性的研究。结果表明，NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代，取尿囊液接种DEF，第1代无明显细胞病变；第2... 为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒（NGVEV）体外培养的细胞系，开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞（DEF）适应性和增殖特性的研究。结果表明，NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代，取尿囊液接种DEF，第1代无明显细胞病变；第2代培养至72～96hDEF出现颗粒状缺失、脱落，但无典型蚀斑出现；第3代培养至96～120h，DEF形成大小不等、圆形或椭圆形的典型蚀斑；第5代以后的NGVEV可稳定适应于DEF，典型细胞病变出现于48～72h。取适应DEF的NGVEV感染DEF细胞后制作超薄切片经电镜观察，可见典型的腺病毒粒子，大小为70～90nm。NGVEV在DEF上的TCID5。值随着传代次数增加而增高，由第1代的10^1.23增加到第8代的10^8.02，最高毒价出现于96～144h，96～120h是收获病毒的最佳时间。 展开更多

关键词 雏鹅新型病毒性肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 病毒增殖特性

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鸡马立克病毒野毒株在鸭胚成纤维细胞上的培育及鉴定 被引量：2

5

作者 张艳萍 刘长军 +4 位作者 李晶梅 刘爱玲 施维松 闫福海 秦运安 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期219-222,共4页

用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病（MD）鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞（DEF），蚀斑克隆纯化后，随机选1个单克隆，再接种DEF增殖，获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒（MDV）野毒株，分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ... 用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病（MD）鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞（DEF），蚀斑克隆纯化后，随机选1个单克隆，再接种DEF增殖，获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒（MDV）野毒株，分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ、QQHE和DH。应用PCR技术分别扩增这9株MDV的132bp重复序列（132bpr），发现这9株132bpr均为2个拷贝，符合致病型MDV的特点。从分离的9株MDV中选择5株，人工感染7日龄SPF白来航鸡。试验鸡表现精神萎靡，被毛凌乱，个体瘦小；60d后剖杀，大多可见内脏肿瘤；SY、FY、QQHE3株的MD临床阳性率达100％。 展开更多

关键词 马立克病病毒 鸭胚成纤维细胞 培育及鉴定 132 bp重复序列

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鸭病毒性肠炎病毒致鸭胚成纤维细胞发生凋亡作用的研究 被引量：1

6

作者 郭宇飞 程安春 +4 位作者 汪铭书 贾仁勇 文明 周伟光 陈孝跃 《中国家禽》 北大核心 2007年第14期9-11,共3页

研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNALadder检测表明,... 研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNALadder检测表明,接毒组细胞具有分子量分别为180～200bp及其整数倍的凋亡梯带电泳图谱特征;电镜观察发现,接毒组细胞具有染色质浓缩、边移,胞浆严重空泡化,细胞核严重变形,形成凋亡小体等典型凋亡特征。上述研究结果表明鸭病毒性肠炎病毒具有显著的致鸭胚成纤维细胞发生凋亡的作用。 展开更多

关键词 鸭病毒性肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 细胞凋亡

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抗鸭坦布苏病毒感染的中草药筛选及其作用效果的初步研究 被引量：12

7

作者 王晗晗 嵇辛勤 +4 位作者 阮涌 罗晓宇 龙丹丹 段志强 安而立 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期358-365,395,共9页

为筛选抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)的中草药并探究其抗病毒作用效果,本研究通过检测12种中草药对DTMUV感染鸭胚成纤维细胞细胞(DEF)形态学与病毒抑制率的影响,以及对DTMUV病毒滴度与病毒载量的影响,筛选在DEF中抗DTMUV效果较明显的中草药;采... 为筛选抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)的中草药并探究其抗病毒作用效果,本研究通过检测12种中草药对DTMUV感染鸭胚成纤维细胞细胞(DEF)形态学与病毒抑制率的影响,以及对DTMUV病毒滴度与病毒载量的影响,筛选在DEF中抗DTMUV效果较明显的中草药;采用鸭胚接种法测定筛选出的3种药物(板蓝根、醋五味子、酒黄芩)对DTMUV感染鸭胚死亡率的影响;并选择效果最好的酒黄芩验证其对DTMUV感染雏鸭死亡率、临床症状、体重及组织(心脏、脾脏)中病毒载量的影响。结果显示:鱼腥草、淫羊藿、金银花、板蓝根、绵马贯众、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、连翘、醋五味子、白芍水提物在最佳作用浓度时均能减轻DTMUV感染DEF的CPE,并对DTMUV具有不同的抑制率,其中酒黄芩效果最佳;淫羊藿、白芍、板蓝根、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、醋五味子、连翘能显著降低DEF中DTMUV的病毒滴度(P<0.05);板蓝根、醋五味子、酒黄芩能显著降低DEF中DTMUV的病毒载量(P<0.05);板蓝根、酒黄芩能起到治疗效果,且显著降低鸭胚死亡率(P<0.05),而酒黄芩、醋五味子还能预防病毒感染,且显著降低鸭胚死亡率(P<0.05);酒黄芩能够减轻病鸭临床症状,显著提高病鸭体重(P<0.05),显著降低病鸭死亡率及组织中病毒载量(P<0.05)。综上结果证明板蓝根、酒黄芩、醋五味子在细胞和鸭胚内具有一定抗DTMUV的作用,其中酒黄芩效果最佳,且酒黄芩对DTMUV感染的雏鸭具有治疗作用,可以成为抗DTMUV的潜在药物。 展开更多

关键词 中草药 鸭胚成纤维细胞 鸭坦布苏病毒 抗病毒效果 鸭胚 雏鸭

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鸭γ干扰素在体外细胞中抗鸭肠炎病毒作用的研究 被引量：4

8

作者 李思琪 尹海畅 +3 位作者 王怡平 金建丽 陈洪岩 赵丽丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1365-1373,共9页

为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ） cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体p ET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET... 为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ） cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体p ET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET-32a-IFNγ。转染PCAGG-IFNγ于DEF细胞后第24小时,接种鸭肠炎病毒（duck enteritis virus,DEV）。同时将pET-32a-IFNγ在大肠杆菌原核表达系统中进行蛋白表达,并用纯化产物处理DEF细胞,处理后第24小时接种DEV,分别采用Western-blot、TCID50测定方法和荧光定量PCR检测重组蛋白IFNγ对DEV复制的影响,并检测细胞中相关干扰素刺激因子（interferonstimulated genes,ISGs）基因包括抗黏液病毒基因（Myxovirus resistance,Mx）、泛素样2′-5′寡聚腺苷酸合成酶基因（2′-5′oligoadenylatesynthetases-like,OASL）、DEAD框蛋白50基因（DEAD-box protein 50,DDX50）的表达情况。结果发现,无论是真核表达的还是原核表达的重组IFNγ均能抑制DEV的复制,并引起ISGs基因表达的上调。本研究结果为进一步探索鸭IFNγ的抗病毒机制提供了基础数据。 展开更多

关键词 鸭γ干扰素 鸭胚成纤维细胞 鸭肠炎病毒

原文传递

NF-κB信号通路激活剂LPS/抑制剂SN50对鸭肠炎病毒增殖影响的研究 被引量：4

9

作者 张飘 罗引幸 +8 位作者 李涛 杨霞 曾茂芹 刘妍罕 张扬子 杨颖 温贵兰 程振涛 文明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期302-309,共8页

为探究NF-κB信号通路对鸭肠炎病毒(DEV)增殖的影响,本实验分别以不同终浓度的NF-κB信号通路激活剂LPS(2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL)和抑制剂SN50(25.0μg/mL、50.0μg/mL、75.0μg/mL)处理鸭胚成纤维(DEF)细胞后,采用CCK8法分析... 为探究NF-κB信号通路对鸭肠炎病毒(DEV)增殖的影响,本实验分别以不同终浓度的NF-κB信号通路激活剂LPS(2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL)和抑制剂SN50(25.0μg/mL、50.0μg/mL、75.0μg/mL)处理鸭胚成纤维(DEF)细胞后,采用CCK8法分析LPS或SN50对DEF细胞活性影响;利用不同浓度的LPS或SN50预处理DEF细胞4 h后,再于12 h120 h后收获细胞和上清液(未感染DEV);上述经LPS或SN50预处理细胞4 h后接种DEV(MOI 0.01),12 h120 h后(每间隔12 h)分别收获细胞及上清液,采用荧光定量PCR方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞中NF-κB1基因和DEV NP基因的转录水平;采用ELISA方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞上清液中NF-κB信号通路关键因子(IL-1β、IL-6和MyD88)的表达水平。结果显示:不同浓度的LPS和SN50处理对DEF细胞均无明显毒性作用。荧光定量PCR结果显示,经不同浓度LPS预处理,均能有效提高DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平,其中4.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平最高;而在LPS预处理再感染DEV后,4.0μg/mL LPS和6.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平整体上调(p<0.05),2.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平整体下调(p<0.05);不同浓度的SN50预处理后,未感染和感染DEV的DEF细胞中,均以50.0μg/mL SN50处理的细胞中NF-κB1基因的转录水平下调效果最好(p<0.05)。LPS预处理DEF细胞后感染DEV,12h84 h DEV NP基因的转录水平均受到明显抑制(p<0.01),84 h后2.0μg/mL和6.0μg/mL LPS均会促进DEV NP基因的转录水平;而经SN50预处理DEF细胞后感染DEV,细胞中DEV NP基因的转录水平均显著下降(p<0.01)。ELISA结果显示,经LPS预处理后,不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-6表达量整体稍呈下降趋势(p>0.05),而IL-1β和MyD88的表达则呈无规律变化;经SN50预处理后不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-1β、IL-6和MyD88的表达均无规律变化。以上研究结果表明,不同浓度LP 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 NF-ΚB信号通路 激活剂LPS 抑制剂SN50 增殖

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鸭肿头出血症病毒在鸭胚原代成纤维细胞中增殖特性的研究 被引量：2

10

作者 张娜 程安春 +2 位作者 汪铭书 李传锋 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期746-750,共5页

将鸭肿头出血症病毒（DSHDV）强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚，传3代，取第3代尿囊液接种鸭胚成纤维细胞（DEF），传代培养至有细胞病变出现，并对接毒细胞进行TCID50动态检测和透射电镜观察。结果显示，第1代接毒细胞培养至120h出现变... 将鸭肿头出血症病毒（DSHDV）强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚，传3代，取第3代尿囊液接种鸭胚成纤维细胞（DEF），传代培养至有细胞病变出现，并对接毒细胞进行TCID50动态检测和透射电镜观察。结果显示，第1代接毒细胞培养至120h出现变圆、脱落，并形成少量蚀斑，第2代培养至96～120h，DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑，第3代培养至72～96h，DEF出现典型蚀斑；此后可稳定适应于DEF，典型细胞病变出现于72～96h。DSHDV在DEF上的TCID50值随传代次数的增加而增高，由第1代的10^2.72增加到第10代的10^6.82，最高毒价出现于96h，该点是收获病毒的最佳时间。经透射电镜观察，可见DSHDV粒子呈球形或椭圆形，大小为60～75nm，无囊膜，具有双层衣壳。结果证实，DSHDV强毒株已经适应了DEF，传代后可获得较高的病毒效价。 展开更多

关键词 鸭肿头出血症病毒 鸭胚成纤维细胞 增殖特性

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基于RNA-Seq筛选新型鸭细小病毒感染鸭胚成纤维细胞的差异表达基因 被引量：1

11

作者 崔元 李晓轩 +1 位作者 孙继国 袁万哲 《现代畜牧兽医》 2018年第5期1-6,共6页

为筛选鸭细小病毒(DPV)感染鸭胚成纤维(DEF)细胞后的差异表达基因,本研究利用DPV接种DEF细胞作为试验组,对照组加入相同体积的2%DMEM,培养至72 h后提取2组样品的总RNA,利用RNA-Seq技术筛选出DEF细胞感染DPV后的差异表达基因,并对其进行... 为筛选鸭细小病毒(DPV)感染鸭胚成纤维(DEF)细胞后的差异表达基因,本研究利用DPV接种DEF细胞作为试验组,对照组加入相同体积的2%DMEM,培养至72 h后提取2组样品的总RNA,利用RNA-Seq技术筛选出DEF细胞感染DPV后的差异表达基因,并对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG分析。结果显示,差异表达水平变化倍数(fold change,FC)在2倍以上的基因共有4 073个,其中上调表达基因1 904个,下调表达2 169个。GO功能分析显示,这些基因主要涉及到炎症反应、免疫反应、蛋白结合、转运活动等功能。KEGG信号通路分析表明,这些差异表达基因参与细胞因子受体相互作用、新陈代谢、TNF、NF-κB、Jak-STAT、Toll样受体等信号通路。应用荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)验证部分差异表达基因的检测结果显示,差异基因的相对表达量与RNA-Seq技术测序结果基本一致,表明了RNA-Seq检测结果的可靠性。本研究为进一步研究DPV的致病作用及宿主抗病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭细小病毒 鸭胚成纤维细胞 转录组测序 差异表达基因

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MTS和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖的比较

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作者 裴星朝 周禄强 +1 位作者 叶超 李昂 《中国家禽》 北大核心 2014年第11期14-17,共4页

为探讨MTS法和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖的最佳试验条件,以12~13日胚龄番鸭鸭胚作为胚胎成纤维细胞原代培养的细胞来源,利用传至F2代的胚胎成纤维细胞为研究对象,对比MTS法和CCK-8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光... 为探讨MTS法和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖的最佳试验条件,以12~13日胚龄番鸭鸭胚作为胚胎成纤维细胞原代培养的细胞来源,利用传至F2代的胚胎成纤维细胞为研究对象,对比MTS法和CCK-8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异,研究MTS法和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖活性的最佳检测时间、最佳检测波长,根据细胞数量与OD值的关系曲线确定两种试剂各自的最适细胞浓度。结果表明：MTS法的最佳波长为492 nm、CCK-8法为450 nm,MTS法的灵敏度稍高于CCK-8法;两种方法的最佳检测时间均为加入试剂后4 h;MTS法的最适细胞接种浓度为1.25×103~1×104个/mL,CCK-8法为2.5×103~1×104个/mL。MTS和CCK-8法均能较好地检测番鸭F2代胚胎成纤维细胞的体外增殖情况,相对于CCK-8法,MTS法更加经济,灵敏度更高。 展开更多

关键词 番鸭胚胎成纤维细胞 MTS CCK-8 细胞增殖

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应用电镜技术对一种丹顶鹤病毒的形态学观察

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作者 俞荣林 高锦梁 +1 位作者 雷兆寿 王永坤 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期83-85,共3页

1982年,作者以3只急性死亡丹顶鹤的肝脏病料感染雏鹅和成年鹅,引起雏鹅和部份成年鹅发病,剖检发现死鹅和死鹤的病变相似。而且死鹤的肝脏病料还能使鹅胚死亡,使鹅胚原代成纤维细胞和鸭胚原代成纤维细胞产生明显的病变。本实验的目的是... 1982年,作者以3只急性死亡丹顶鹤的肝脏病料感染雏鹅和成年鹅,引起雏鹅和部份成年鹅发病,剖检发现死鹅和死鹤的病变相似。而且死鹤的肝脏病料还能使鹅胚死亡,使鹅胚原代成纤维细胞和鸭胚原代成纤维细胞产生明显的病变。本实验的目的是利用超簿切片技术对病毒讲行初步鉴定。并观察其形态及发生。 展开更多

关键词 疱疹病毒 丹顶鹤 形态学 电镜

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