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甲型流感病毒H1N1 HA蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究 被引量：3
1
作者 于虹 温晶 +6 位作者 杨裔 俞建萍 佟双 郭彦 赵光宇 寇志华 周育森 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期875-879,共5页
目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1HA并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组... 目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1HA并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA。酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平。结果获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1HA抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体。结论获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 昆虫S2 细胞 HA
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HCV结构蛋白E2在果蝇S2细胞中的稳定表达 被引量：2
2
作者 边奕鑫 何作萍 +2 位作者 杜鹏 王文敬 黎诚耀 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期972-975,共4页
目的获得在果蝇S2(S2)细胞中稳定表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白2(rE2)。方法 PCR扩增截短型E2基因,克隆至pCR2.1-T载体,将测序正确的基因亚克隆至表达载体pMT/Bip/V5-HisC,构建重组表达载体pMT-E2。用FuGENE HD转染试剂将pMT-E... 目的获得在果蝇S2(S2)细胞中稳定表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白2(rE2)。方法 PCR扩增截短型E2基因,克隆至pCR2.1-T载体,将测序正确的基因亚克隆至表达载体pMT/Bip/V5-HisC,构建重组表达载体pMT-E2。用FuGENE HD转染试剂将pMT-E2转染至S2细胞,并筛选抗性细胞,然后诱导目的蛋白表达;以Western-blotting法鉴定表达产物与HCV感染者血清反应性。结果成功构建截短型HCV E2表达载体pMT-E2,并获得到稳定表达rE2蛋白的S2细胞株,Western-blotting法证明rE2具有良好的免疫学活性。结论在S2细胞成功表达的HCV rE2蛋白可用于HCV感染者血清的鉴定,为HCV诊断性抗原的优化和重组疫苗的研发提供了实验材料。 展开更多
关键词 HCV 包膜糖蛋白E2 果蝇S2细胞 蛋白表达
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果蝇S2细胞中高表达荧光素酶重组质粒的构建及活性测定 被引量：2
3
作者 丁洁 周静 袁榴娣 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2006年第6期403-406,共4页
目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒。方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性。结果:构建... 目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒。方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性。结果:构建的重组质粒在S2细胞中荧光素酶的相对活性较pGL3-Control中增加了2.7万倍。结论:成功构建了果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒pGL3-pac。 展开更多
关键词 果蝇S2细胞 荧光素酶 启动子 报告基因 转染
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家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1)在果蝇S2细胞中的表达与糖基化修饰 被引量：1
4
作者 龙梦娴 谭瑶瑶 +4 位作者 刘柯柯 吴玉娇 吕青 潘国庆 周泽扬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1460-1468,共9页
极管蛋白(Polar tube protein)是极管的主要成分,能特异性定位于微孢子虫极管,在微孢子虫侵染宿主过程中发挥重要作用。文中分析了家蚕微孢子虫极管蛋白1中潜在的O-、N-糖基化修饰位点,克隆了家蚕微孢子虫极管蛋白1全基因序列,并将其插... 极管蛋白(Polar tube protein)是极管的主要成分,能特异性定位于微孢子虫极管,在微孢子虫侵染宿主过程中发挥重要作用。文中分析了家蚕微孢子虫极管蛋白1中潜在的O-、N-糖基化修饰位点,克隆了家蚕微孢子虫极管蛋白1全基因序列,并将其插入带有V5和His标签的真核表达载体pMT/Bip/V5-His A中,成功构建了pMT/Bip/V5-His A-NbPTP1重组质粒,经转染果蝇S2细胞后,发现NbPTP1基因能在果蝇细胞中高效表达。此外,Lectin blotting和β-消除反应分析结果表明:果蝇S2细胞内表达的NbPTP1具有O-糖基化修饰特征。以上结果为研究NbPTP1的糖基化修饰特征与其功能之间的关系提供了基础,有助于揭示微孢子虫侵染机制,建立可行有效的微孢子虫病诊断和防治措施。 展开更多
关键词 极管蛋白1 果蝇S2细胞 糖基化 家蚕微孢子虫
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剪接体蛋白SmD3在果蝇S2细胞中对U2A的影响
5
作者 栾晓瑾 颜一丹 +7 位作者 陈霞 谢冰 郑倩雯 王敏 陈万银 乔晨 于骏 方杰 《医学研究杂志》 2019年第12期44-49,共6页
目的探讨小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(small ribonucleoprotein particle protein SmD3,SmD3)表达改变对果蝇Schneider 2(S2)细胞中剪接体成分U2A的影响。方法通过转染构建敲减SmD3基因的S2细胞及其对照模型,并进行干涉效率验证。构建pUAS... 目的探讨小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(small ribonucleoprotein particle protein SmD3,SmD3)表达改变对果蝇Schneider 2(S2)细胞中剪接体成分U2A的影响。方法通过转染构建敲减SmD3基因的S2细胞及其对照模型,并进行干涉效率验证。构建pUAS-attB-SmD3克隆,通过转染实现SmD3基因在S2细胞中的过表达。采用免疫荧光染色检测各组细胞模型中U2A蛋白的表达水平。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞模型中U2A mRNA的表达水平。结果选择干涉效率最优的SmD3 siRNA-1进行实验,与对照组比较,SmD3基因敲减组U2A蛋白及mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。成功构建pUAS-attB-SmD3克隆并在S2细胞中过表达,与对照组比较,SmD3基因过表达组U2A蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P均=0.000)。结论SmD3基因编码的剪接体核心蛋白与U2A可能在果蝇S2细胞中发挥相互拮抗的作用。 展开更多
关键词 小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(SmD3) U2A 剪接体 果蝇S2细胞
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人SNRPN基因在果蝇S2细胞中的功能研究
6
作者 于骏 武云浩 +3 位作者 何辉 李志然 付杨博 陈霞 《交通医学》 2021年第5期437-440,F0002,共5页
目的:构建人SNRPN(hSNRPN)基因过表达质粒,观察在果蝇S2细胞中的作用,为男性不育症的功能保守性研究提供重要工具。方法:构建pUAS-HA-hSNRPN质粒,利用Ub-GAL4质粒在果蝇S2细胞中驱动pUAS-HA-hSNRPN的表达。采用Western blot和免疫荧光... 目的:构建人SNRPN(hSNRPN)基因过表达质粒,观察在果蝇S2细胞中的作用,为男性不育症的功能保守性研究提供重要工具。方法:构建pUAS-HA-hSNRPN质粒,利用Ub-GAL4质粒在果蝇S2细胞中驱动pUAS-HA-hSNRPN的表达。采用Western blot和免疫荧光染色观察HA-hSNRPN融合蛋白的表达情况。通过免疫荧光染色和qRT-PCR检测hSNRPN基因对果蝇RNA剪接体亚基表达水平的影响。结果:本实验成功构建了pUAS-HA-hSNRPN过表达质粒,并利用Ub-GAL4在果蝇S2细胞中驱动HA-hSNRPN融合蛋白的表达。Western blot检测和免疫荧光染色结果均显示HA-hSNRPN融合蛋白在果蝇S2细胞中成功表达。免疫荧光染色结果显示,在果蝇S2细胞中异位表达hSNRPN基因可下调U2A蛋白。qRT-PCR结果提示,异位表达hSNRPN基因可下调果蝇RNA剪接体关键因子的表达水平。结论:本研究成功实现了HA-hSNRPN融合蛋白在果蝇S2细胞中的表达,hSNRPN可竞争性抑制果蝇RNA剪接体亚基的表达水平。 展开更多
关键词 SNRPN 果蝇S2细胞 U2A 剪接体 UAS-Gal4
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双载蛋白对果蝇S2细胞吞噬大肠杆菌的影响
7
作者 孙保贞 朱斐 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第1期52-57,共6页
该文研究了双载蛋白(amphiphysin,Amph)对果蝇S2细胞吞噬大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的影响。在S2细胞吞入E.coli后,Amph m RNA的表达水平明显升高;但用Amph-si RNA处理后的S2细胞,其Amph蛋白质水平显著低于正常和吞噬E.coli的S... 该文研究了双载蛋白(amphiphysin,Amph)对果蝇S2细胞吞噬大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的影响。在S2细胞吞入E.coli后,Amph m RNA的表达水平明显升高;但用Amph-si RNA处理后的S2细胞,其Amph蛋白质水平显著低于正常和吞噬E.coli的S2细胞。透射电镜观察发现,S2细胞可以吞噬热灭活的E.coli,且细胞内存在典型的吞噬小体,而用Amph-si RNA处理的S2细胞内则未发现吞噬小体,说明Amph可能对吞噬体形成起关键作用。Amph-si RNA处理的S2细胞对E.coli的吞噬率显著低于未用Amph-si RNA处理的S2细胞,说明敲低Amph会显著地抑制S2细胞对E.coli的吞噬率。上述结果表明,Amph在果蝇S2细胞吞噬E.coli的过程中起重要的调节作用。 展开更多
关键词 双载蛋白 果蝇 S2细胞 吞噬 大肠杆菌
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EIAV gp45和HIV gp120基因在不同表达系统中表达效果比较 被引量：2
8
作者 崔严方 孙佩龙 刘新奇 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2011年第4期72-78,共7页
马传染性贫血病毒(EIAV)gp45基因编码跨膜蛋白TM,该蛋白在介导病毒与靶细胞之间的融膜过程中起关键作用。gpl20蛋白是人类免疫缺陷病毒(HIV)的外膜糖蛋白,是病毒的主要抗原。通过大肠杆菌原核表达系统和果蝇细胞真核表达系统分别表达gp4... 马传染性贫血病毒(EIAV)gp45基因编码跨膜蛋白TM,该蛋白在介导病毒与靶细胞之间的融膜过程中起关键作用。gpl20蛋白是人类免疫缺陷病毒(HIV)的外膜糖蛋白,是病毒的主要抗原。通过大肠杆菌原核表达系统和果蝇细胞真核表达系统分别表达gp45及gp120,并对其表达效果进行对比,结果表明:在大肠杆菌表达系统中,gp45可成功表达,而gp120却不能表达。在真核表达系统中,gp120成功表达,而gp45却未能表达。通过对这两种系统表达情况效果的比较,发现gp45在原核系统中表达有利,而gp120在真核系统中表达有优势,表明这些基因的表达具有特异性,本研究指导我们根据特定的基因选用适当的表达系统,以便纯化所需的目的蛋白,同时也为深入研究HIV的包膜蛋白的生物学结构特性及推动相关疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 EIAV gp45 HIV GP120 E.coli原核表达 果蝇细胞真核表达 特异性表达
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利用果蝇细胞研究基因表达转录后调控的双报告基因系统的建立
9
作者 张婷 肖强海 +2 位作者 韦有恒 刘勇 马维骏 《现代检验医学杂志》 CAS 2010年第4期22-24,27,共4页
目的 构建能够在果蝇S2＊细胞中检测转录后调控元件对基因表达调控影响的双报告基因系统.方法 首先利用pAc5.1/V5-His c,pGL3-basic和pRL-SV40载体,构建能在果蝇体系中表达萤火虫荧光素酶的报告基因质粒pAc-Fluc,以及用作内参照表达海... 目的 构建能够在果蝇S2＊细胞中检测转录后调控元件对基因表达调控影响的双报告基因系统.方法 首先利用pAc5.1/V5-His c,pGL3-basic和pRL-SV40载体,构建能在果蝇体系中表达萤火虫荧光素酶的报告基因质粒pAc-Fluc,以及用作内参照表达海洋腔肠荧光素酶的质粒pAc-Rluc.将TNF-α基因mRNA的3＇UTR连接至pAc-Fluc的Luc编码区下游构建pAc-Fluc-TNF-α质粒,并与pAc-Rluc共转至果蝇S2＊细胞,检测两种荧光素酶的相对活性.结果 成功构建了能够在果蝇S2＊细胞中组成型表达的双报告基因系统;在TNF-α mRNA 3＇UTR控制下表达的荧光素酶活性比对照有显著下降.结论 可以利用该双报告基因系统在果蝇细胞中研究转录后调控元件对基因的表达调控. 展开更多
关键词 转录后调控元件 双报告基因 荧光素酶 果蝇S2＊细胞
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CG5844基因沉默、过表达果蝇S2胚胎细胞中的剪接体组分表达观察
10
作者 颜一丹 栾晓瑾 +7 位作者 陈霞 谢冰 郑倩雯 王敏 陈万银 乔晨 于骏 方杰 《山东医药》 CAS 2019年第18期1-5,共5页
目的 观察沉默、过表达CG5844基因的果蝇S2胚胎细胞中的剪接体组分(U2A)表达变化。方法 ①沉默CG5844基因表达的果蝇S2胚胎细胞CG5844基因及U2A表达观察 取S2细胞分为观察A、对照A组,分别转染siCG5844-1(CG5844 siRNA,可沉默CG5844基因... 目的 观察沉默、过表达CG5844基因的果蝇S2胚胎细胞中的剪接体组分(U2A)表达变化。方法 ①沉默CG5844基因表达的果蝇S2胚胎细胞CG5844基因及U2A表达观察 取S2细胞分为观察A、对照A组,分别转染siCG5844-1(CG5844 siRNA,可沉默CG5844基因表达)、空白质粒。转染48 h时采用qRT-PCR法检测细胞CG5844基因,免疫荧光法检测细胞U2A。②CG5844过表达的果蝇S2胚胎细胞CG5844基因及U2A表达观察 取S2细胞分为观察B、对照B组,分别转染pUAS-attB-CG5844(可过表达CG5844基因)、载体pUAS-attB。转染48 h时采用qRT-PCR法检测 细胞CG5844基因,免疫荧光法检测细胞U2A。结果 观察A、对照A组CG5844基因相对表达量分别为0.29±0.04、1.00± 0,二者比较, P <0.05;观察A、对照A组U2A相对表达量分别为11.34± 0.58 、1.65±0.23,二者比较, P <0.05。观察B、对照B组CG5844基因相对表达量分别为18.87±2.44、1±0,二者比较, P <0.05;观察B、对照B组U2A相对表达量分别为1.30±0.07、2.17±0.06 ,二者比较, P <0.05。结论 沉默CG5844基因的S2细胞中的U2A表达升高,过表达CG5844基因的S2细胞U2A的表达降低。CG5844可能通过调控U2A的表达,影响剪接体的功能,从而调控果蝇生殖干细胞的发生。 展开更多
关键词 CG5844基因 剪接体组分 剪接体 果蝇S2胚胎细胞 生殖干细胞微环境 生殖干细胞
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