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同时利用AOX1和GAP启动子表达SAM合成酶促进重组毕赤酵母中S-腺苷甲硫氨酸积累 被引量:16
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作者 吕中原 钱江潮 +4 位作者 储炬 郭美锦 王永红 庄英萍 张嗣良 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期24-30,共7页
利用重组毕赤酵母(Pichia pastoris)强化表达S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine,SAM)合成酶(SAM synthetase,SAMS),发酵生产SAM时,胞内SAMS活性和ATP水平是影响SAM合成的重要因素。为了同时保持较高的SAMS活性和ATP供应,我们构建了... 利用重组毕赤酵母(Pichia pastoris)强化表达S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine,SAM)合成酶(SAM synthetase,SAMS),发酵生产SAM时,胞内SAMS活性和ATP水平是影响SAM合成的重要因素。为了同时保持较高的SAMS活性和ATP供应,我们构建了一株既含有AOX1诱导型表达单元,又含有GAP组成型表达单元的双SAMS表达单元P.pastoris重组菌株Gd。它既能受甲醇调控表达SAMS,又能以甘油为碳源表达SAMS。在培养过程中,先是以甲醇诱导SAMS表达,得到较高的酶活,然后在发酵中后期再将碳源换为甘油。这样不但可以维持较高的酶活,而且可以提高胞内ATP含量。实验结果显示,对于同时利用AOX1和GAP启动子表达SAMS的重组菌,可采取甲醇和甘油两阶段补料,该重组菌的SAMS比产率高于组成型重组菌Xg,Gd进入甘油补料期后胞内ATP含量高于诱导型重组菌Ga。双表达单元菌株Gd的SAM产量达到1.41g/L,比诱导型表达SAMS的重组菌株提高了76.3%,比组成型表达SAMS的重组菌株提高了60.2%,。 展开更多
关键词 双表达单元 SAM合成酶 PICHIA PASTORIS
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